Штамм вируса гриппа ГКВ N 2263, используемый для приготовления диагностических препаратов Советский патент 1992 года по МПК C12N7/00 A61K39/145 

сл

с

Использование: медицина, вирусология, приготовление диагностических препаратов. Сущность изобретения: штамм выруса гриппа ГКВ №2263 А/Чимкент/48/90 представляет собой дрейф-вариант прото- типного штамма А/Сычуань/2/87 (НН 32). Он хорошо репродуцируется в системе куриного эмбриона при 37°С в течение 48 ч до инфекционного титра 5 ед ЭИДбо/0,2 мл. Штамм хорошо агглютинирует эритроциты кур, в низких титрах эритроциты морской свинки и белых крыс, практически не элю- ирует с куриных эритроцитов, слабопатогенен для белых мышей, обладает низкой генаагглютинирующей активностью и высокой иммуногенностью. Был выявлен оригинальный антигенный компонент, специфичный только для данного штамма. 5 табл.

Изобретение относится к вирусологии и может быть использовано для получения ди- агностикума вируса гриппа.

В последние годы вирусы гриппа всех сероподтипов. в том числе и A(H3N2) характеризуются резко выраженной гетерогенностью. Нарастание гетерогенности вирусов A(H3N2) может предшествовать появлению нового антигенного варианта. В связи с этим прогностическое значение может иметь установление направленности процесса изменчивости антигенной структуры возбудителя, а токже оперативное выявление новых антигенных вариантов. Изоляты эпидемий 1990 г. В Казахской ССР относились к сероподтипу A(H3N2) и 8 основном были близки международным референс - штаммам А(Сычуань) 2/78, А (Гуандонг) 39/89.

Предлагаемый штамм А (Чимкент)48/90 представляет собой дрейфвариант прототипного штамма А (Сычузнь) 2/87. Штамм выделен из носоглоточного смыва больного человека на развивающихся куриных эмбрионах в январе 1990 г. во время эпидемической вспышки гриппа в городе г. Чимкентке (Казахская ССР) и хранится в коллекции Института вирусологии им. Д И. Ивановского АМН СССР (депонент Me 2263).

Целью изобретения является получение штамма вируса гриппа А (Чимкент) 48/90 (H3N2), обладающего специфической иммуногенностью, позволяющей использовать его для приготовления диагностических препаратов при идентификации вновь выделенных вирусов.

Идентификацию гемагглютинина вновь выделенного штамма проводили согласно рекомендациям ВОЗ в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с использованием набора иммунных сывороток к эталонным штаммам вирусов гриппа сероподтипов

vl (Л О GO СЛ

со

A(HINI). A(H2N2), A(H3N2) и серотипа В. Идентификацию нейраминидазы осуществляли в реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) с знтительными эритроцитарными диагностикумами к рекомбинатным вирусам Р-17 (HeqlN2) и Р-1Э (HeqINI). Антигенную структуру гемагглютинина изучали в РТГА с набором поликлонэльных иммунных сывороток к эталонным штаммам вируса A(H3N2). Дополнительно проводился тонкий иммунологический анализ изолята в РТГА с моноклональными антителами к вирусу А (Филиппины) 2/82 и моноспецифиче- скимм антителами к отдельным антигенным детерминантам гемагглютинина подтипа НЗ. Результаты изучения антигенной структуры представлены в таблицах 1-5.

В РТГА с поликлональными референс- сыворотками штамм А (Чимкент) 48/90 до 1/4-1/16 гомологичного титра взаимодействует с сыворотками к эталонам А (Филиппины) 2/82, А (Кен) 1/84, А (СССР) 2/85, А (Ленинград) 360/86, А (Виктория) 7/87, А (Сычуань)2/87.

Применение моноклональных антител к вирусу группа А(Филиппины) 2/82 позволило выявить антигенное своеобразие нового штамма. Эпитопы его опознавались 6 из 13 использованных моноклональных антител.

