Способ получения сорбента для аффинной хроматографии Советский патент 1990 года по МПК C08B15/00 B01J20/24 B01J20/30 

Изобретение относится к получению сорбентов на основе целлюлозы и может быть использовано в аффинной хроматографии.

Цель изобретения - повышение эффективности иммобилизации белка и производительности сорбента.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. 10 г целлюлозы в виде медицинской марли ГОСТа 9412-77 обрабатывают 50 мл раствора йодной кислоты концентрации 0,123 моль/л (рН 4) при 25°С в течение 15 мин, затем отжимают до привеса 100% и выдерживают 18ч при .комнатной температуре в темном месте. Получают диаль- дегидцеллюлозу (ДАЦ), содержащую 0,247 мг-экв/г альдегидных групп.

0,76 г желатины заливают 19 мл фосфатного буфера с рН 7,5, выдерживают 30 мин, добавляют еще 19 мл буфера и выдерживают на водяной бане при 50°С до полного растворения. Получают 2%-ный раствор желатины.

3,7 г ДАЦ, содержащей 0, 247 мг-экв/г альдегидных групп, имеют в 2%-ный раствор желатины в фосфатном буфере (рН 7,5) при модуле 10 и выдерживают 3 ч при 50°С, затем отжимают до привеса 150% и выдерживают 16 ч при KOMJ

сл

vj

00

00 00

латной температуре. Полученный сорбент многократно промывают водой до полного отсутствия желатины в промывной воде. Контроль осуществляют спек- трофотометрически. Продукт содержит нл 1 г 25 мг иммобилизованной желатины. Количество химически связанной желатины равно 0,0925 г, что соответствует эффективности иммобилизации 12,2%. Производительность сорбента (% извлеченного вещества за 1 ч) по ф бронектину равна 56%.

1 Примеры 2-5. Выполйяют ана- логично примеру 1, но при других значениях параметров. Данные пред- ctasneHbi в таблице.

Пример 6. В кристаллизатор помещают 151 мл раствора углекислого натрия концентрации 200 г/л и в нЈго высыпают 302 г сернокислого эфирЈ 4-В-океиэтилеульфонил-2-аминоани- зрла и растирают стеклянной палочко др образования однородной массы. Зл- тЈм в эту массу помещают 15,1 г целлю лозы в виде медицинской марли и выдерживают 10 мин при комнатной тем- п ратуре и рН 11,0, отжимают до привеса 100% и запаривают 20 мин. Промы- в&ют многократно горячей водой и несколько раз ацетоном, высушивают и затем экстрагируют в ацетоне в аппарате Сокслета 4 ч.

8,2 г полученного эфира целлюлозы оррабатывают 164 мл 10%-ного раствора глутарового альдегида в фосфатном буфере, имеющем рН 6,2, при комнатной температуре в течение 24 ч при перемешивании, затем многократно промывают дистиллированной водой. Получают 2-(3 -амино-А-р-метоксифе- нил)сульфанилэтиловый эфир целлюлозы (СЭЦ). обработанный глутаровым альдегидом, содержащий 0,1 мг-экв/г альдегидных групп.

0,9 г желатины помещают в 18 мл фосфатного буфера на физиологическом растворе рН 7,5 и выдерживают сначапа 35 мин при 25°С, затем на водяной бане при 60°С до полного раст

ворения. патины.

Получают 5%-ный раствор же

0

5

0

5

0

5

50

2,2 г сульфанилэтилового эфира Целлюлозы, обработанного глутаровым альдегидом (ГА), помещают в нагретый до 60°С 5%-ный раствор желатины при модуле 8 и выдерживают сорбент при этой температуре 1 ч, а затем 19 ч при комнатной температуре. Далее отмывают сорбент попеременно .фосфатным буфером рН 7,5 и дистиллированной водой от избытка желатины до ее полного отсутствия в промывных водах. Контроль осуществляют спектрофото- метрически.

Продукт содержит на 1 г 70 мг иммобилизованной желатины. Количество химически связанной желатины равно 0,154 г,что соответствует эффективности иммобилизации 17%. Производительность сорбента по фибронектину составляет 75%.

Примеры 7-9. Выполняют аналогично примеру 6, но при других значениях параметров.

Примеры 10-12. Выполняют аналогично примеру 1, но в качестве белка использован альбумин.

Формула изобретения

Способ получения сорбента для аффинной хроматографии, включающий обработку целлюлозного текстильного материала, содержащего альдегидные группы, раствором белка и выделение целевого продукта, о т л и ч a rant и и с я тем, что, с целью повышения эффективности иммобилизации белка и производительности сорбента, в качестве целлюлозного текстильного материала используют диальдегидцеллюлозу с содержанием альдегидных групп 0,247-0,432 мг-экв/г или 2-(3 -амино- -4-(-метоксифенил)сульфанилэтиловый эфир целлюлозы, модифицированный глутаровым альдегидом, с содержанием альдегидных групп 0,10-0,15 мг-экв/г, в качестве белка - желатину, а обработку проводят 2-5%-ным раствором желатины в фосфатном буфере при температуре 50-60 С и модуле 8-10.

56 60 96 58

47 75 87 90 92 24 26 52

u j oo

w

CO

Изобретение относится к получению сорбентов на основе целлюлозы и может быть использовано в аффинной хроматографии. Изобретение позволяет повысить эффективность иммобилизации белка с 2,4 до 6,7-47% и производительность сорбента с 52 до 56-96% в 1 ч, что достигается обработкой диальдегидцеллюлозы с содержанием альдегидных групп 0,247-0,432 мг-экв/г или 2-(3 1-амино-4-β-метоксифенил)-сульфанилэтилового эфира целлюлозы, модифицированного глутаровым альдегидом, с содержанием альдегидных групп 0,10-0,15 мг-экв/г 2-5%-ным раствором желатины в фосфатном буфере при температуре 50-60°С и модуле 8-10. 1 табл.