СПОСОБ ХИМИОТЕРАПИИ ОСТРОГО ЛЕЙКОЗА Российский патент 2008 года по МПК A61K31/704 A61K31/675 A61K31/475 A61K31/7048 A61K31/7064 A61K31/196 A61P35/02 G01N33/15 

Изобретение относится к медицине, точнее к онкологии, и может быть использовано при лечении больных злокачественными заболеваниями, острым лейкозом.

Известно исследование чувствительности бластных клеток костного мозга к противоопухолевым химиопрепаратам с помощью МТТ-теста и DiSC-методом в широком диапазоне летальных концентраций, в 4-х разведениях (Кузнецова С.С., автореферат дисс. канд. мед. наук «Определение чувствительности бластных клеток к противоопухолевым химиопрепаратам у детей с острыми лейкозами», Москва, 2004 г.). Основным недостатком данного исследования является многократное разведение летальных доз противоопухолевых химиопрепаратов.

Известен способ исследования чувствительности опухолевых клеток с использованием сверхмалых доз противоопухолевых химиопрепаратов клеток карциномы легких Льюиса (Островская Л.А., Блюхтерова Н.В., Рыкова В.А. и др. // Радиац. Биол. Радиоэкол. - 2003. - 43, №3. - С.273-281). Предлагаемый авторами способ определения чувствительности к противоопухолевым препаратам предусматривает использование двух препаратов - доксорубицина и нитрозомочевины, что не всегда дает положительный эффект. Общеизвестно, что сочетание нескольких химиопрепаратов дает больший эффект по сравнению с монотерапией.

Целью изобретения является возможность индивидуального подбора противоопухолевых химиопрепаратов.

Поставленную цель достигают тем, что пунктат костного мозга в количестве 7-10 мл помещают в гепаринизированную среду 199, выделяют зрелые и бластные клетки белой крови и клетки интерфазы; последние дважды в градиенте фиколл-верографина (ρ 1,077-1,078) осаждали центрифугированием в среде 199 и доводили до концентрации (2-3)×10⁶/мл. Затем их обрабатывали разведенными изотоническим раствором NaCl в концентрациях 1:1 млн следующими препаратами: дексаметазоном, циклофосфаном, винкристином, цитобластином, винбластином, вумоном, цитарабином, этазидом и метотрексатом (последний использовали в разведении 1:1000). Клетки с препаратами инкубировали при 37°С в течение 30-60 минут, после чего клетки отмывали однократным центрифугированием в среде 199 и однократным в фосфатно-солевом буфере (рН 7,3-7,4). Для оценки апоптоза клеток костного мозга ставили анексиновый тест. После оценки апоптоза в схему лечения конкретного больного включали противоопухолевые препараты вызывающие апоптоз у большего числа бластных клеток больного.

Предлагаемый способ лечения острого лейкоза является новым, так как он предусматривает индивидуальный подбор противоопухолевых препаратов, вызывающих наиболее выраженный апоптоз клеток. Он явным образом не следует из уровня медицины в области лечения больных острым лейкозом.

В доступных открытых источниках информации России, стран СНГ и зарубежья указаний на аналогичный способ обнаружено не было.

Разработанный способ является промышленно применимым. Он может быть воспроизведен и многократно повторен в лечебных учреждениях как специализированного, так и общего профиля, располагающих иммунологической лабораторией.

Способ осуществляется следующим образом. У больного в процедурном кабинете в асептических условиях производят забор 7-10 мл костного мозга, пунктат костного мозга помещают в гепаринизированную среду 199, выделяют зрелые и бластные клетки белой крови и клетки интерфазы; последние дважды в градиенте фиколл-верографина (ρ 1,077-1,078) осаждали центрифугированием в среде 199 и доводили до концентрации (2-3)×10⁶/млн. Затем их обрабатывали разведенными изотоническим раствором NaCl в концентрациях 1:1 млн следующими препаратами: дексаметазоном, циклофосфаном, винкристином, цитобластином, винбластином, вумоном, цитарабином, этазидом и метотрексатом (последний использовали в разведении 1:1000). Клетки с препаратами инкубировали при 37°С в течение 30-60 минут, после чего клетки отмывали однократным центрифугированием в среде 199 и однократным в фосфатно-солевом буфере (рН 7,3-7,4). Затем ставят аннексиновый тест и оценивают апоптоз клеток. В схему лечения больного острым лейкозом включают те противоопухолевые препараты, которые вызывают апоптоз у большего числа клеток.

