Способ получения алкалоидов спорыньи Советский патент 1981 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается микробиологического получения алкалоидов спорыньи, которые могут быть использованы в медицине, неврологии и гинекологии. Известен способ получения алкалоидов спорыньи путем выращивания продуцента штамма Claviceps purpurea на питательной среде с последующей экстракцией целевого продукта органическим растворителем 1. Однако данный способ обеспечивает недостаточно высокий выход целевого продукта. Выход алкалоидов 2,2-3,8 мг/л.ср. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта. Цель достигается тем, что в качестве продуцента используют щтамм У МЕТ РА 130 Claviceps purpurea (Fr) Tul, подвергают экстракции культуральную жидкость или мицелий и фильтрат культуральной жидкости, экстракцию ведут низшим эфиром алкилкарбоновой кислоты при рН 8-9, экстракт концентрируют, осаждают из него хлороформом кристаллический аддукт эргометрин-хлороформ и переводят его в соль, а алкалоидный фильтрат после выделения эргометрина подвергают хроматографической очистке. элюируют, выделяют из элюата эрготок далее переводят его в аддукт- эрготок ароматический углеводород и гидрирую Кроме того, в качестве низшего э4 алкилкарбоновой кислоты используют э ацетат. При этом к культуральной жидкости перед экстракцией низшим эфиром алкил1сарбоновой кислоты предварительно добавляют 10 вес.°/о сульфата аммония, экстрагируют этилацетатом при рН 8-9 и отделяют экстракт.1 Культуральную жидкость перед экстракцией низшим эфиром алкилкарбоновой кислоты разбавляют водой, отфильтровьп ают мицелий, фильтрат экстрагируют этилацетатом или хлористым метиленом при рН и, отделяют экстракт. Кроме того, мицелий предварительно экстрагируют ацетоном, полученный экст)акт подкисляют до рН 2-3, очищают петролейным эфиром и отделяют водную фазу з кстракта. Для получения алкилоидов спорынь: используют штамм У МЕТ РА 130 Clav eps purpurea (Fr) Tul, который выращива эт в питательной среде, содержащей неорганические соединения азота, сахар, органические кислоты, неорганические соли в погруженном виде, образуя при этом алкалоиды группы эрготоксина, а также эргометрин. Далее с помощью твердых или жидких сред можно достигнуть большее число спор. Образовавшийся эрготоксин и эргометрин содержится в окружаюпдей мицелий ферментационной среде. Полученный фильтрат культуральной жидкости экстрагируют назшим эфиром алкилкарбоновых кислот предпочтительно этилацетатом при рН 8-9. Выделяющуюся после фильтрации биомассу в зависимости от остаточного содержания алкалоидов экстрагируют ацетоном. Полученный путем фильтрации прозрачный экстракт после установления рН 2-3 помощью водных кислот, предпочтительно фосфорной кислоты, очищают петролейным эфиром или петролейным эфир-ксилолом, отделяют водную фазу с помощью водного раствора аммиака, устанавливают рН 8-9, экстрагируют низшими алкиловыми эфирами карбоновых кислот, предпочтительно этилацетатом, и полученпые экстракты промывают водой.

Алкалоиды спорыньи экстрагируют из подщелоченной аммиаком культуральной жидкости без предварительного отделения биомассы при добавлении сульфата аммония с помощью низших алкиловых эфиров карбоновых кислот, предпочтительно этилацетата, и путем экстракции с помощью разбавленных водных кислот, предпочтительно фосфорной кислоты, а также проводят экстракцию при рН 8-9 этилацетатом, освобождая от примесей. Очищенные экстракты алкалоидов выпаривают при температуре не менее 30°С и полученные концентраты после конечной очистки переводят в алкалоиды. Для получения чистых алкалоидов концентраты неочищенных алкалоидов растворяют в 1-3 об.ч. хлороформа, хранят растворы при 10°С, отделяют выкристаллизовывающийся, обедненный пигментом аддукт эргометрин-хлороформ и переводят в соли, предпочтительно в гидромалоинат. Полученный после отделения эргометрина фильтрат при 30°С концентрируют путем адсорбции и последующей десорбции по Batch-способу или по способу колоночной хроматографии при использовании окиси алюминия в предпочтительном соотношении 1:20 или в соотношении 1:5, в расчете на общее количество алкалоида в концентрате алкалоидов при добавке активированного угля (соотнощепие адсорбирующих средств окись алюминия : активированный уголь 5:1) и низщих алкиловых эфиров карбоновых кислот, предпочтительно этилацетата или хлорированных углеводородов, предпочтительно хлороформа или двухкомпонентных смесей растворителей друг с другом или с ароматическими углеводородами, предпочтительно бензолом, после выпаривания экстрактов или элюатов при переводят в эрготоксин -

