СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ МИЕЛОДИСПЛАСТИЧЕСКОГО СИНДРОМА Российский патент 2003 года по МПК G01N33/70 G01N33/74 

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и может быть использовано для прогнозирования течения миелодиспластического синдрома.

Миелодиспластический синдром (МДС) представляет собой гетерогенную группу клональных прогрессирующих заболеваний системы крови с высоким риском трансформации в острый лейкоз (ОЛ). На основании клинико-морфологических критериев, согласно франко-американо-британской классификации (Bennet J.M. et al Proposals for the classification of myelodysplastic syndromes /Brit. J. Haemat. - 1982. - Vol. 51.- P. 189-199), диагностируют пять форм МДС - рефракторную анемию (РА), РА с кольцевидными сидеробластами (РАС), РА с избытком бластов (РАИБ), РА с избытком бластов в трансформации (РАИБТ) и хронический миеломоноцитарный лейкоз (ХММЛ).

В настоящее время для прогнозирования течения различных вариантов МДС применяются в основном клинические, морфо-гистологические и цитогенетические критерии (Bennet J.M. Meeting highlights: therapeutic strategies and supportiv care in myelodysplastic syndromes: yesterday, today and tomorrow /Leuk. Res. - 1998. - May;22 Suppl 1:S1-2), на основании которых выделяют относительно благоприятные (РА и РАС) и неблагоприятные (РАИБ и РАИБТ) формы МДС. Одним из недостатков данного способа является отсутствие информативных критериев прогнозирования течения каждой конкретной нозологической формы МДС и особенно РАИБ и РАИБТ.

Известно, что определение биохимических маркеров клеточной пролиферации полиаминов (ПА): спермина, спермидина и путресцина, позволяет использовать их для ранней оценки прогноза течения ОЛ (Минаков В.Н. и соавт. Биохимические и цитохимические критерии прогнозирования течения острого лимфобластного лейкоза у детей /Гематол. и трансфузиол.-1991- 10- С. 9-10).

Наиболее легкий из ПА - путресцин (м.м.-88,15) характеризует инициализацию пролиферативных процессов. Установлена взаимосвязь общего уровня ПА мочи и течения ОЛ, известная из АС СССР 1543997 от 03.08.87. кл. G 01 N 33/48. Недостатком способа по приведенному АС является использование для прогнозирования течения ОЛ общего уровня ПА мочи, а не отдельных фракций ПА.

Нами впервые изучено содержание путресцина в моче больных различными вариантами МДС. Полученные в результате исследования данные послужили основанием к подаче заявки на предполагаемое изобретение.

Цель изобретения - ускорение и повышение точности прогнозирования течения миелодиспластического синдрома до начала лечения заболевания.

Поставленная цель достигается следующим образом: в моче больного до начала лечения определяют уровень путресцина. Для этого 3 мл мочи пациента, профильтрованной через бумажный фильтр, помещают в ампулу с равным объемом 6 н. НСl, запаивают и выдерживают в сушильном шкафу при постоянной температуре 110^oС в течение 3 ч. Затем остывшую ампулу вскрывают, содержимое переливают в стеклянный бюкс, доводят рН мочи до 9.8 раствором едкого натра, добавляют 2 г солевой смеси (62,5 г Na₂SO₄ и 9 г Na₃PO₄) и 5 мл н-бутилового спирта. Бюкс закрывают и ставят на шюттель-аппарат для встряхивания в течение 2 ч, после чего содержимое бюкса переливают в пробирку и центрифугируют 20 мин при 3000 об/мин. Бутаноловую фракцию отсасывают с помощью шприца и переносят в фарфоровую чашку, добавляют 2 капли 6 н. НСl и выпаривают на водяной бане. Сухой остаток растворяют в 0,2 мл 0,1 н. НСl, 20 мкл этого раствора наносят на полоску хроматогрофической бумаги, помещенной в прибор для электрофореза. Электрофорез проводят в лимоннокислом буфере (рН 3,6) при напряжении 480 В и силе тока 50 мА в течение 45 мин. Высушенные в течение 30 мин при 70^oС фореграммы орошают нингидриновым красителем (100 мг ацетата кадмия растворяют в 10 мл дистиллированной воды, добавляют 100 мл ацетона, 1 г нингидрина, 5 мг концентрированной уксусной кислоты), вновь высушивают. Полиамины (в том числе и путресцин) обнаруживают в виде розовато-фиолетовых пятен, которые вырезают и помещают в химические пробирки, которые заливаются 5 мл элюирующего раствора (500 мг ацетата кадмия растворяют в 25 мл дистиллированной воды, добавляют 100 мл этилового спирта и 125 мл концентрированной уксусной кислоты). После выдерживания в течение 45 мин в темноте измеряют величину поглощения растворов на спектрофотометре при длине волны 505 нм или ФЭКе при зеленом фильтре. Содержание путресцина рассчитывают по калибровочной кривой, построенной с использованием стандартного путресцина. Расчеты производят по формулам:

