СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ЛЕЙКОЗОВ Российский патент 1995 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности гематологии, и предназначено для прогнозирования течения лейкозов.

Известен способ диагностики прогноза течения лейкозов на основании использовании цитохимических методик. Однако достоверность прогнозирования течения острых лейкозов на основании ряда цитохимических показателей невысока 37,8% (Ковалева Л.Г. Острые лейкозы. М. Медицина, 199с 272 с). Кроме того, применение в практическом здравоохранении цитохимических методик усложняется отсутствием необходимых для этой цели дефицитных дорогостоящих реактивов.

Целью изобретения является повышение точности прогнозирования течения лейкозов.

Достигается это тем, что определяют в условиях краткосрочных культур жизнеспособность бластных клеток путем исследования их двигательной активности, и при сохранении двигательной способности у более чем 20% бластных клеток через 24 ч прогнозируют неблагоприятное течение заболевания, а при наличии менее 15% подвижных бластных клеток благоприятное течение лейкоза.

Способ осуществляется следующим образом. Готовят стерильные пробирки с парафиновыми стенками, для этого профильтрованный через фильтровальную бумагу парафин разливают в чистые лабораторные пробирки в количестве 5 мл, пробирки закрывают ватными пробками и бумажными колпачками и стерилизуют в автоклаве или сушильном шкафу, затем в горячем виде стенки пробирок обкатываются находящимся в них расплавленным парафином, пробирки охлаждаются и помещаются в сосуд со льдом, где они находятся во время всей процедуры забора венозной крови больного в количестве 3-5 мл без добавления консерванта, полученная венозная кровь отстаивается в течение 30 мин в термостате при температуре +37^оС, после чего образовавшийся слой плазмы с содержащимися в ней лейкозными клетками разливается стерильной пастеровской пипеткой в стерильные камеры для культивирования, которые представляют собой стеклянную пластинку размером 4х4 см, высотой 2-3 мм, в которой просверлено круглое отверстие диаметром 19-20 мм или 12-14 мм, что соответствует площади, которую можно закрыть покровным стеклом размером 24х24 мм или 18х18 мм, покровное стекло, соответствующего размера, прикрепляют к одной стороне отверстия камеры смесью зубоврачебного воска и канифоли в соотношении 4:1 и оно служит нижней поверхностью камеры, на которую помещается 1 мл аутологичной плазмы больного, содержащей бластные клетки, верхнее отверстие камеры указанным выше способом закрывается вторым покровным стеклом, приготовленную для культивирования камеру помещают в термостат, где она содержится 24 ч при температуре +37^оС, изучение двигательной способности бластных клеток возможно проводить с помощью инвертированного или обычного светового микроскопа, снабженных термокамерой, позволяющей поддерживать температуру культивирования +37^оС, при микроскопии культуры через 24 ч с момента культивирования подсчитывают количество жизнеспособных бластных элементов, т.е. не утративших двигательную способность, анализируя в каждом случае не менее 100 бластных клеток.

Способ прошел экспериментально-клиническую апробацию в 90 случаях.

Примером конкретного осуществления могут служить истории болезней следующих больных.

Больной В-ко, амбулаторная карта N 30793, 1955 г.р. диагноз острый лейкоз, лимфобластный вариант, I острый период установлен на основании комплексного клинико-гематологического обследования в октябре 1989 г, в гемограмме эритроциты 2,0х10¹²/л, Нв 90 г/л, тромбоциты 60,0х10⁹/л, лейкоциты 16,0х10⁹/л, бластные клетки 89% сегментоядерные лимфоциты 10% сегментоядерные нейтрофилы 1% при определении жизнеспособности бластных элементов предлагаемым способом отмечено сохранение подвижности у 13% клеток, что предполагало благоприятное течение заболевания, через 2 мес на фоне проведения химиотерапии у данного больного достигнута полная клинико-гематологическая ремиссия, что было подтверждено данными миелограммы, продолжительность ремиссии 2,5 года, таким образом данный случай является информативным для прогнозирования благоприятного течения лейкоза на основании определения жизнеспособности бластных клеток путем исследования их двигательной активности в краткосрочных культурах.

Больная Г-ая, история болезни N 01628, 1935 г.р. диагноз острый лейкоз, миелобластный вариант, I острый период установлен по данным клинико-гематологического обследования 10.02.1992 г. в гемограмме эритроциты 2,4х10¹²/л, Нв 86 г/л, тромбоциты 82,2х10⁹/л, лейкоциты 36,4х10⁹/л, палочкоядерные нейтрофилы 2% сегментоядерные 10% лимфоциты 12% моноциты 2% бластные клетки 74% определение жизнеспособности бластных элементов путем исследования их двигательной активности показало наличие подвижности у 24% бластов, что предполагало неблагоприятное развитие лейкозного процесса, больная скончалась через 13 дней с момента диагностирования заболевания, отмечалась неэффективность проводимой химиотерапии и прогpессирование заболевания, таким образом данный случай является показательным для прогнозирования неблагоприятного течения лейкоза заявленным способом.

Больной Т-ко, история болезни N 700995, 1948 г.р. в 1989 г установлен диагноз хронический миелолейоз, проводилась химиотерапия миелосаном, в апреле 1992 г у больного развился бластный криз хронического миелолейкоза, в гемограмме эритроциты 3,8х10¹²/л, Нв 100 г/л, тромбоциты 72,0х10⁹/л, лейкоциты 215,0х10⁹/л, бласты 48% миелоциты 12% метамиелоциты 8% нейтрофилы палочкоядерные 12% сегментоядерные 10% эозинофилы 3% базофилы 5% лимфоциты 2% при прогнозировании течения бластного криза заявленным способом, отмечено сохранение активного движения у 78% бластных элементов, что предполагало неблагоприятное развитие процесса, клинически у больного отмечалось нарастание симптомов интоксикации, увеличение общего лейкоцитоза и количества бластных клеток до 77% неэффективность проводимой цитостатической терапии, больной скончался через 14 дней с момента диагностирования бластного криза, таким образом данный случай подтверждает возможность использования заявленного способа в прогнозировании течения бластного криза хронического миелолейкоза.

Экспериментально-клиническая апробация способа в 90 случаях (75 острые лейкозы, 15 бластный криз хронического миелолейкоза), подтвердила высокую прогностическую ценность заявленного способа: совпадение прогноза наблюдалось у 91% больных, ошибочное заключение 5,3% неопределенное 3,7%
Таким образом заявленный способ позволил повысить точность прогнозирования течения лейкозов в 2,4 раза.

Использование: в области медицины, в частности в гематологии. Сущность изобретения: определяют жизнеспособность бластных клеток крови больного, исследуя их двигательную активность и при ее сохранении у более чем 20% бластных клеток через 24 ч с момента культивирования прогнозируют неблагоприятное течение лейкоза, а при наличие менее 15% подвижных бластных клеток прогнозируют благоприятное течение заболевания. Способ позволяет повысить точность прогнозирования течения лейкозов в 2,4 раза.

СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ЛЕЙКОЗОВ путем микроскопии краткосрочных культур бластных клеток, отличающийся тем, что определяют жизнеспособность бластных клеток, исследуя их двигательную активность, и при ее сохранении у более чем 20% бластных клеток через 24 ч с момента культивирования прогнозируют неблагоприятное течение лейкоза, а при наличии менее 15% подвижных бластных клеток прогнозируют благоприятное течение заболевания.