Стимулятор фагоцитоза лейкоцитов крови человека IN VIтRо Советский патент 1990 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в экспериментальной иммунологии и лабораторно-кли- нической практике для оценки резервов функциональной активности фагоцитирующих лейкоцитов (ФЛ) - нейтрофилов, макрофагов.

Целью изобретения является повышение фагоцитирующей активности лейко - цитов крови человека in vitro.

Пример. В качестве объекта стимуляции использовали лейкоциты периферической крови здорового донора с нормальным содержанием лейкоцитов и нормальной лейкоцитарной формулой. ФЛ получают из слоя гепаринизирован- ной плазмы крови (10 ед0гепарина/мл крови), образующегося в результате

спонтанного осаждения эритроцитов при комнатной температуре, отделяли от плазмы центрифугированием в два раза отмывали забуференным фосфатами (10 мМ) изотоническим раствором натрия хлорида (ЗФР) рН 7,2.

Функциональную активность ФЛ определяли в НСТ-тесте. Для этого суспензию отмытых ФЛ наносили на предметные стекла и инкубировали в течение I ч во влажной камере при 37 С для получения монослоя.-На сформированный монослой после тщательного отмывания ЗФР последовательно наносили ингредиенты реакции. Функциональную активность ФЛ одновременно определяли в трех параллельных исследованиях: без стимуляции (к клеткам добавляли

СП

о о

-si

о

00

0,05 мл 0,15 М фосфатно-солевого буфера рН 7,2) - спонтанная реакция и

по

:ле стимуляции в индуцированном

НСТ.-тесте (к клеткам добавляли 0,05 мл 10%-ного желатина или 0,05 мл эндотоксина в конечной концентрации 75 мкг/мл и по 0,05 мл 0,2%-ного раствора НСТ). После инкубации во влажной камере при 37°С в течение 30 мин маз- J ки фиксировали метанолом, докрашивали яд|ра клеток нейтральным красным и подсчитывали число диформазанположитель- ных клеток на 100 ФЛ„ Результаты выражали в процентах. Количество спон 1 танно активированных клеток 4%,индуцированная активность ФЛ после стимуляции желатином 67%, после стимуляции эндотоксином 43%.

Положительный эффект предлагаемого 2 изобретения подтверждается результатами многочисленных экспериментов, пДоведенных на клетках периферической крови 25 здоровых: доноров, которые обработаны статистически с использованием критерия t Стьюдента.

Применение желатина в качестве стимулятора ФЛ вызывает более высокую стимуляцию по сравнению с известным - бактериальным эндотоксином (,01)« Таким образом, значение применения желатина заключается в повышении чувствительности и точности метода определение резервов функциональной активности ФЛ, Кроме того, предлагаемый стимулятор по сравнению с аналогами и известным имеет следующие преимущества: желатин является отечественным коммерческим официальным и дешевым препаратом, что предоставляет широкие возможности для его использования.

Формула изобретения

Применение желатина в качестве стимулятора фагоцитоза лейкоцитов крови человека in vitro.

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано для оценки функциональной активности фагоцитирующих лейкоцитов (ФЛ) в экспериментальных исследованиях, а также в клинике для определения резервов функциональной активности ФЛ у больных для выявления различных дефектов макрофагальной системы с целью их коррекции. Цель - повышение фагоцитирующей активности лейкоцитов крови человека IN VITRO. Изобретение заключается в том, что в качестве стимулятора фагоцитоза используют отечественный официальный препарат - желатин, который обладает более выраженным стимулирующим действием по сравнению с наиболее активным известным стимулятором - бактериальным эндотоксином в НСТ-тесте. Активность фагоцитоза возрастает с 49,0±1,5 до 68,2±1,5%.