эрготоксининовые смеси, последние путем кристаллизации из ароматических углеводородов, как бензол, толуол или ксилол, переводят в несодержащие эпимеров высокой чистоты кристаллические аддукты эрготоксии - ароматические углеводороды и последние при известных условиях превращают в соли присоединения кислот эрготоксина, предпочтительно этансульфонат.

Полученный эрготоксин гидрируют в присутствии менее активного никеля Ренея при 20-70°С, предпочтительно 60°С и давлении водорода 30-70 атм, предпочтительно 50 атм, в диоксане или при нормальном давлении и при 20-30°С, предпочтительно 25°С, в присутствии 5-10%-ного катализатора

палладий на угле в водном диоксане по способу рециркуляции с образованием не содержащего пигменты 9,10-дигидроэрготоксина. Гидрированные основания переводят в терапевтически приемлемые соли присоединения кислот, предпочтительно гидромалеинат и этансульфонат.

Пример. Для культивирования спор каждый из консервантов, которые в обезжиренном молоке содержат лиофильно высущенные споры, приготовляют суспензию, которую переносят на 3%-ную агаровую среду (рН 6,0) с 15% пивного сусла, 0,5% дрожжевого экстракта, 0,5% ( и 0,1% цитрата аммония, и в виде культуры косого агара выдерживают 14 дней при 19°С. В качестве затравочного материала для погруженных культур по этому способу получают в широкогорлых колбах (склянках) емкостью 1000 мл спор/сосуд для культивирования, с помощью которых можно инфицировать при надобности до 120.л питательного раствора.

Пример2. Получение инокулята осуществляют с помощью суспензии спор, полученной аналогично примеру 1, которую в концентрации 1-10 спор/мл переносят в жидкую среду, содержащую 15% пивного сусла

и 2% дрожжевого экстракта. Культивирование проводят при 22°С в круглодонной колбе емкостью 500 мл с 120 мл жидкой среды на качающейся машине для встряхивания. Культура спустя 14 дней содержит 6-10 спор/колбу, которые применяются в качестве затравочного материала для ферментации алкалоидов.