где Кр - количество кретинина в ммоль;
Eoп - экстинция опытной пробы;
Ест - экстинция стандарта креатинина;
113 - молекулярная масса креатинина

где а - количество путресцина в моче, определенное по калибровочной кривой;
V - объем мочи;
Кр - содержание креатинина;
11,3 - коэффициент путресцина.

На основании проведенных исследований установлено, что уровень путресцина в моче пациента с МДС является критерием для определения прогноза течения миелодиспластического синдрома: при содержании путресцина в моче менее 3,12 мкмоль/ммоль креатинина определяют относительно благоприятное течение заболевания, а при значении более 4,84 мкмоль/ммоль креатинина - неблагоприятное.

Пример 1. Больной М., 67 лет, наблюдался в гематологической клинике с 26.04.95. На основании комплексного обследования установлен диагноз: миелодиспластический синдром, рефракторная анемия с избытком бластов.

При поступлении состояние больного средней степени тяжести. Умеренная бледность кожи и слизистых. Субфебрильная гипертермия, слабость, утомляемость. В анализе крови: Нb - 67 г/л, Эр. - 2,2 х 10¹²/л, Лек. - 5,8 x 10⁹/л, мбл - 1%, м - 1%, м/м - 1%, п/я - 5%, с/я - 61%, лф - 30%, мон - 1%, тромб. - 200 х 10⁹/л, СОЭ - 60 мм/ч. В миелограмме повышено содержание миелобластов до 7,6%. Уровень путресцина в моче составил 2,76 мкмоль/ммоль креатинина, что позволяет прогнозировать относительно благоприятное течение заболевания. Проведена монохимиотерапия 6-меркаптопурином, после которой получена полная клинико-гематологическая ремиссия. На длительной поддерживающей терапии тем же препаратом продолжительность жизни больного составила 42 месяца.

Пример 2. Больная Е., 73 лет, наблюдалась в гематологической клинике с 15.03.99. На основании комплексного обследования установлен диагноз: миелодиспластические синдром, рефракторная анемия с избытком бластов.

При поступлении состояние больной средней степени тяжести Бледность кожи и слизистых. Субфебрильная гипертермия, слабость, утомляемость. В анализе крови: Нb - 68 г/л, Эр. - 2,5 х 10¹²/л, Лек. - 6,0 х 10⁹/л, м - 3%, м/м - 2%, п/я - 4%, с/я - 38%, лф - 28%, мон - 15%, тромб. - 120 x 10⁹/л, СОЭ - 80 мм/ч. В миелограмме повышено содержание миелобластов до 15,8%. Уровень путресцина в моче составил - 13,2 мкмоль/ммоль креатинина, что позволило прогнозировать неблагоприятное течение заболевания. На фоне монохимиотерапии 6-меркаптопурином заболевание продолжало прогрессировать - нарастал процент миелобластов в периферической крови и костном мозге и увеличивалась зависимость от гемотрансфузий. Несмотря на последующую смену химиотерапии больная умерла через 4,5 месяца после дебюта заболевания.

Изобретение относится к области медицины, в частности к гематологии. Способ обеспечивает ускорение и повышение точности прогнозирования течения миелодиспластического синдрома до начала лечения заболевания. Проводят спектрофотометрическое исследование мочи, при этом до начала лечения в моче больного определяют содержание путресцина и при значении этого показателя менее 3,12 мкмоль/ммоль креатинина прогнозируют относительно благоприятное течение, а при значении более 4,84 мкмоль/ммоль креатинина - неблагоприятное течение заболевания.

Способ прогнозирования течения миелодиспластического синдрома, включающий спектрофотометрическое исследование мочи, отличающийся тем, что до начала лечения в моче больного определяют содержание путресцина и при значении этого показателя менее 3,12 мкмоль/ммоль креатинина прогнозируют относительно благоприятное течение, а при значении более 4,84 мкмоль/ммоль креатинина - неблагоприятное течение заболевания.