1
(21)4180099/28-14
(22)13.01.87
(46) 15.05.90. Бюл, № 18
(71)Ставропольский научно-исследо- йательский институт вакцин и сывороток
(72)И.А.Криволапоеа, Н.И.Воронкин, Б.Н.Райкис и О.А.Камбург
(53) 615.373 (088.8) (56) Poulsen L.K., Weeke В, Aluminium hydroxide absorbed allergens used in modified RdSt. - Allergy, 1985, 40, № 6, p.p. 405-416.
(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ АНТИТЕЛСВЯЗЫВАЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ АЛЛЕРГОИДА
(57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано в производстве аллергоидов из пыльцы растений для контроля их качества и стандартизации. Цель - упрощение способа. Для этого используют реакцию связывания антителспецифической сыворотки (классов G и М) с депонированным аллергоидом в соотношении 1,0:(0,5-0.7) мл. При снижении титра иммунной сыворотки в 4-512 раз от исходного по данным реакции непрямой гемагглютинации устанавливают наличие у депонированного аллергои- да специфической активности.
§
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Способ получения аллергоида на основе пчелиного яда для проведения аллерген-специфической иммунотерапии | 2019 |
|
RU2731509C1 |
| АЛЛЕРГОТРОПИН ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПОЛИНОЗОВ И СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ПОЛИНОЗОВ | 2001 |
|
RU2205661C2 |
| ШТАММ ГИБРИДНЫХ КУЛЬТИВИРОВАННЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ MUS MUSCULUS FRANCISELLA TULARENSIS 1D6 - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ЛИПОПОЛИСАХАРИДУ ТУЛЯРЕМИЙНОГО МИКРОБА | 2016 |
|
RU2621379C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛИОФИЛИЗИРОВАННОЙ ФОРМЫ СТАНДАРТНОГО ОБРАЗЦА СЫВОРОТКИ, СОДЕРЖАЩЕГО АЛЛЕРГЕНСПЕЦИФИЧЕСКИЙ ИММУНОГЛОБУЛИН Е (ВАРИАНТЫ) | 2022 |
|
RU2802333C1 |
| СОПОЛИМЕРЫ ГЕТЕРОЦЕПНЫХ АЛИФАТИЧЕСКИХ ПОЛИ-N-ОКСИДОВ, ВАКЦИНИРУЮЩИЕ И ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА НА ИХ ОСНОВЕ | 2010 |
|
RU2428991C9 |
| Способ диагностики генитального кандидоза | 1989 |
|
SU1670607A1 |
| ШТАММ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ Mus musculus 3F11 - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ, СПЕЦИФИЧНЫХ К БОТУЛИНИЧЕСКОМУ ТОКСИНУ ТИПА B | 2014 |
|
RU2566553C1 |
| КОМПЛЕКСНЫЙ ПРЕПАРАТ НА ОСНОВЕ АЛЛЕРГЕНОВ ПЫЛЬЦЫ БЕРЕЗЫ И МУРАМИЛПЕПТИДОВ | 2012 |
|
RU2537225C2 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭРИТРОЦИТАРНОГО АНТИГЕННОГО ГИСТОПЛАЗМОЗНОГО И КОКЦИДИОИДОМИКОЗНОГО ДИАГНОСТИКУМА | 2010 |
|
RU2422832C1 |
| ШТАММ ГИБРИДНЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ Mus musculus 1G7 - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ, СПЕЦИФИЧНЫХ К БОТУЛИНИЧЕСКОМУ ТОКСИНУ ТИПА В | 2014 |
|
RU2571208C1 |
Изобретение относится к медицине и может быть использовано в производстве аллергоидов из пыльцы растений для контроля их качества и стандартизации. Цель - упрощение способа. Для этого используют реакцию связывания антител специфической сыворотки (классов G и M) с депонированным аллергоидом в соотношении 1,0:0,5-0,7 (мл). При снижении титра иммунной сыворотки в 4-512 раз от исходного по данным реакции непрямой гемагглютинации устанавливают наличие у депонированного аллергоида специфической активности.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано в производстве аллергоидов из пыльцы растений для контроля их качества и стандартизации,
Цель изобретения - повышение точности спо.соба определения специфической активности депонированного аллергоида за счет одновременного выявления степени связывания иммуноглобулинов .
Способ осуществляют следующим образом.
Для постановки реакции готовят ингредиенты.
а осадок дважды отмывают 5 мл фосфатного буфера, рН 5,5 - 6,0, После промывки осадок ресуспекдируют 5 мл этого же буфера для последующего исУ1
:л л
ю
пользования в качестве контрольного образца,
При получении .сывороток.с титром 1:640 - 1:10240 их разливают в ампулы по 1 мл и лиофилизируют по изве- стному режиму для сывороточных препаратов. Перед употреблением сыворотку в каждой ампуле разводят в 1 мл дистиллированной воды. Как.сыворотка пациента, так и разведенная кро- личья сыворотка, используемые в данном способе, должны иметь титр в РИГА 1:320 и выше.
Специфическую антителосвязывающую активность депонированного аллергои- да определяют следующим образ-ом: берут 2 пробирки, в одну из которых вносят 1 мл депонированного аллергои да, а в другую - 1 мл контрольного образца. Испытуемую и контрольную пробирки центрифугируют в течение 15 мин при 2000 об/мин, после чего надосадочную жидкость сливают, а к осадкам в- обе пробирки добавляют по 0,5-0,7 мл соответствующей специфи- ческой сыворотки, перемешивают и оставляют на 18 ч при комнатной температуре для связьюания антител. По . истечении времени инкубации пробирки центрифугируют 15 мин при 2000 об/ми надосадочную сыворотку с каждого образца сливают и определяют в каждом из них титр антител в РИГА, Параллельно определяют в РИГА титр антител в исходной специфической сыворотке, не подвергнутой инкубации. Учетным считают титр антител в той лунке каждого ряда, где еще определяется гемагглютинация на
4++.
