Штамм CLaVIcepS pURpURea ВКМ- F-2642 Д-продуцент эргокриптиновых алкалоидов Советский патент 1990 года по МПК C12N1/14 

Изобретение относится к микробиологии, в частности к получению алкалоидов.

Целью изобретения является новый штамм Claviceps purpurea, обеспечивающий повышение выхода эргокриптино- вых алкалоидов.

Культурально-морфологические признаки.

При сапрофитном выращивании штамма ВКМ Р-2642Д на среде из разваренного зерна ржи на 6-7-й день появляется белый мицелий гриба, постепенно разрастающийся по всей поверхности зереп. Через 15-20 дней начинает происходить образование конидиоспор, и мицелий приобретает сероватое окрашивание .

При культивировании штамма на среде агаризованное пивное сусло рост мицелия становится заметным через 7-10 дней после посева. На поверхности среды образуется белый или сероватый ватообразный мицелий, трудно отделяющийся от среды. Через 18-23 дня наблюдается образование конидий, и мицелий приобретает сероватый оттенок.

сл ел

1

ОЭ

При выращивании гриба на среде Тг, следующего состава г/л: слхароэа 100; аспарагин 10; дрожжевой экстракт 0,1; КС1 0,12; MgSO 7H20 0,25; FeS047HaO 0,02; ZnS047H20 0,015; Ca(NO})2 1,0; КН,Р04 0,25, агар-агар 15; дистиллированная вода 1000 мл, мицелий появляется на 5-6 сут роста и сопровождается образованием фиолетового и темно-фиолетового пигмента, окрашивающего питательную среду. В дальнейшем мицелий также приобретает грязно-фиолетовый цвет. Размеры конидио- спор штамма (3,4-8,8)« (2,54-5,28) мкм Предлагаемый штамм на изученных средах дает обильное кочидиальное спороноше- ние.

Физиологические признаки. Штамм Claviceps purpurea ВKM Г-2642Д является строгим аэробом, оптимальная температура роста спорообразования - 2411°С. Как известно, в природе рожь заражается аскоспо- рами спорыньи во время цветения. По- этому необходимо искусственное инфицирование растений ржи в фазу выкола- шивания путем одновременного накалывания колосьев и опрыскивания заранее приготовленной водной суспензией ко- нидиоспор Claviceps purpurea BKM Г-2642Д, полученных при выращивании штамма на среде из разваренного зерна ржи или агаризованной среде из пивного сусла.

Через 8-14 сут на сформировавшихся гифах образуются конидиоспоры,которые выделяются на поверхность колосьев с так называемой медвяной росой. В том случае, если цветение ржи сов- падает во времени с появлением медвяной росы, то при наличии насекомых и благоприятной погоды происходит вторичное заражение растений ржи кониди- альными спорами. Через 40-45 дней с момента заражения цветков на растениях ржи созревают склероции, содержащие алкалоиды. Склероции нового эргокриптинового штамма буровато- фиолетовые, гладкие, менее изогнутые, средней длины 35,5 мм, средним диаметром 3,0 мм.

Новым штаммом ВКМ Р-2642Д инокули- руют в асептических условиях стерильную среду из разваренного зерна ржи в колбах-матрацах емкостью 1,5-2,0 л. Посевы гриба термостатируют при 24t1°C в течение 30 дней. После тер- мостатирования колбы переносят в су

5

0 5 о s

о Q

5

хое темное помещение с температурой , где и хранят до заражения ржи, но не более 2 мес. Рожь заражают в период начала выколашивания. Инфекционный материал (суспензию конидио- спор) готовят путем смыва конидиоспор водопроводной водой с мицелия гриба на среде из разваренных зерен ржи. Водную суспензию конидиоспор фильтруют через марлю. Концентрация конидиоспор в суспензии составляет не менее 5 тыс.в 1 мм3. Из одной колбы-матраца получают около 6 л инфекционной жидкости для заражения.

Инфекционную жидкость используют не позднее, чем через 2-3 ч после ее приготовления. Заражение озимой ржи сорта НТ-12 осуществляют на опытных изолированных делянках (каждая площадью 1 0 м ) в четырехкратной повтор- ности вручную с помощью игольчатых , планшетов, смоченных суспензией кони- диоспор гриба. На заражение одной делянки используют в среднем по две колбы.

В течение вегетационного периода проводят наблюдение за развитием спорыньи на ржи (сроки появления медвяной росы и цветения ржи) и учитывают интенсивность заражения. После созревания рожков спорыньи (через 7 недель со дня заражения ржи) их убирают вручную. Полученные рожки подсушивают на воздухе в затененном помещении. Содержание эргоалкалоидов в рожках и их компонентный состав определяют известными методами.

Биологическая урожайность рожков спорыньи предлагаемого штамма в 1985 составила 245,2 кг/га при содержании суммы эргоалкалоидов 0,50% и эргокриптиновых 0,37%.

Предлагаемый штамм Claviceps purpurea ВКМ Р-2642Д по сравнению с известным эргокриптиновым штаммом обеспечивает повышение урожайности рожков спорыньи в среднем более, чем в 2,5 раза, имеет более высокое содержание суммы эргоалкалоидов в рожках (0,47%), содержит более высокое количество наиболее ценных эргокриптиновых алкалоидов (0,32%).

Формула изобретения

Штамм Claviceps purpurea BKM Р-2542Д (Всесоюзная коллекция микроорганизмов при Институте биохимии и физиологии микроорганизмов) - продуцент Эргокриптиновых алкалоидов.

Изобретение относится к микробиологии, в частности к получению алкалоидов. Целью изобретения является новый штамм CLAVICEPS PURPUREA. При выращивании штамма на среде из разваренного зерна ржи на 6-7-й день появляется воздушный мицелий, постепенно разрастающийся по всей поверхности зерен. При культивировании на среде агаризованное пивное сусло штамм образует ватообразный, белого или сероватого цвета мицелий с большим количеством конидиоспор. При выращивании штамма на искусственной среде Т₂ на 5-6-е сутки роста появляется мицелий, выделяющий фиолетовый или темно-фиолетовый пигмент, окрашивающий питательную среду. Размеры конидиоспор при выращивании штамма на указанных средах одинаковые и составляют (4,4-8,8)^.(2,54-5,28) мк. Штамм CLAVICEPS PURPUREA ВКМ F=2642D является строгим аэробом, оптимальная температура роста (24±1)°С. Штамм CLAVICEPS PURPUREA ВКМ F-2642D обеспечивает повышение урожайности рожков спорыньи в среднем более, чем в 2,5 раза, и увеличение эргокриптиновых алкалоидов соответственно на 10.3%.