Пример 3. Получение инокулята для культивирования спор осуществляют согласно примеру 1. В качестве питательной среды применяют 3%-ную агаровую среду (рН 6,8- 6,9), которая содержит 3% сахарозы, 0,3% NaNOa, 0,1%; КгРО, 0,005% MgSO4- HzO; 0,05% KCl, 0,001% FeSO+-7H2O и 1% воды набухания кукурузы. В стеклянных узкогорлых емкостях объемом 500 мл в культуре косого агара после культивирования в течение 14 дней при 24°С получают ЗЮ спор/сосуд для культивирования, которые могут применяться для погруженных культур при синтезе алкалоидов. Пример 4. Споры культуры затравочного материала, полученные согласно примеру 1, суспензируют и часть их в качестве инокулята распределяют в одинаковых количествах в вертикально стоящие круглодонные колбы (емкостью 500 мл), каждая из которых содержит по 120 мл среды предварительной культуры (10% сахарозы, 1,5% цитрата аммония, 0,1% Ca(NO;)., 0,025% КНаРО,, 0,01% КС1, 0,03% MgSOb 0,001% FeS04, 0,0004% ZnSO4, дистиллированная вода, рН 5,5, стерилизация 30 мин FeSOi, 0,0004%, 0,0004% ZnSO,, дистиллированная вода, рН 5,5, стерилизация 30 мин при 0,5 атм). Колбы встряхивают при 24°С на (круглой) качающейся машине для встряхивания (175 об/мин). Спустя 7 дней содержимое колбы в соотношении 1:10 пересевают в колбы Эрленмейера (емкостью 500 мл), из которых каждая содержит по 120 мл основной культуральной среды (20% сахарозы, 1% цитрата аммония, 0,1% Са(МОз)г, 0,025% КНзРО, 0,01% КС1, 0,03% MgSO4, 0,001% FeSO4, 0,0004% ZnSOt, дистиллированная вода, рН 5,5, стерилизация 30 мин при 0,5 атм). Эти колбы встряхивают, как указано ранее, при одинаковых условиях. Спустя 14 дней с помощью реакции Урка определяют 2470 мг алкалоидов/л культуральной жидкости, в расчете на бималеинат эрготоксина. Аналоиды экстрагируют хлористым метиленом, разделяют с помощью тонкослойной хроматографии на пропитанном формамидином кизельгура и определяют УФспектрофотометрически. Находят 1280 мг эрготоксина и 340 мг эргометрина/л, из остатка выделяют два неизвестных нативных нептидных алкалоида и простые производные эрголина, как агроклавин, ханоклавин и т.д. Проведенное параллельно этому определение выделенного путем вакуумной фильтрации мицелия и фильтрата показывает, что эргометрин полностью и сверх того 90% образовавщегося эрготоксина содержатся в фильтрате. Пример 5. 10 стеклянных ферментеров (емкостью по 2 л) засевают приготовленный согласно примеру 2 культурой погруженных спор. Ферментеры содержат по 1,3 л питательного раствора А с 10% сахарозы 1,5% цитрата аммония, 0,05% , 0,03% MgSq,, 0,001% FeSO и 0,0004% ZnSO, в водопроводной воде (рН 5,5; стерилизация 30 мин при 0,5 атм). Ферментацию осуществляют при 24°С и при перемешивании со скоростью 400 об/мин, соответственно при аэрации 0,3 л воздуха/мин. Спустя 7 дней содержимое ферментора переносят в ферментор из высококачественной стали емкостью 18 л с 10 л питательного раствора В, содержащего 10% сахарозы, 1,4% лимонной кис-, лоты, 1,0% гидроокиси аммония (25%-ной), 0,05% Са(МОз)г 0,025%. КН РО, 0,01% КС1, 0,03% MgSO«,0,001% FeSO и 0,0004% ZnSO в водопроводной воде, рН 5,5. По :ле культивирования при 24°С, 360 об/мин 2,5 л воздуха/мин на пятый день полов ну содержимого ферментора применяют в честве инокулята для ферментора из вы кокачественной стали емкостью 63 л с 4( % питательного раствора С, содержащего 2( сахарозы 1,75% лимонной кислоты , 0, КНгРО4,0,02% КС1, 0,03% MgSO,, 0,00: FeSO4, 0,0012 ZnSO4 в водопроводной веде. добавляют гидроокись аммония до рН стерилизуют 60 мин при 110°С. Культ ру перемешивают в течение 7 дней при 24°С со скоростью 300 об/мин и аэрируют 27 воздуха/мин, при необходимости осуществляют добавку антивспенивателя. Культура. ная жидкость содержит при культивиро НИИ 2640 мг всех алкалоидов/л. Провед( ный согласно примеру 4 анализ показыва что в ней содержатся 1300 мг эрготокси и 550 мг эргометрина. Пример 6. Количество спор, получс ных согласно примеру 3, культуры затравс ного материала в качестве инокулята рг номерно распределяют в два ферментора высококачественной стали (емкостью 18 . каждый из которых содержит по 10 л г тательного раствора А согласно примеру 5. Содержимое ферменторов перемешивают 7 дней при 24°С со скоростью 360 об/мин и аэрируют 2,5 л воздуха/мин. Затем содержимое двух ферменторов переносят в ферментор из высококачественной стали емкс тью 250 л, который содержит 180 л питате; ного раствора В согласно примеру 5, и Kyj тивируют при 24°С, 160 об/мин и 0,5 возд| ха/л питательного раствора в минуту. Сп тя 5 дней культуру переносят в фермент высококачественной стали емкост 2000 л с 1400 л питательного раствора согласно примеру 5, однако питательн раствор содержит дополнительно 0,0005 NiSO4. Культивирование осуществляют п 24°С, 160 об/мин и 0,6 л воздуха/л питате/ ного раствора в минуту. При необходимо ти во все ферменторы добавляют антивсп ниватель. На седьмой день культура соде )жит 2430 мг всех алкалоидов/л культурал ной жидкости. При аналитическом опред лении согласно примеру 4 найдено 1150 эрготоксина и 490 мг эргометрина/л культ ральной жидкости. Пример 7. 200 л культурально фильтрата из соответствующего количест культуральной жидкости (по примеру ( которую перед отделением мицелия разба ляют при перемешивании путем добавки в( ды в объемном соотношении 1:1, подщел; чивают с помощью 25%-ного водного рас вора аммиака до рН 8,5 и аналоиды эрп токсина и эргометрина экстрагируют 50 этилацетата при использовании двухст пенчатого устройства для экстракции, р iботающего противотоком. Этилацетатнь

