Способ Коваленко П.П.подбора антибиотиков для лечения больных с гнойной инфекцией Советский патент 1983 года по МПК A61B10/00 

СП

41

30

Изобретение откосится к области медицины и можат быть примечено в клинической практике для определени вида антибиотика, эффективного для данного больного, и расчета его суточной дозы введения.

Известен способ подбора антибиотиков для лечения больных с гнойной инфекцией путем инкубиро.вания исследуемой крови с разведениями различных антибиотиков l .

Однако такой способ длителен (5-7 суток). Кроме того, по нему нельзя произвести расчет эффективной дозы выбранного вида антибиотика для введения больному.

Целью изобретения является ускорение способа и выбор эффективной дозы антибиотика.

Цель достигается тем, что при осуществлении способа подбора антибисгиков для лечения больных с ГНОЙНОЙ инфекцией путем инкубироваНИН исследуемой крови с разведениями различных антибиотиков после инкубирования крови с антибиотиками вьтделяют лимфоциты, -инку.бируют их с эритроцитами барана, подсчитывают число Т-розеткообразующих лимфоцитов и для лечения отбирают ан1;-:5иотик . под действиемкоторого образуется максимальное число Т-розеткообразуюгдих лимфоцитов по сравнению с исходным фоном.

Способ осуществляют следующим образом.

Из локтевой вены исследуемого забирают 22 мл крови в шприц с 350 ед. 1епарина (2 мл раствора гепарина, разведенного 1:20 средой 199; геппарин без консерванта берут из psiсчета 25 ед.на 1 мл крови)

Гспаринизированнуго кровь разливают по 2 мл в одиннадцать пробирок затем во все, кроме первой, вводят а; ткбиотиг;и различных групп, растворенные в физиологическом растворе, Количество исследуемых препаратов Зависит от целей исследования, данных анамнеза больного и наличия тгре Паратов в лечебном учреждении в мо-мепт исследования. Исследуемые антибиотики берут в минимальных и максимальных терапевтических дозах в расчете на 2 мл крови (например, пенициллин в дозах 1000 и 2000 ЕД на 2 Ю1 крови больного, см. табл. 1).

Содержимое каждой пробирки тщательно перемеиливают, затем инкубируют 30 мин при 37°С.. После этого п.-;оводят выделение лимфоцитов в градиенте плотности фиколл-изопак по м тоду AoRoyum B каждую пробирку прилзк-от физиологический раствор до рйзведения Is3, содержимое тщательно перемешивают. Затем пастеровской пипеткой отсасывают из каждой пробирки по 6 мл разведенной

1гЗ крови и осторожно, не смешивая слоев, наслаивают в одиннадцать цен рифужных пробирок, содержащих по 3 мл смеси фиколл-кзопак (плотность 1,077 г/мл). После этого проводят центрифугирование в горизонтальном роторе при .400 (1500-2000 об/мин) в течение 30 мин. В результате центрифугирования эритроциты с гранулоц тами оседают на дне, а наверху остаются мононуклеарные клетки (.лимфоциты, моноциты). Их собирают пастеровской пипеткой с интерфазной поверхности и ниже ее. Полученную взвесь клеток дважды отмывают физиологическим раствором при 15001700 об/мин, по 10 мин.

По окончании центрифугирования надосадок сливают., в пробирках остается взвесь лимфоцитов. Содержимое ресуспендируют и.производят подсчет клеток в камере Горяева обычным методом в 3%-ном растворе уксусной кислоты. При правильном соблюдении условий разделения из 2 мл периферической крови обычно получают 2-2,510 лимфоцитов.

Оптимальная концентрация клеток .должна составлять .2-2, 5 10 клеток/мл. Полученную взвесь доводят средой 199 до данной концентрации; если клеток меньше, то пробирки центрифугируют и излишек жидкости отсасывают.