Примерами конкретного выполнения способа могут служить выписки из историй болезни.

1. Выписка из истории болезни №981/ф. Больная А., 70 лет впервые обратилась в отделение химиогормонотерапии Ростовского научно-исследовательского института 19.01.2005 года. Диагноз: Острый лейкоз, недифференцированный вариант. Жалобы при поступлении на общую слабость. Считает себя больной с ноября 2004 года, когда развился подчелюстной лимфоаденит, который лечили хирургическим путем, в общем анализе крови были обнаружены анемия, бластемия. От лечения по месту жительства отказались. При поступлении состояние средней тяжести, самочувствие удовлетворительное. Кожа, слизистые бледные, геморрагический синдром не выражен. Периферические лимфоузлы, печень, селезенка не увеличены.

OAK 19.01.2005. гемоглобин 78 г/л, эритроцитов 3,0·10¹²/л, тромбоцитов 192 тысячи, лейкоцитов 3,4·10⁹/л, п/я 6%, с/я 9%, эозинофилов 2%, базофилов 0%, моноцитов 12%, лимфоцитов 71%, СОЭ 67 мм/час. Миелограмма 20.01.05 - пунктат костного мозга беден клеточными элементами, отмечается угнетение всех ростков кроветворения. Обнаружены бластные клетки 23%.

При определении активности апоптоза бластных клеток костного мозга была выявлена активация апоптоза под влиянием сверхмалых доз следующих препаратов: дексаметазона у 29% клеток, тенипозида у 28% клеток, циклофосфана у 17% клеток. Ориентируясь на данные исследования в схему химиотерапии были включены выше названные препараты: 1, 3 и 5 курсы терапии включали - циклофосфан 600 мг в/в в 1-й день, цитарабин 100 мг в/в в 1-5 дни, дексаметазон 10 мг/сутки через рот 1-7 дни; 2, 4 и 6 курсы - тенипозид 100 мг в/в капельно в 1-3 дни, цитарабин 100 мг в/в в 1-5 дни, дексаметазон 10 мг/сутки через рот в 1-5 дни. Лечение проходило без осложнений, дало положительный эффект, была достигнута клинико-гематологическая ремиссия, которая сохраняется до настоящего времени.

2. Выписка из истории болезни №571/ф. Больная X., 4 лет впервые обратилась в отделение детской онкологии Ростовского научно-исследовательского онкологического института 17.01.2005 года. Диагноз: Острый лимфобластный лейкоз. L1, "common" вариант, группа стандартного риска.

Жалобы при поступлении на боли в горле при глотании, частые «простудные заболевания». Девочка больна с августа 2004 года, когда при обследовании по поводу катаральных явлений, в общем анализе крови обнаружен лимфоцитоз. В декабре 2004 года отмечалось повышение температуры тела до 38-40°С, катаральные явления, ангина, стоматит. Получала антибактериальную терапию. В анализах крови нарастала анемия, сохранялся лимфоцитоз. При поступлении состояние средней тяжести, самочувствие удовлетворительное. Отмечались гиперемия зева, гипертрофия небных миндалин. Периферические лимфоузлы, печень, селезенка не увеличены. Геморрагический синдром не выражен.

OAK от 18.01.2005. гемоглобин 122 г/л, эритроцитов 4,0·10¹²/л, тромбоцитов 208 тысячи, лейкоцитов 3,8·10⁹/л, бластов 0,5%, миелоцитов 0,5%, п/я 2,5%, с/я 1%, эозинофилов 0%, базофилов 0%, моноцитов 7%, лимфоцитов 88,5%, СОЭ 31 мм/час. Миелограмма 18.01.05 - пунктат мономорфный, бластных клеток 82,6%, L1 (ФАБ) лимфобластный вариант острого лейкоза. Иммунофенотипирование костного мозга 18.01.05 - Common-ALL. Выявлены в высоком проценте маркеры активированных и стволовых клеток.

УЗИ патологических образований исследуемых органов брюшной полости, забрюшинного пространства, шейно-надключичных областей не выявило. Рентгенография грудной клетки 21.01.05 патологии не выявила.

Исследование активности апоптоза показало, что под влиянием сверхмалых доз активность апоптоза увеличивалась в 11% клеток при инкубации метотрексата, в 15% - циклофосфана.