экстракт концентрируют в вакууме при t + 30°С до 1/20 исходного объема, смеижвают остаток после вы11арива 1ия с двумя объемными частями хлороформа, оставляют на 15 ч при 4°С для выкриеталлизовывания аддукта эргометрипа с хлороформом, отсасывают и получают 35,4 г желтоватого аддукта эргометрина с хлороформом с 75°/оным выходом. 35,4 г аддукта эргометрина с хлороформом в присутствии активного угля при нагревании растворяют в 3,1 л ацетона, добавляют к фильтрату рассчитанное количество раствора малеиьювой кислоты в ацетоне, полученный кристаллический бималеинат эргометрина отсасывают и вещество высушивают при 70°С. Получают соль алкалоида в виде с1с-чисто10, окрашенного от белого до желтоватого, кристаллического nopoiHка с ЭО /о-ным выходом со степенью чистоты 98-- 1000/0. Удельное врап1ение -50 ( в воде). После дальнейшего концентрирования получепного содержащего эрготоксин фильтрата до 0,297 л хроматографируют при нрименении, в расчете на общее количество алкалоидов в алкалоидном концентрате, двадцатикратного количества окиси алюминия нейтральной стадии активности через ко:юнну с по.мондью этилацетата и элюируют 3,8 л такого же растворителя. Полученный после выпаривания досуха элюата в вакууме при t 30°С остаток носле выпаривания (74,2) путем растворения в 0,212 л бензола и стояния раствора в течение 5 ч при 4°С превращают в аддукт эрготокси 1а с бензоло.м, выкристаллизовавН1ИЙСЯ продукт отсасьнзают, нромывают бензолом и высушивают в вакуумном эксикаторе. Получают 55,2 г dc-чистого, белого кристаллического аддукта эрготоксина с бензоло.м со степенью чистоты ). Удельпое вращепие d ---183° (е-1,8 в CHClj), или перемегнивают с двадцатикратпым количеством окиси алюмипия нейтральной стадии активности, в расчете на o6niee количество алкалоидов в алкалоидном концентрате, до тех пор, пока смесь не становится i;Morei Horo цвета. После стояния в течение 15 мин экстрагируют трм раза по 3,82 л этилацетата, сгун|,ают объедипешп гй экстракт при 30°С досуха, подвергают дальнейHJeй обработке аналогичны.м образо.м и получают 52,5 г dc чистого белого кристаллическо1о аддукта эрготоксина с бензолом со степенью чистоты Удельпое вращение -183° (с-1,8 в CHCij).