Затем К 0,1 мл взвеси отмытых и подсчитанных лимфоцитов приливают 0,1 мл 0,5%-ной взвеси эритроцитов барана, отмытых физиологическим раствором, ресуспендированных в среде 199. Смеси инкубируют 10 мин при , затем центрифугируют при iSOi (750-1000 об/мин) в течение 10 мин и выдерживают при комнатной температ5фе 15 мин. После этого проводят фиксацию розеток (20 мин) 3%-ным раствором глутарового альдегида в фосфатном буфереу рН 7,4. (по 0,05 мл в каждую пробирку) . Фиксацию прекращают добавлением из-бытка физиологического раствора, пробирки центрифугируют 5 мин при 150q, . Надосадок отсасывают, а из осадка готовят мазки на предметных стеклах. Окраска, по Романовском

Во всех препаратах произ.водят подсчет числа Ттрозеткообразующих лимфоцитов. За розетку принимается лимфоцит, окруженн1ый тремя иболее эритроцитами. Считают 300 малых лимфоцитов, а также количество из них розеткообразуницих клеток. Число розеткообразукедих г; клеток по отношению к 300 малым лимфоцитам выражают в процентах (табл. 1).

Если Ф-розеткообразование в отдельных пробах выше фонового исследования на 5 и более процентов, то этот препарат можно рекомендовать для лечения больному, У каждого больного стимуляция Т-лимфоцитов происходит по-разному, чем болше угнетены Т-клеточнь}е факторы иммунитета, тем больще их стимуляция В большинстве случаев она составляет 60-70% по сравнению с 25-35% контроля, т.е. стимуляция в 2 раза больше.

Обычно стимулирующим действием обладают несколько антибиотиков, что затем учитывают при замене одного препарата на другой, более эффективный на данном этапе воспаления .

Кроме количественных изменений учитывают и качественные. В пробах где отмечается высокая стимуляция лимфоцитов,к одной клетке прикрепляется 10 и более эритроцитов (по сравнению с 4-5 в контроле), насчитывают большое количество розеток в виде морул - это -активные лимфоциты. Чем выше процент Т-розеткообразующих лимфоцитов и чем больше .активных кле;ток, тем быстрее наступает положительный лечебный эффект при использовании этого препарата.

Из данных- таблицы 1 видно, что некоторые антибиотики, например, линкомицин, вызывают низкую стимуляцию (12%). При микроскопическом исследовании наблюдается цитотоксическое действие этого антибиотика на лимфоциты (пикноз, вакуолизация ядра и разрушение ядерной оболочки)Если препарат действует лимфоцитотоксически, то при постанорке внутрикожной пробы у больного отмечают гиперергическую реакцию на введение этого антибиотика. Учитывая тот факт,что при выборе препарата в расчет берут те препараты, на которые наблюдают наибольшую стимуляцию Т-лимфоцитов, исключают вещества, обладающие токсическим действием.

После выбора антибиотика производят расчет лечебной суточной стимулирующей дозы препарата. Для этой цели надо знать объем крови бального (1/13 веса тела человека). Суточную дозу стимулирующего препарата определяют по формуле

W-h ,

где X - суточная доза антибиотика для введения больному, ЦЦ, мг;

W - объем крови больного, мл; , h - доза антибиотика, взятая длстимуляции лимфоцитов в

исследуемом объеме крови/ ,ЕД, мг;

V - объем исследуемой крови со стимулирующим антибиотиком, мг.

Для определения разовой дозы пре-Т парата следует суточную разделить на, число введений.

Пример 1. Больной К.41 год, поступил в клинику с жалобами на 5 боли в правой,половине грудной клетки и кашель со скудной мокротой. Температура тела при поступлении 38,4с. Предварительный диагноз: абсцесс верхней доли правого легкого.

Больному были проведены клинические, ;рентгенологические и иммунологичеек ие исследования.

На основании обследования был поставлен диагноз: хронический абсцесс верхней доли правого легкого. Было принято решение о проведении курса антибиотикотерапии с индивидуальным подбором вида и дозы. Под0 бор производился в лаборатории пред. ложенным способом.

Для этого у больного брали кровь из локтевой вены в количестве 22 мл в шприц с гепарином (550 ед).Кровь 5 разделяли по 2 мл в одиннадцать пробирок, приливали антибиотики в минимальной и максимальной дозах из расчета на 2 мл крови (табл. 2).

Первая пробирка контрольная, без .антибиотиков. Содержимое всех пробирок тщательно перемешивали, термостатировали 30 мин при .Затем выделяли лимфоциты в каждой из . пробирок, проводили постановку реакции Т-розеткообразования. Результаты подсчета приведены в табл. 2. Из данных этой таблицы видно, что наибольший процент стимуляции наблюдается на гедтамицин, при инкубировании 2 мл крови с 0,1 мг 0 гентамицина (72%). Следовательно, больному рекомендуется гентамицин.

