Способ диагностики гетерозиготного носительства при болезни Вильсона-Коновалова Советский патент 1990 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при диагностике заболеваний печени, в частности болезни Вильсона-Коновалова.

Целью изобретения является снижение травматичности способа и его упрощение.

Способ осуществляется следующим образом.

50 мл сыворотки больного болезнью Вильсона-Коновалова подвергают хроматографии на колонке с аффинным к це- рулоплазмину сорбентом, Полученные после аффинной хроматографии оксидаз- ную и неоксидазную фракции разделяют препаративным электрофорезом в 7,5%- ном полиакриламидном геле,, Обе фракции элюируют из геля и получают к ним антитела при внутрикожной иммунизации кроликов. Полученные антитела перекрестно истощают и получают моноспецифические антитела, В дальнейшем эти антитела используют для ракетного иммуноэлектрофореза сывороток, используемых из одного из его роди телей, после чего определяют отношение площади пика (ракеты) неоксидаэ ной фракции к площади ракеты оксидазной фракции, а затем соотносят получившиеся отношения площадей ракет у ребенка и родителя„ В случае здорового родителя при отношении, равном единице, а в случае больного родителя при отношении, равном 1/3, диагностируют гетерозиготное носительство0

Пример 1 о Больной Г.. , 7 лет диагноз: болезнь Вильспн..-Коновалова.

СЛ

о &

®

Специфическое лечение не дало результатов,

По 5 мкл сыворотки больного и его матери исследованы методом ракетного иммуноэлектрофореза в 1%-ном агароз - ном геле, содержащем 50 мкг моноспецифических антител в 1 мл. Иммунограм- му, содержащую антитела против окси- дазной формы, окрашивали 0,04%-ным раствором ортодианизидина. Иммунограм- му с антителами против неоксидазной формы окрашивали на белок Отношения площади ракеты неоксидаэной фракции к площади ракеты оксидаэной фракции у больного и у его матери равны 1,55 и 1,52 соответственное, Соотношение этих значений - единица„ Так как мать здорова, а отношение равно единице, диагностировали гетерозиготное .носительство, что отрицает диагноз болезнь Вильсона-Коновалова. Пожизненное получение препарата пеницил- амина отменено. При томографическом обследовании в мозге больного обнару- жена опухоль.

Пример 2. Ребенок года, рождена в браке между здоровой женщиной и больным болезнью Вильсона- Коновалова. Родители происходят из одной местности. Девочка клинически здорова, Сыворотка крови ребенка и его отца исследованы предлагаемым способом с целью медико-генетического консультирования.

Отношение площади ракеты неокси дазной фракции к площади ракеты ок- сидазной фракции у ребенка и отца составляют 1,06 и 3,00 соответственно, Соотношение этих значений равно 1/3. Диагноз: гетерозиготное носительство вильсоновской мутации. Рекомендовано медико-генетическое консультирование при вступлении в брак,

Пример 3, Больной М., 16 пет с вильсоноподобной симптоматикой. Мать больна болезнью Вильсона-Коновалова, Диагноз - болезнь Вильсона-Коновалова оставался под сомнением в связи с тем, что отец здоров. Сыворотки больного и обоих родителей исследовали методом ракетного иммуноэлектрофореза с моноспецифическими антителами. Отьошения площади ракеты неоксидазной фракции к площади ракеты оксидазной

Фракции у больного, его матери и отч

Q 5 0 5

0

0

45 CQ

5

55

ца равны 1,50; 1,52 и 0,50 соответственно. Соотношение этих значений в случае здорового родителя (отца) равно 1/3, а в случае больного родителя (матери) - единице.

Диагноз: больной является гомозиготным носителем мутации Вильсона - болен болезнью Вильсона-Коновалова. Специфическое лечение, назначенное после установления диагноза, привело к улучшению состояния больного.

По сравнению с известным предлагаемый способ диагностики гетерозиготного носительства болезни Вильсона- Коновалова является совершенно безвредным для пациента, так как кровь для анализа может быть взята из пальца. I

Предлагаемый способ не уступает известному по точности, что подтверждается при анализе тридцати семей с больными болезнью Вильсона-Коновало - ва, где диагноз подтвердился во всех случаях.

Способ позволяет диагностировать доклиническую стадию болезни Вильсона-Коновалова .

Формула изобретения

Способ диагностики гетерозиготного носительства при болезни Вильсона-Коновалова путем исследования обмена меди в организме больного и одного из его родителей, отличающийся тем, что, с целью снижения травматичности способа и его упрощения, проводят ракетный иммуноэлек- трофорез с использованием антител к оксидазной и неоксидазной фракциям, полученным сочетанием аффинной хроматографии и электрофореза в полиакрил- амидном геле, с последующим обогащением антител перекрестным истощением, после чего определяют отношение площади пика неоксидазной фракции к площади пика оксидаэной фракции, полученные значения для ребенка и родителя соотносят между собой и в случае здорового родителя при отношении, равном единице,.а в случае больного родителя при отношении 1/3 диагностируют гетерозиготное носительство у ребенка.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при диагностике и лечении заболеваний печени, в частности болезни Вильсона-Коновалова. Способ включает получение антител к оксидазоной и неоксидазной фракциями церулоплазмина, проведение ракетного иммуноэлектрофореза, определение площадей ракет неоксидазной и оксидазной фракции и их отношения. Полученные значения для ребенка и одного из родителей соотносят между собой и в случае здорового родителя при отношении, равном 1, а в случае больного родителя при отношении 1/3 диагностируют гетерозиготное носительство. Способ обладает минимальной травматичностью и практически безвреден для больного, а также диагностировать доклиническую стадию болезни Вильсона-Коновалова.