Способ получения сорбента для аффинной хроматографии Советский патент 1990 года по МПК B01D15/08 

Изобретение относится к биоспецифическим сорбентам и может быть использовано для выделения чистых белковых рецепторов и антител гормонов.

Целью изобретения является повышение сорбционной емкости и сокращение длительности процесса получения сорбенТ 3.

Пример 1. Юг хлопковых волокон обрабатывают водным раствором периода- Р отношении йодной кислоты U,U7035 г на 1 г волокон при рН 4,5, модуле 5 и комнатной температуре в течение 24 ч Получают волокно со степенью окисления 5 X,. Полученное волокно обрабатывают 5%- ным раствором альбумина в забуференном физиологическом растворе при рН 8, модуле 5 в течение 6 ч при 20°С.

Волокно промывают водой в течение 1 ч при модуле 10 при 20°С и проводят

иммобилизацию гидрокортизона обработкой его 2%-ным раствором в 70%-ном водном диоксане в присутствии 50 мг 1-зтил-3-(3-диметиламинопропил)-карбоди- имида. Обработку продолжают 4 ч и добавляют еще 50 мг карбодиимидаМодуль обработки 5. Время 14 ч при 20°С.

Промывку целевого продукта проводят диоксаном в течение 1 ч при модуле 10 ч 80%-ным водным этанолом при модуле 51 ч и ВОДОЙ при модуле 10 15 мин. Контроль качества промывки проводят спектрофото- метрически. Целевой продукт содержит 50 мг/г альбумина и 15 мг/г гемисукцината гидрокортизона (табл. 1).

Пример 2. 10 г хлопковых волокон окисляют по примеру 1, но при отношении йодной кислоты 0,09849 г на 1 г волокна Получают волокно со степенью окисления 7%. Полученное волокно обрабатывают

сл

00

ON К4

10%-ным раствором альбумина в забуфе- ренном физиологическом растворе при рН 9, модуле 5 в течение 6 ч при 20°С. Волокно промывают водой и проводят иммобилизацию гидрокортизона обработкой его 3%- ным раствором в70%-ном водном диоксане в условиях примера 1. Промывку проводят по примеру 1. Целевой продукт содержит 100 мг альбумина на 1 г носителя и 20 мг гемисукцината гидрокортизона на 1 г носителя.

Пример 3. Окисление хлопковых .волокон проводят по примеру 1, но при отношении йодной кислоты 0,1407 г на 1 г волокна. Получают волокно со степенью окисления 10%. Полученное волокно обрабатывают 20%-ным раствором альбумина в забуференном физиологическом растворе при рН 10, модуле 5 в течение 6 ч при 20°С Волокно промывают водой и проводят обра ботку 5%-ным раствором гидрокортизона Б 70 %-ном водном диоксане в условиях при мера 1. Промывку проводят по примеру 1, Целевой продукт содержит 200 мг альбумина и 25 мл гормона на 1.г носителя.

Пример 4. Юг хлопковых волокон обрабатывают по примеру 1 для получения волокна, содержащего 50 мг/г альбумина. Вместо гемисукцината гидрокортизона к содержащему альбумин волокну добавляют 2%-ный раствор гемисукцината эстрадиола и иммобилизацию его проводят по примеру 1 для геммсукцината гидрокортизона. Целевой продукт содержит 50 мг/г альбумина и 16 мг/г гемисукцината эстрадиола.

Сорбционные свойства Приведены в табл.2.

-

Пример 5. Юг хлопковых волокон обрабатывают по примеру 2. но вместо гемисукцината гидрокортизона добавляют такое же количество гемисукцината эстрадиола. Промывку проводят по примеру 1. Целевой продукт содержит 100 мг альбумина на 1 г носителя и 22 мг гемисукцината эстрадиола на 1 г носителя (табл. 2).

Пример 6. Окисление 10 г хлопкового волокна и иммобилизацию на него альбумина проводят по примеру 3. При обработке гормоном вместо гемисукцината гидрокортизона добавляют такое же количество гемисукцината эстрадиола (5%-ный раствор в 70%-ном диоксане в условиях примера 1), Промывку проводят по примеру 1. Целевой продукт содержит 200 мг альбумина и 27 мг гормона на 1 г носителя (табл. 2).

Данные по сорбционной емкости сорбентов, полученных предлагаемым и известным способами,представлены в табл. 1 и 2.

15

Из табл. 1 и 2 видно, что предлагаегльм способ позволяет получить сорбент, содержащий в 10 раза больше иммобилизованного гормона, сорбционной емкостью в 220-370 раз больше, чеи у сорбента, получа- 20 sMoro по известному спссойу. Длительность процесса сокращается с 73 до 40 ч, а полуна- емый сорбент не требует особых условий хранения и может храниться при атмосферном давлении и комнатной температуре.

25Формула изобретения

Способ получения сорбента для аффинной хроматографии, включающий последовательную обработку текстильного носителя, содержащего альдегидные группы, водным

30 раствором альбумина.и раствором гормона в 70%-ном водном диоксане в присутствии карбодиимида с последующей промывкой полученного сорбента, отличающийся тем, что, с целью повышения сорбционной

35 емкости и сокращения длительности процесса, в качестве текстильного носителя используют альдегидсодержащий целлюлозный материал со степенью окисления 5- 10%, обработку проводят 5-20%-ным

40 раствором альбумина в физиологическом растворе прирН 8-Ю до содержания альбумина 50-200 мг/г носителя и затем 2-5%- ным раствором гормона до содеркания 15-25 мг/г носителя и продукт последова45 тельно промывают диоксаном, 80%-ным водным раствором этанола и водой.

Таблица 1

Таблица 2

Изобретение относится к биоспецифическим сорбентам и позволяет повысить сорбционную емкость и сократить длительность процесса получения сорбента. Хлопковые волокна обрабатывают водным раствором периодата натрия до степени окисления 5-10%, затем носитель обрабатывают 5-20%-ным раствором альбумина в физиологическом растворе при PH 8-10 в течение 6 ч. Носитель промывают водой и обрабатывают 2-5%-ным раствором гормона в 70%-ном диоксане в присутствии карбодиимида. Продукт промывают диоксаном. 80--ным водным этанолом и водой. Получают сорбент с содержанием гормона 15-25 мг/г. 2 табл.