Способ оценки растений на устойчивость к фузариозу Советский патент 1990 года по МПК A01H1/04 

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции растений.

Цель изобретения - ускорение оценки и снижение трудоемкости процесса.

Способ осуществляют следующим образом.

Семена испытываемых образцов проращивают на фильтровальной бумаге, смоченной дистиллированной водой, в течение 1-2 сут при 24°С, отрезают кончики корней длиной 3-5 мм, разрезают их вдоль и помещают в мацерирующий раствор, содержащий, г на 100 мл раствора: пектиназа 0,5-1; целлюлаза 1,5-2; хлористый кальций (CaClz- HiO) 5,0-5,5 и итаконовая кислота 0,005-0,01. Материал инкубируют в темноте в течение 10-14 ч при 24°С. После инкубирования осторожно встряхивают и подсчитывают выделившиеся протопласты под микроскопом. По количеству изолированных протопластов судят о степени устойчивости к фузариозу. В качестве биологических стандартов используют образцы с известной иммунологической характеристикой. Наибольшее количество протопластов выдапя- ется у восприимчивых образцов, наименьшее - у устойчивых.

Учитывая, что активность ферментов бывает различной, в опыте целесообразно использовать только оптимальные значения их концентраций, а именно: целлюлазы - 22,5- 30,0 ед/мл, пектиназы - 2,5-5,0 ед/ /мл.

Пример. Оценку на устойчивость к фузариозу проводят на сортах клевера лугового - ВИК 7 (восприимчивый) и Московский 1 (устойчивый), и озимой пшеницы - Безостая 1 (восприимчивый) и Мироновская 808 (устойчивый). Семена стерилизуют в течение 5 мин в 96%-ном этаноле и 0,1%- ном растворе диоцида с последующей трехкратной промывкой дистиллированной водой, после чего проращивают в чашках Петри на фильтровальной бумаге, смоченной дистиллированной водой. Семена клевера проращивают в течение 1 сут, пщеницы - 2 сут при 24°С в темноте.

У пророщенных семян отделяют кончики корней длиной мм и помещают в чащки

сд

со

00

со ю

00

Петри диаметром 40 мм, в которые предварительно заливают по 3 мл мацерирующего раствора. В каждую чашку помещают по 20 кончиков корней испытываемого образца. Испытания проводят в 4-кратной повтор- ности. Мацерирующий раствор содержит, г на 100 мл раствора: целлюлаза (Онозу- ка Р-10) 2; пектиназа. (Мацерозим Р-10) 1; хлористый кальций 5,2 и итаконовая кислота 0,01 (,5).

Материал инкубируют в темноте при 24°С в течение 10-14 ч, затем осторожно встряхивают и подсчитывают количество выделившихся протопластов в гемоцитометре Фукс- Розенталя под микроскопом.

Существенное влияние на количество выделившихся протопластов оказывало добавление итаконовой кислоты, оптимальные концентрации которой лежали в пределах 0,005-0,01 г на 100 мл раствора.

При испытании селекционных образцов данным способом и сравнении полученных данных с результатами полевых испытаний установлена положительная корреляция между количеством выделившихся протопластов и развитием болезни в поле (,96 при уровне значимости 0,05).

В таблице приведены данные об эффективности определения устойчивости по количеству протопластов.

Способ значительно сокращает время и затраты труда на оценку устойчивости растений к фузариозу.

Формула изобретения

Способ оценки растений на устойчивость к фузариозу, включающий проращивание 0 семян и последующее определение биологического показателя, по которому оценивается устойчивость к фузариозу, отличающийся тем, что, с целью ускорения оценки и снижения трудоемкости процесса, проращивание осуществляют в течение 1-2 суток, в качестве биологического показателя используют количество протопластов, выделившихся из кончиков корней, при этом их выделение осуществляют путем погружения в мацерирующий раствор, содержащий фер- 0 менты целлюлазу и пектиназу, хлористый кальций, итаконовую кислоту и воду при следующем соотношении компонентов в маце- рирующем растворе:

Целлюлаза

Пектиназа 5 Хлористый кальций

Итаконовая кислота

Вода

5

22,5-30,0 ед/мл 2,5-5,0 ед/мл 5,0-5,5% 0,005-0,010%

Остальное

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции растений. Цель изобретения - ускорение оценки и снижение трудоемкости процесса. Для оценки растений на устойчивость к фузариозу семена испытываемых образцов стерилизуют и проращивают в чашках Петри на фильтровальной бумаге. У проростков отделяют кончики корней длиной 3-5 мм и помещают их в мацерирующий раствор, содержащий ферменты: пектиназу 22,5-30,0 ед/мл

целлюлазу 2,5-5,0 ед./мл, хлористый кальций 5,0-5,5%

итаконовую кислоту 0,005-0,01% и воду. Материал инкубируют в темноте в течение 10-14 ч при 24±1°С. После инкубирования под микроскопом подсчитывают количество протопластов. В качестве стандартов используют сорта с известной степенью устойчивости. 1 табл.

ВИК 7 (стандарт восприимчивости} Московский 1 (стандарт устойчивости) Гибрид РЗ № 67 Bytown

53,3 78,2

46,0 83,6 27,9