Хроматографируют при нрименении, в расчете на o6Hj,ee количество алкалоидов в алкалоидном концентрате, пятикратного количества окиси алюминия, нейтральной стадии активности при добавке а.ктпвированного угля (адсорбционное соотношение окись алюминия : активированный угол 5:1) через колонну с помоплью этилацетата и э.;попруют 4 л того же растворителя, при дальиейнгеи обработке поступают аналогичным образом и получают 55 г dt-чиетого, белого кристаллического аддукта, эрготоксина с бензолом со степенью чиетоты 96%. Удельпое вран1ение --183 (с 1,8 в CHCIj) Перемешивают при использовании, в расчете па общее количество алкалоидов в алкалоидном концентрате, пятикратного количества окиси алюминия, нейтральной стадии активности при добавке активированного угля (адсорбционное соотношение окись алюминия : активированный уголь 5:1) в фильтрационном устройстве с перемешиванием с помощью 3 л этилацетата, экстрагируют еще два раза по 2,5 л этилацетата, концентрируют объединенный экстракт при 30°С досуха, при дальнейшей обработке поступают аналогичным образом и получают 55 г dc-чистого, белого, кристаллического аддакта эрготоксина с бензоло.м со степенью чистоты 96%. Удельное вращение с --183 (с 1,8 CHClj).55,2 г аддукта эрготоксина е бензолом при легком нагревании растворяют в 830 мл абсолютного этанола, добавляют рассчитанное количество 0,5 .молярного этанольного раствора (абсолютный этанол) этанолсульфокислоты и затем 4,2 л абсолютного эфира, полученный криеталлизат отсасывают, вещество высущивают при 70°С и получают с 95%-ным выходом d(,-чиcтый, белый, кристаллический, эрготоксинэтансульфонат со степенью чиетоты 98-100%

Пример 8. 12 кг полученного путе.м фильтрации соответствующего количества культуральной жидкости мицелия в течение 3 ч при 20°С экстрагируют 18 л ацетона, отделенный .м фильтрации водноацетоновый экстракт доводят до рН 2-3 с помощью фосфорной кислоты и обезжиривают и очищают двукратный экстракцией 17 л нетролейного эфира и 11 л нетролейный эфир/ксилол (объемное соотношение 1:1). Полученную алкалоидеодержащую тяжелую фазу экстрагируют нри рН 8-9 (а.ммиачпая вода) до истощения в целом 7 л этилацетата, промывают водой в объемно.м соотношении 1:1 верхнюю фазу выпаривают 1гри 30°С до 0,7 л, смещивают с 1,40 л хлороформа и после стояния в течение ночи при 4°С отделяют от выпавшего грязеподобного осадка. Фильтрат концентрируют при указанных условиях до объема 0,180 л, хроматографируют на 1,100 кг окиси алюминия (активная стадия 1) с помощью 2 л этилацетата, полученные элюаты выпаривают в вакууме досуха и остатки после высушивания растворяют в 1000 мл толуола (бензола или ксилола). После стояния в течение ночи при 4°С отделяют выделившееся вещество, высушивают в вакуумном эксикаторе и получают 14,0 г белого, кристаллического аддукта эрготоксина с толуолом ео степенью чистоты 98--100%.