Суточную дозу генхамицина вычисляют поформуле

5200мл-0,1мг

470мг

х 2 мл

где: 470 мг - суточная доза антибиотика;

5200 мл - объем крови больного; 50 0,1 мг - доза гентамиЦина в объеме крови 2 мл 2 мл - объем крови, исследуемой в пробирке с гентамицином.

55 Согласно ФАРМАКОПЕЕ МЗ СССР гентамицин следует ьводить через 8 ч, разовая доза препарата 160 мг. : Антибиотик вводили в течение семи суток, трижды в ден|. На третьи сутки состояние больного значительно улучшилось. По окончании курса . антибиотикотерапии в комплексе с витаминотерапией жалобы со стороны больного прекратились. Анализ и от 17/Х-79 г. показал: гемоглобин 11,9 гр. %, лейкоциты 6700 в 1 млк; Э-1, П-9,С-54, М-8, Л-28,СОЭ 30 мм/ч, Т-лимфсциты 72 % или Г, 350.10 клеток в 1-мкл крови (норма 1,2-1,310 клеток в 1 мкл крови). Проба на С-реактивный белок отрицательна. Больной выписан в удолетворительном состоянии.

Пример 2. Больной П., 45 лет. поступил в клинику с жалобами на боли в правой пс ловинр грудной клетки, кашель по утрам, умеренное выделение, мокроты с примесью крови, затрудненность дакания. Предварительный диагноз: хронический бронхит с асматическим компонентом.

Больному бьша проведена десенсибилизирующая и витам1 нотер.апия.Улучшения не наступило. Установлен диагноз: двухсторонняя хроническая пневмония, деформирующий бронхит с астматическим компонентом. Было принято решение об индивидуальном подборе вида и дозы антибиотика.

У. больного был произведен забор крови и постановка реакции подбора антибиотиков. Результаты сведены в табл. 3.

Из данных табл. 3 видно, что вы сокая стимуляция отмечается на лин комицин в дозе 0,3 мг (58%), олеандомицин в дозе 0,4 мг (73%) и пенициллин в дозе 2000 ЕД (74%).Наибольший процент стимуляции выявлен при инкубировании с 2000 ЕД пенициллина. Следовательно, лучший леч-ебны эффект : будет при использовании этого препарата. Суточную дозу пенициллина вычисляют по формуле 5700МА-2000ЕЛ

У

.700тыс.ЕЛ

где: 5 млн.700 тыс.ЕД - суточная

стимулирую -.

щая доза введения препарата;

5700 мл - объем крови больного; 2000 ЕД - доза пенициллина в объеме крови 2 мл; 2 мл - объем исследуемой

крови в пробирке с пенициллином.

. Согласно Инструкциям фармакологического Комитета пенициллин необходимо вводить через каждые 3 ч, следовательно, разовая доза для больного 71О тыс. ЕД.

После проведения антибиотикотерапии состояние больного улучшилось, уменьшилась одышка, кашель стал со слизистой мокротой.. .

Больной выписан в удовлетворительном состоянии на амбулаторное лечение.

Использование предложенного способа позволяет в течение 3-4. ч дать рекомендации для введения препарата При постановке реакции не требуется выделение культуры возбудителя инфекции, постановка идет непосредственно с кровью больного. Такой способ дает возможность пpoизвJecти расчет лечебной суточной дозы препарата и получить информацию о напряженности клеточных факторов иммунитета, осуществлять их коррекцию, уменьшить число осложнений, возникающих при лечении антибиотиками.

Таблица 1

„Таблица

СПОСОБ КОВАЛЕНКО П.П. , ПОДБОРА АНТИБИОТИКОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ С ГНОЙНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ путем инкубирования исследуемой крови с разведениями различных антибиотиков, отл ич ающий с я тем, что, с целью ускорения способа и выбора эффективной дозы антибиотика, после инкубирозация крови с антибиотиками выделяют лимфоциты, инкубируют их с эритроцитами барана, подсчитывают число Т-розетко, образующих лимфоцитов и для лечения отбирают антибиотик, под действием которого образуется максималь-ное число Т-розеткообразующих лимi фоцитов.

Кон троль (фоновое исследование) Пенициллин То же Олеандомицин То же Левомицетин .То же Линкомицин То же Гентамицин То же

в ЕД

Кон троль (фоновое исследование) Пенициллина Макролиды Левомицетина Резерва Аминогликоз и

Таблица 3

48