Способ диагностики воспалительных заболеваний мочевой системы у детей Советский патент 1992 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится К медицине, а именно к НефролЬгии и иммунологии и может бьггь использовано для дифференциальной диагностики болезней мр- чевой системы (ЁМС).

Ивестны способы дифференциальной диагностики БМС, основанные на микро- скоггической исследований мочевого -

осадка: общий анализ мочи, Каковско- го-Аддиса и др. клиникр-лабораторные методы исследования. -,

Однако способы не точны, потому что не дают возможности достовернр установить у|ррвейь поражения мочевой системы. При помощи этих способов возможен лишь подсчет общего количес,ства лейкоцитов в мочером осадке, но не удается установить их пройсхо кде

.ние,

Известен способ дифференциальной диагностики БМС с помощью 3-стаканной пробы.

Однако спрсоб не точен, так как .деление на три порций условно ив . процессе мочеиспускания невозможно избежать смешивания пузырной и лоханочной порции мочи. А взятие порций мочи путей катетеризации является травматичным и в большинстве случаев источником восходящей инфекции.

Цель изобретения - повышение точ- ности способа.

Спрсоб осуществляют следующим образом.

Утреннюю порцию мочи, собранную в стерильных условиях, центрифугируют 15ммин при 1500 об., осадок ресус- пендируют в .питательной среде (199,

XI

00

.N

Ю ГО

3178 9214

тинина (исходная концентрация 20 мг/мл, конечная - 2 мкг/мл.}.

В контрольные лунки добавляют по

0,02 мл культуральной среды. Культивирование проводят при 37°С во влажной камере содержащей 95% воздуха и 5% С0г1-й планшет культивируют в течение 2 часов,. 11-й 72 часов.За 4

JQ часа-до конца культивирования добавляют меченый3Н-тимидин по 0,02 мл в каждую лунку (конечная концентрация 8 мкки/мл). Клетки с помощью автоматического сборщика переносят на стекло д волоконные фильтры (Сынпор, диаметр пор 1,5 мкм), последовательно промывая планшет 0,85%-ным раствором хлористого натрия, 5%-ным раствором три- хлоруксусной кислоты и 70% этиловым Взвесь клеток пипеточным дозатором20 спиртом. Фильтры помещают в виалы,

содержащие по 5 мл сцинтилляционной жидкости, и п,одсчитырают радиоактив ность проб на бета-счетчике в течение 1 мин. Коэффициент стимуляции определяют по соотношению среднего значения радиоактивности опытных с (фито- гемаггяютинином) и контрольных проб.

ИГЛА), содержащей антибиотики (пенициллин, 200 ед/мл),и дважды отмывают путем центрифугирования по 5 мин при 1000 об. Отмытый остаток, содержащий лейкоциты, ресуспендируют в 2 мл среды следующего состава: среда 199- 50,0 мл,эмбриональная телячья сыворотка - 5,0 мл, глютамин - 0,5 мл 3%-но- го рзсГтбора,пенициллин - 10 тыс.ед.. Подсчитывают концентрацию лейкоцитов в камере Горяёва) .(0,1 мл взвеси разводят в 2 мл,3,5% уксусной кислоты). Для постановки реакции достаточна концентрация клеток 100 тыс. в 1 мл, колебания концентрации в диапазоне от 105 до 5x106 в 1 мл не влияют на результаты реакции.

переносят в лунки круглодонных пластиковых планшет объем лунок - 0 , 25 мл, в каждую вносят по 0,18 клеточной взвеси, раскапывают в 2 планшета по, 6 лунок на каждую пробу). 3 лунки 25 служат контролем, в 3 других добавля- ют по 0,02 мл раствора фитюгемагглю

„ , . ,,, . Число импульсов в опытных пробах

Коэффициент стимуляции (КС) - r.q5 : ;S55-ri5SfpOT :fip5e:

При значении КС более 2 ставится диагноз - пиелонефрит. При КС 1 (среднее значение числа импульсов в опыт-gg ных и контрольных пробах достоверно не отличается) ставится диагноз - инфекции ниже лежащих мочевых т/т.

Способ иллюстрируют следующимиi примерами.40

Пример 1. Больная Б. 6 лет, поступила в клинику с жалобами на из менение цвета мочи, небольшую болезненность в поясничной области Общий анализ крови - паталогии не выявлено 45 общий анал из мочи: уд.вес 1 020,белок,Ы; сахар - отриц, эпителий - 2-3 в поле зрения, лейкоциты 8-10 в поле зрения, Нечипоренко-I порция 7,5x1 С6 лейкоцитов в 1 л. ll порция- 12,5x106в gg 1 л, по Каковскому-Аддису, по Зимниц- кому без патологии, бак, посев мочи- кишечная палочка. Таким образом, по данным первичного обследования нельзя отдифференцировать пиелонефрит и заболевания ниже лежащих мочевых путей.г5 Поставленная реакция бластной- трансформации лимфоцитов мочи (РБТЛМ) коэффициент стимуляции ,5 (через 2k и

72 часа). На основании этого поставлен диагноз - пиелонефрит. При рент- генологическом и ультразвуковом исследовании выявлена характерная для хронического пиелонефрита умеренная деформация чашечно-лоханочной сис те- мы обеих почек.

Пример 2. Больная С. k лет, поступила в клинику с жалобами на изменение цвета мочи. Общий анализ крови без патологии, общий анализ мочи- уд.вес 1020 сахар - отриц, белок 0,033 г/л, лейкоциты 12-15 в поле зре ния, Нечипоренко-I порция -35x106 в 1 л. II-порция -АО«Ю6в 1 л, по Зим- нйцкому и Каковскому-Аддису - без пат тологии,. бак. посев - кишечная палочка. Поставлена РБТЛМ. Коэффициент стимуляции равен 1 через 2 и 72 часа. Начата противобактериальная терапия п поводу инфекции ниже лежащих мочевых путей. При экскреторной урографии и ультразвуковом исследовании патологий чашечно-лоханочной системы не выявле- ;но,что подтверждает правильность диагноза.

5178

Способ, основанный на изучении функциональных свойств лимфоцитов, позволяет достичь поставленной цели - точности диагностики, а использование лимфоцитов мочи, которые в первую очередь отражают наличие воспалительных процессов, а также первыми вступают в реакцию защиты при болезнях мочевой системы, позволяет осущест- вить раннюю диагностику. Способ не инвазивен и позволяет получить объективную информацию при массовых исследованиях больных. Из 125 больных детей у 113 был установлен правильный диагноз.

Формула изобретения

Способ диагностики воспалительных

заболеваний мочевой системы у детей.

5

0

16

включающий забор мочи, выделение лимфоцитов центрифугированием, инкубацию их,о т л ичающийся тем, что, с целью повышения точности способа, лимфоциты инкубируют в двух пробах, одну из них инкубируют с фитогемаг- глютинином, далее в обеих пробах определяют активность лимфоцитов в реакции бласттрансформации, и при оди- наксвой активности в обеих пробах или при снижении активности в пробе с фитогемагглютинином по сравнению с пробой без него диагностируют воспалительные заболевания экстрареналь- ных мочевых путей,а при увеличении активности лимфоцитов в пробе с фитогемагглютинином по сравнению с пробой без него диагностируют пиелонефрит.