Пример 9. 10,0 л полученной согласно примеру 5 культуральной жидкости при перемешивании и добавке 10 вес.% сульфата аммония при рН 9 и 20°С экстрагируют 25,0 л этилацетата, отбрасывают тяжелую биофазу, органическую фазу экстрагируют дважды по 5,0 л 2%-ной фосфорной кислоты, экстрагируют собранные водные фазы, в которых установлено рН 8-9 с помощью аммиачной воды, дважды по 5,0 л этилацетата, собранные органические фазы выпаривают до объема 200 мл при , смешивают с 400 мл хлороформом остаток после выпаривания, отсасывают выкристаллизовавшееся после стояния на холоду при 4°С в течение ночи вещество, высушивают в вакуумном эксикаторе и получают 4,20 г (71,2% от теории) аддукта эргометрина с хлороформом со степенью чистоты 90,7°/о. Содержащий эрготоксин фильтрат, сконцентрированный при указанных условиях до 120 мл, хроматографируют на 300 г окиси алюминия) с помощью этилацетата, элюат выпаривают в вакууме досуха, остаток после высушивания растворяют в 30 мл бензола, оставляют на ночь при , выпавшее вещество отсасывают, высушивают в вакуумном эксикаторе и получают 7,95 г (73,6% от теорий) белого, кристаллического аддукта эрготоксина с бензолом со степенью чистоты 91,6%.

Пример 10. 50,0 г полученного согласно примеру 7 аддукта эрготоксина с бензолом гидрируют в 0,7 л диоксана при 60°С под давлением водорода 50 атм, в обогреваемом вращающемся автоклаве с перемешиванием или при встряхивании, в присутствии никеля Ренея в течение 2 ч для получения 9,10-дигидроэрготоксина, отфильтровывают от катализатора, прозрачный фильтрат выпаривают в вакууме досуха, гидрированное основание оставляют выкристаллизовываться при 4°С в этилацетате, кристаллизат отсасывают и высущивают при 60°С. Получают 47,5 г (90% от теории) d,-чистого, кристаллического продукта эрготоксинового основания со степенью чистоты 90%. Удельное вращение ,6 (с 2 в пиридине). Полученное кристаллическое дигидроэрготоксиновое основание вносят в 200 мл метацола и рассчитанное количество 1 М метанольного раствора этансульфокислоты при перемешивании, причем спустя непро,должительное время выделяется кристаллическая соль алкалоида. После отсасывания и высушивания продукта получают 48,5 г (95% от теории) ё(;-чистого, белого, кристаллического дигидроэрготоксин-этансульфоната со степенью чистоты 98-100%. Пример 11. Гидрируют 7,20 г полученного согласно примеру 9 аддукта эрготоксина с бензолом в 250 мл 90%-ного водного диоксана при 20-25°С при отсутствии света на 2,9 г 5%-ного палладия на угле в специальной циркуляционной аппаратуре, состоящей из емкости для гидрирования с трубопроводами питания и циркуляции, термо раметром, эжектором, резервуаром для нения газа и лабораторного шлангового наcoca, при числе оборотов 138,5 ч

давлении эжектора 120 мм H2SO4 ст 1лба 4 ч и с диаметром жиклера 2 мм, в течение в 9,10-дигидроэрготоксин, отфильтровы а ют от катализатора, прозрачный фильтрат выпаривают досуха на роторном испари геле остаток под вакуумом при t 30°C, сухой растворяют в 35 мл хлороформа, смещ иваи} тeнют с 35 мл диэтилового эфира и при

0 оса}(дасивном перемешивании полностью

фир 1ОГО ют с помощью 30 мл насыщенного э раствора малеиновой кислоты дигидро:

рготоксинбималеинат. Отсасывают, промы: ают 30 мл диэтилового эфира и тотчас вые ши5 вают над пятиокисью фосфора в вакуул ном эксикаторе. Получают 6,55 г (93,5% от теории) ё -чистого, белого, кристалличес ого дигидроэрготоксинбималеината со степ нью чистоты 97,9%.

Приведены морфологические свой

ства

Claviaps purpurea штамм У МЕТ РА 130 на различных агаровых средал 1-3 п1осле культивирования в течение 14 дней в ащках Петри при 24°С.

