Способ получения нейраминидазных антигенов вируса гриппа птиц Советский патент 1990 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, в частности к способу получения нейраминидаз- ных антигенов, пригодных для исполь- зова1шя в серологической диагностике 1риппа птиц.

Целью изобретения явллется упрощение способа и повышение выхода целевого продукта.

Пример. Для приготовления препаратов нейраминидазных антигенов используют вируссодержащую аллантоис- ную жидкость вирусов гриппа птиц

А/ивдюшка/ Массачузетс/ 65 / Н6 №2/, А /утка/ Англия/56 /НП ,А/утка/ /Украина/63 (Н3№8) с титром гемагглю- тинина не ниже 1:128 и нейраминидаз- ной активностью не ниже 1,000 ед. о птической плотности.

Вируссодержащую аллантоисную жидкость разводят фосфатно-солевым буферным раствором (рН 5,9-6,0) в 8 раз для устранения фона свободных сиало- вых кислот. Титр гемагглютинации в разведенном материале не должен быть 1шже 1:8. Разведенную пируссодержао:) 00

4

00

щую жидкость разливают по пробиркам в объеме 5,0-1,0 MII и прогревают в водяном ультрятермостате 30 мин в температурном режиме 54-58°С, (пред- арительно устанаапивают для каждого штамма в отдельности, до полного устранения геммаглютинации). Затем пробы охлаждают водопроводной водой в течение 3-5 мин и определяют титр гемагглютинации с 5%-ным раствором эритроцитов пету-х.а в капельной реак- ;щи гемагглютинации. При отсутствии гем. гглютинации в прогретом вир усе о- держащем материале определяют нейра- .iiiiiiUiTз {ую активность. Для этого к 0,2 мл прогретой вируссодержащей жидкости добавляют О,2 мл фосфатно-со- j.p.noro буфера и 0,2 мл овомуцина и выдерживают при 37,0-37,5 С в течени 16-18 ч. В охлажденных до комнатной г мпературы пробах определяют нейра- г а нидазную активность.

Экстинпию реакционной смеси определяют спектрофотометрически при дли }ie волны 549 нм против овомуцина в 1чачестве контроля. Нейраминидазная активность прогретой вируссодержащей )кидкости должна быть не ниже 0,400 ед. оптической плотности.

Для инактивации нейраминидазных ант.-гпнов берут 0,01 мп формалина, содержащего 26% формальдегида, на 3 мл прогретой вируссодержащей жидкости.

Использование способа получения нейраминидазных антигенов вируса

5

0

5

0

5

гриппа птиц позволяет по сравнению с изпестн)1м число этапов, умсныш1ть длительность, не требует использования дорог остоящей и трудоемкой в применении aiuiapaTyiJiii, дорогостоящих ферментативных препаратов

П табл. 1 представлен уровень ней- раминидазиой активности при различной TennepaTi-pe прогревания вируссодержащей жидкости.

В табл. 2 представлен уровень ной- раминидазной активности при различной продолжительности прогревания.

Формула изобретения.

Способ получения нейраминидазных антигенов вируса гриппа птиц, вклю- 1ающцй заражение куриных эмбрионов вирусом гриппа птиц, накопление ви- руссодержащего материала, его обработку и контроль полученного антигена на нейраминидазную активность, отличающийся тем, что, с целью )1ия способа и повышения выхода целевого продукта, в качестве вируса т риппа птиц используют щтаммы вируса гриппа птиц, содержащих в своем составе нейраминидазу более термостабильную, чем гемагглютинин, а обработка вируссодержащего материала включает разведение вируссодержащей аллантоисной жидкости в 4...8 раз буферным раствором рН 5,9...6,О с по- следуюг(им прогреванием при 54. . .58 С, до исчезновения гемагглютинирующей активности.

Таблица 1

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, в частности к способам получения нейраминидазных антигенов, пригодных для использования в серологической диагностике гриппа птиц. Целью изобретения является упрощение способа и повышение выхода целевого продукта. Для этого используют штаммы вируса гриппа птиц, содержащие в своем составе нейраминидазу более термостабильную, чем гемагглютинин. При этом накопленную вируссодержащую аллантоисную жидкость разводят буферным раствором в 4-8 раз и прогревают при 54-58°С до исчезновения гемагглютинирующей активности. Критерием качества препарата является сохранение нейраминидазной активности на уровне, достаточном для проведения реакции подавления нейраминидазной активности. 2 табл.

А/индюшка/

Массачузетс/

56/H6N2/

А/утка/Англия/ 56/H11N6/

0,880 0,810 0,161 0,078

1,200-1,100 1,152-1,153

0,900

0,889

0,687

0,281

0,068

А/утка/Укра)т11а/ 63/II3N8/

+ - положительная. - - отрицательная.

А/и нд кмика/Ма ссачуэетс/б5/

56

А/утка/Англия/

/56/F II Мб/54

А/утка/Украи- на/63/НЗК 8/ 58

0,880 0,810 0,387 0,076

1,152 1,053 ,,034 1,030

+ - положительная реакция гемагглютинации - отрицательная реакц;1я гемагглютинации

А - неираминндаэная активность, ед. оптической

Продолжение табл,1

++++

1,600 1,352 0,809 0,116 0,053

Таблица 2

плотности.