Определив титры антител в исходной сыворотке, сыворотке, инкубированной с контрольным образцом, и сыворотке, инкубированной с депонированным аллергоидом, сопоставляют полученные результаты. При этом титр сыворотки, инкубированной с контрольным образцом, должен совпадать с титром исходной сыворотки, что является доказательством отсутствия неспецифической сорбции антител на депо- наторе L-тирозине (допускается снижение итра сыворотки, инкубированной с контрольным образцом, в 2 раза от исходного, что может быть погредо- ностью РИГА), Далее сопоставляют с титром исходной сыворотки титр сы- .воротки, инкубированной с опытным образцом-депонированным аллергоидом. При этом если депонированный аллер- гоид обладает специфической активностью, то происходит одновременное связывание его с гемагглютинирующи- ми антителами, представленными IgL и IgM, что выражается снижением титра сыворотки в опыте в 4-512 раз в РИГА.
Пример 1. В опытную пробирку вносят 1 мл сорбированного на Ь-тиро- зине аллергоида из пыльцы амброзии, а в контрольную пробирку - 1 мл контрольного образца взвеси L-тирозина, не содержащей антигена амброзии. Пробирки центрифугируют 15 мин при 2000 об/мин, затем надосадочную жидкость сливают, а к осадкам в обе пробирки добавляют по 0,5 мл специфической к пыльце амброзии гипериммунной кроличьей сыворотки, содержимое пробирок перемешив ают и инкубируют при комнатной температуре в течение 18ч, Затем пробирки центрифугируют 15 мин при 2000 об/мин, надосадочную сыворотку с образцов сливают и определяют титр гемагглютинирующих антител в РИГА, Параллельно ставят РИГА с исходной неинкубированной сывороткой. При этом получают титр сыворотки, инкубированной с контрольным образцом, равный 1:1280, титр исходной неинкубированной сыворотки - 1:1280, титр сыворотки, инкубирован51
ной с депонированным аллергоидом амброзии, - 1:320. Показатель снижения титра антител - 4 раза при от сутствии неспецифической сорбции антител на сорбенте Способность испытуемой серии сорбированного на Ь-ти- розине аллергоида из пыльцы амброзии связывается со специфическими противоамброзийными гемагглютинирую- щими антителами, представленными иммуноглобулинами не менее чем двух классов (L,M), свидетельствует о наличии специфической активности преде тавленных в препарате антигенных детерминант, следовательно, данная серия препарата может быть выпущена цля лечения амброзийного полиноза.
П р и м е р 2. Способ определения специфической активности депонированного аллергоида ведут так же, как в примере 1, за исключением того, что берут сорбированный на L- тирозине аллергоид из пыльцы ежи сборной (другого вида растения) и соответствующую специфическую к пыльце ежи гипериммунную кроличью сыворотку, При этом получают титр сыворотки, инкубированной с контрольным образцом, 1:10240, титр исходной неинкубированной сыворотки - 1:10240, титр сыворотки, инкубированной с опытным образцом, - 1:20. Показатель снижения титра 512 раз. Исследуемая серия препарата обладает выраженной специфической активностью и может быть выпущена для лечения поллиноза, вызванного пыльцой ежи сборной.
Пример Зс. Способ определения специфической антителсвязывающей активности депонированного аллергои- да ведут так же, как в примере 1, за исключением того, что используют другую серию сорбированного на L-тиро- зине аллергоида из пыльцы амброзии. При этом получают: титр сыворотки, инкубированной с контрольным образцом, 1:1280, титр исходной неинкубированной сыворотки - 1:1280, титр .сыворотки, инкубированной с опытным
645526
обраяцом, - 1:1280, Снижение титра не произошло, следовательно, при изготовлении данной серии сорбированного на L-тирозине аллергоида из пыльцы амброзии имело место нарушение технологического режима, приведшее к инактивации специфических антигенных детерминант аллергоида и препа10 рат утратил специфическую активность, Данная серия препарата не может быть выпущена для использования с целью специфической гипосенсибилизи- рующей терапии амброзийного пол15 линоза.
Использование предлагаемого способа по сравнению с прототипом позволяет определить специфическую антител связьюающую активность депони2о рованного аллергоида одновременно по отношению к антителам, принадлежащим к иммуноглобулинам не менее чем двух классов (Ig M, IgL), что позволяет значительно повысить
25 точность способа определения специфической активности депонированного аллергоида и сократить время исследования до 1 сут.
3Q Формула изобретения Способ определения специфической антителсвязывающей активности аллергоида путем добавления специфической сыворотки к аллергоиду и после35 дующей оценки реакции, отличающийся тем, что, с целью - повышения точности способа за счет одновременного выявления степени связывания IgG и IgM,используют диали4Q зованный формальдегидобработанный аллерген-аллерген,сорбированный на L-тирозине, добавляют специфическую сыворотку с титром 1:320 - 10240, при соотношении с депонированным
45 аллергоидом 0,5-0,7:1, оценку осуществляют в реакции непрямой гемаг- глютинации и при снижении титра сыворотки в 4-512 раз определяют наличие специфической антителсвязывающей
CQ активности.
