Способ получения сыворотки крови животных для культивирования клеток Советский патент 1990 года по МПК C12N7/02 

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и может быть использовано в научно-мсс тедовательс- ких и производственных лабораториях при культивировании клеток животных.

Цель изобретения - снижение токсичности целевого продукта и повышение чувствительности культивируемых клеток к вирусам.

Сущность способа сводится к тому, что отделение сыворотки от форменных элементов крови производят при 6-8° Чатем холодную сыворотку

без предварительного подогрева для удаления взвешенных форменных элементов и выпавших криоглобулинов подвергают Фильтрации через пластины с раз- дерами пор 0,85-0,95 мкм. В пойледую- щем,1 с целью расслоения на фракции, полученную сыворотку в прозрачном цилиндрической формы сосуде замораживают при минус 30-40°С с последующим размораживанием при 40-45 С. Объем сосуда зависит от потребности в качественной сыворотке,

В результате замораживания и оттаивания сыворотка расслаивается. При

СП

Сь

оо

этом гемоглобин и другие пигменты, а также белковые фракции с высокой молекулярной массой, тякио как гамма-гло- бу шны, располагаются в нижнем, прилегающем ко дну сосуда, слое, что позволяет отделить их от верхних слоев. Отделение нижнего слоя производят путем сливания в случае использования для замораживания сыворотки сосуда Типа делительной воронки. Отделенный нижний слой, составляющий от общей массы сыворотки 5-10%, после определенной обработки может быть применен при культивировании клеток не для вирусологических исследований или испол зован в качестве концентрированного препарата гамма-глобулинов. Оставшиеся верхние слои перемешивают и после стерилизующей фильтрации используют по назначению,

П р и м Р р., Кровь берут при помогай игпы нпи полого ножа из вены или сердца, используя закрытую систему,

Образующийся при ттом нижний темный слой, содержании различные пигменты и гамма-глобулины, удаляют. Выше-нежащие слои после перемешивания подвергают стерилизующей фильтрации с использованием пластин с размером пор 0/22 мкм.

Полученная сыворотка отличается от известной по фитико-химическим показателям, меньшей токсичностью для клеток и лучшей чувствительностью к вирусам клеток, культивированных в среде с данной сывороткой.

Сравнительные данные по ростовым качествам сывороток, крови приведены в тябл.1.

Использование способа позволяет без применения химических препаратрв получать сыворотку крови животных ;пя культивирования клеток с улучшенными качествами, близкой по свойства к дефицитной и дорогостоящей эмбриональной сыворотке. Применение данной

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано в научно-исследовательских и производственных лабораториях при культивировании клеток животных и вирусов. Цель изобретения - снижение токсичности целевого продукта и повышение чувствительности клеток к вирусам. Сущность изобретения заключается в удалении взвешенных форменных элементов крови путем первичного расслоения препарата крови животного при 6-8°С с последующей фильтрацией через пластины с размерами пор 0,85-0,95 мкм и вторичного расслоения полученной сыворотки посредством замораживания ее при минус 30-40°С и размораживания при 40-45°С. Отделяют верхний слой сыворотки и стерилизуют пропусканием его через фильтр с размерами пор 0,22 мк при комнатной температуре. Применение данной сыворотки повышает эффективность культивирования клеток и их чувствительность к вирусам, т.к. она содержит меньше общего белка, альбуминов, гамма-глобулинов. 2 табл.

исключающую контакт с внешним инфици-. 25 сыворотки повышает эффективность вирурованным воздухом. Объем сосуда для взятия крови и ее количество определяются потребностью в сыворотке. Отделение сыворотки методом отстоя производят при 7°С. Отстоявшуюся сыворот- ку собирают по закрытой системе в сосуд-сборник под отрицательным давлением (0,2 атм). Сбор сыворотки производят специальной стеклянной трубкой диаметром 10 мм, изогнутой на конце под углом 90° , открыты конец прикрыт стеклянной решетчатой пластиной с размером отверстий 0,5-1,0 мм. Благодаря зтому засос сыворотки в трубку происходит сверху, а не снизу со стороны сгустка. Такое расположение засасывающего отверстия предотвращает поступление мелких сгустков и осевших

Способ получения сыворотки крови. животных для культивирования клеток, включающий взятие крови, отделение сыворотки и стерилизацию при комнатной температуре через фильтры с размером пор 0,22 мкм, отличающийся тем, что, с целью снижения токсичности целевого продукта и повы11

JO ,-.

на поверхности сгустка форменных

элементов в трубку для отсоса сыворот- шения чувствительности клеток к вируки,сам, отделение сыворотки проводят при

Собранную сыворотку без подогрева, с целью очистки от взвешенных форменных элементов, фильтруют через пластины с размером нор 0,85-0,95 мкм. После т тог о сыворотку подвергают расслоению путем замораживания при -35°С с последующим оттаиванием при 4/ °(.

50

6-80(s затем пропускают ее через фильтры с р-азмером пор 0,85-0,95 мкм, расслаивают посредством замораживания при минус и оттаивания при 40-45 С и стерилизации подвергают образовавшийся после расслоения верхний слон сыворотки

5

0

солпгических исследований, н том числе чувствительность клеток к вирусам и ускачет их количественное накопление и клетках за счет того, что сыворотка, полученная по предложенному способу, содержит меньше общего белка, альбуминов, гамма-глобулинов. Чувствительность клеток к вирусам представлена в табл.2. Формула изобретения

Способ получения сыворотки крови. животных для культивирования клеток, включающий взятие крови, отделение сыворотки и стерилизацию при комнатной температуре через фильтры с размером пор 0,22 мкм, отличающийся тем, что, с целью снижения токсичности целевого продукта и повы11

JO ,-.

сам, отделение сыворотки проводят при

6-80(s затем пропускают ее через фильтры с р-азмером пор 0,85-0,95 мкм, расслаивают посредством замораживания при минус и оттаивания при 40-45 С и стерилизации подвергают образовавшийся после расслоения верхний слон сыворотки

5448006

Таблица 1

Индекс пролиферации изучаемых сывороток

Т Конт- Иявест- Предло- Нижний

роль- нал женная слой ная

2 1,5 2 Нет роста 4 2,5 3,75 1,5

-

чание, контрольная сыноротка - .

сьгноротка хорошего качества;

опытная сыворотка - сыворотка, обладающая токсичностью.

Таблица2

Чувствительность клеКлеткиток к вирусам в лг

ТЦДгр/мл сыворотки

Известный Предложен- способный способ

ита роота ПЭК5,,2 6,46+0,1 111ПС6,0+0,15 7,2±0,2

ечание: в опытах для культивирования клеток использовался 0,5%-ный раствор ГЛА с сывороткой 10%-ной концентрации