Среда 1 (3% сахарозы, 0,001% Fe

0ц7Н2О, 0,3 NaNOs, 1% воды набухания

5

ку5%курузы, 0,1 К2НРО4, 3% агара, 0,( MoSOr7H2O, рН 6,8-6,9). Форма коле

НИИ

(невыпуклая, компактная, беспорядочная правильная) и сильно складчатая, них няя :тисторона гладкая, не отстает от дна плг

0 ны. Диаметр колоний 1,0-1,5 см. Окр ска колоний: верхняя сторона от светлоко ичневого до фиолетового, край белый, ния няя

-коричневый, сторона коричневая, край светлоСреднее спорообразование (Verspori ng) 46,3-10 конидий/колония.

5

Среда 2 (15% пивного сусла, 0,1%

штрата аммония, 0,5% дрожжевого экстр кта, 3% агара, 0,5(NH4)2PO, рН 6,0). Фдрма колонии: середина выпуклая с кратерооб зазным опусканием, край радиально скла 1ча0 тый, агар пророс, колония отстает от дна пластины. Диаметр колонии 2-3 см. Ок )асс1ветка колонии: верхняя и нижняя стороны ло-коричневые. Среднее спорообразов, ние 34,1 10 конидий/колония.

Среда 3 (2% глюкозы, 50% водного

сар5тофельного экстракта, 3% агара, рН ,0). с Форма колонии: середина выпукла кратерообразным спуском (опускани

м), агар пророс, колони.я отстает от дна пластины. Диаметр колонии 1,5-2,0 см.

Окраска колонии: верхняя сторона серо-фиолетовая, нижняя сторона сере коричневая.. Среднее спорообразование 3,3 10 конидий/колония.

Приведена микроскопическая характ

ристика конидий и гиф. Конидии во всех :лучаях имеют эллипсоидную форму с ра 1мерами 6-10 ит (большая ось), соответс11венно 4-8 ит (малая ось). Субстратные

фы

Г1 имеют длину до 200 ит и диаметр 4-J ит.

11 845827,2

В случае пузырчатых вздутий диаметр сое-выделяют из элюата эрготоксин, далее перетавляет 8-16 ит. Образуются воздушныеводят его в аддукт эрготоксин-ароматичесгифы, их длина выше 200 ит и их диаметркий углеводород и гидрируют,

составляет только 2-4 ит.2. Способ по п. 1, отличающийся тем,

Предлагаемый способ позволяет увели-что в качестве низшего эфира алкилкарбоночить выход целевого продукта.5 вой кислоты используют этилацетат.

Формула изобретенияракцией низшим эфиром алкилкарбоновой

1. Способ получения алкалоидов споры-сульфата аммония, экстрагируют этилацетаньи путем выращивания продуцента штамма том при рН 8-9 и отделяют экстракт. Claviceps purpurea на питательной среде с4. Способ по п. 1, отличающийся тем, последующей экстракцией целевого продук-что культуральную жидкость перед экстракта органическим растворителем, отличаю-цией низшим эфиром алкилкарбоновой кисщийся тем, что, с целью повышения выходалоты разбавляют водой, отфильтровывают целевого продукта, в качестве продуцента15 мицелий, фильтрат экстрагируют этилацетаиспользуют штамм У МЕТ РА 130 Clavicepsтом или хлористым метиленом при рН 8-9 purpurea (Fr) Tul, экстракции подвергаюти отделяют экстракт.

культуральную жидкость или мицелий и5. Способ по п. 1, отличающийся тем,

фильтрат культуральной жидкости, экстрак-что мицелий предварительно экстрагируют

цию ведут низшим эфиром алкилкарбоновойацетоном, полученный экстракт подкисляют

кислоты при рН 8-9, экстракт концентриру-.20 до р 2-3, очищают петролейным эфиром и

ют, осаждают иЗ него хлороформом кристал-отделяют водную фазу экстракта,

лический аддукт эргометрин-хлороформ иИсточники информации,

переводят его в соль, а алкалоидный фильт-принятые во внимание при экспертизе

рат после выделения эргометрина подверга-I. Патент Великобритании № 1158380,

ют хроматографйческой очистке, элюируют,кл. С 02 С, опублик. 1969.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем,

что к культуральной жидкости перед эксткислоты предварительно добавляют 10 вес.°/о