С 28.01.2005 года начата полихимиотерапия, с включением препаратов: преднизолон 35 мг через рот в 1-36 дни, винкристин 0,9 мг в/в, рубомицин 18 мг в/в в 8, 15, 22, 29 дни, аспарагиназа 6000 ЕД в/в в 12, 15, 18, 21, 24, 27, 30, 33 дни; 6-меркаптопурин 36 мг через рот в 36-64 дни, циторабин 45 мг в/в в 37, 38, 39, 40, 45, 46, 47, 48, 52, 53, 54, 55, 59, 60, 61, 62, дни, циклофосфан 600 мг в/в капельно в 36, 64 дни лечения.

Контрольной исследование костного мозга на 15-й день 17.02 - бластов 13,0%, на 33-й день 09.03 - костный мозг клеточный, представлен всеми ростками кроветворения, бластов 1,6%.

С 25.04.2005 года начат упрочивающий ремиссию 2 курс полихимиотерапии, включавший в себя: 6-меркаптопурин 15 мг через рот в 1-56 дни курса, метотрексат 620 мг в/в капельно в 8, 22, 36, 50 дни. С 13.07.2005 года проведен 3 курс химиотерапии, включавший в себя: дексаметазон 6 мг через рот в сутки в 1-22 дни курса, винкристин 0,9 мг в/в, доксорубицин 18 мг в/в в 8, 15, 22, 29 дни, аспарагиназа 6000 Ед в/в капельно в 8, 11, 15, 18 дни, тиогуанин 36 мг через рот в 30-49 дни, циклофосфан 600 мг в 30 день, циторабин 45 мг в 32, 33, 34, 35, 45, 46, 47, 48 дни. Химиотерапию перенесла удовлетворительно, без тяжелых побочных эффектов. В настоящее время девочка находится в клинико-гематологической ремиссии на поддерживающей терапии. Контрольное обследование 20.12.2005 года, через 3 месяца после окончания интенсивной полихимиотерапии подтвердило клинико-гематологическую ремиссию.

Технико-экономическая эффективность «Способа химиотерапии острого лейкоза» позволяет:

- Использовать в схеме лечения противоопухолевые химиопрепараты, вызывающие наибольший повреждающий эффект на опухолевые клетки конкретного больного.

- Максимально уменьшить побочные токсические проявления химиопрепаратов.

- Увеличить период ремиссии и исключить применение дополнительных лечебных воздействий в этот период.

- Улучшить качество жизни больного острым лейкозом.

Изобретение относится к медицине, онкологии и касается химиотерапии острого лейкоза. Вначале у больного, подлежащего химиотерапии, выделяют бластные клетки к клетки интерфазы белой крови пунктата костного мозга. Затем осаждают их центрифугированием в среде 199 и доводят до концентрации (2-3)×l0⁶/мл. Затем проводят инкубацию выделенных клеток с каждым из химиопрепаратов, выбранным из группы: дексаметазон, циклофосфан, винкристин, тенипозид, этопозид, цитарабин, предварительно разведенных изотоническим раствором до концентрации 1:1000000, и метотрексат, предварительно разведенный изотоническим раствором до концентрации 1:1000. После этого осуществляют повторное центрифугирование обработанных химиопрепаратами клеток в среде 199, ставят аннексиновый тест. В схему лечения включают те препараты, которые вызвали наибольший процент апоптоза клеток. Способ позволяет максимально уменьшить побочные, токсические проявления химиопрепаратов и усилить апоптоз опухолевых клеток за счет индивидуального подбора химиопрепаратов для больного, увеличить период ремиссии, исключить использование дополнительных лечебных воздействий.

Способ химиотерапии острого лейкоза, отличающийся тем, что вначале у больного, подлежащего химиотерапии, выделяют бластные клетки и клетки интерфазы белой крови пунктата костного мозга, осаждают их центрифугированием в среде 199, доводят до концентрации (2-3)·10⁶/мл, затем проводят инкубацию выделенных клеток с каждым из химиопрепаратов, выбранных из группы: дексаметазон, циклофосфан, винкристин, тенипозид, этопозид, цитарабин, предварительно разведенных изотоническим раствором до концентрации 1:1000000, и метотрексат, предварительно разведенный изотоническим раствором до концентрации 1:1000, затем осуществляют повторное центрифугирование обработанных химиопрепаратами клеток в среде 199, ставят аннексиновый тест и включают в схему лечения те противоопухолевые препараты, которые вызвали наибольший процент апоптоза клеток.