Использование в иммунологическом анализе моноспецифических (монорецеп- торных) антител к отдельным детерминантам гемагглютинина, полученных методом специфической иммуноадсорбции. дало возможность получить в РТГА объективную оценку антигенной новизны гемагглютинина. В составе гемагглютинина вируса А (Чимкент) 48/90 имеются общие детерминанты с актуальным референс-штаммом А (Сычуань)2/87-Н3.14, НЗ. 16, и, что особенно важно, был выявлен качественно новый оригинальный антигенный компонент, характеризующий специфичность нашего штамма (штаммоспецифическая детерминанта). Эти данные подтверждены при мм- муноадсорбционном анализе крысиной сыворотки к вирусу А (Чимкент) 48/90, которая реагировала с вирусом А (Сычуань) 2/87 до 1/4 гомологичного титра.

Адаптационные свойства. Выделенный от человека вирус А (Чимкент) 48/90 репродуцируется в системе куриных эмбрионов при оптимальной температуре (37°С) до инфекционного титра 5 Ig ЭИДбо/0,2 мл. Штамм обладает низкой гемзгглютинирую- щей активностью (1:32-1:128) и высокой им- муногенной (титр в РТГА 1:640-1:1280).

Свойство агглютинации. Вирус обладает узким спектром гемагглютинирующей ах

тивности. Он хорошо агглютинирует эритроциты кур (1:32-1;128), слабее - морских свинок (1:16-1:32), в низких титрах агглютинирует эритроциты белых мышей (1:4-1:8) и совершенно не взаимодействует с эритроцитами лошади,овцы,свиньи,крупного рогатого скота и белых мышей.

Терморезистентность (Тзе-признак)

Предлагаемый вирус обладает термостойким гемагглютинином. Гемагглютинирую- щая активность его сохранялась после прогревания при 56°С в течение 4 ч и утрачивалась при 62°С за 1 ч.

Ингибиторочувствительность, Исследуемый штамм проявляет чувствительность к термолабилным ft -ингибиторам сывороток белых мышей, кролика, овцы, крупного рогатого скотз, резистентен по отношению к

сывороточным ингибиторам лошади, морских свинок, свиней, кур, белых крыс,

Адсорбционно-элюирующая активность. Новый штамм обладает высокой адсорбирующей способностью по отношению

к эритроцитам кур (90-95%) и практически не элюирует с эритроцитом.

Штамм, выделенный от человека (А/Чимкент/48/90), предназначен для npoj изводства гриппозного антигена, который

может быть использован при серологической диагностике гриппа. С этой целью штамм размножают путем заражения 10-11 дневных куриных эмбрионов в аллантоис- ную полость

Пример. Лабораторные животные - белые крысы. Схема иммунизации. Иммунные сыворотки получают в результате 4- кратной внутрибрюшинной иммунизации белых крыс вируссодержащей аллантоисной жидкостью с недельным интервалом. Животных обескровливают через 10 дней последней иммунизации. Иммунную сыворотку освобождают от неспецифических ингибиторов обработкой отечественным

препаратом нейраминидазы нехолерного вибриона.

Титр иммунной сыворотки предлагаемого препарата в РТГА с гомологичным антигеном составляет (1:640)-(1:1280), с

гетерологичными антигенами вируса гриппа человека реакция отрицательна.

Таким образом, предлагаемый штамм вируса гриппа А (Чимкент) 48/90

сероподтипа A(H3N2), изолированный от человека, и приготовленные на его основе диагностические препараты должны майти применение в вирусологической практике при идентификации вновь выделенных

штаммов вируса гриппа и изучении популяционного иммунитета населения с целью надзора за распространением вируса гриппа в природе и процессом антигенной изменчивости возбудителей гриппозной инфекции.

Исследование антигенной структуры гемагглютинина штамма вируса гриппа А(Чимкент)

48/90 в РТГА

Примечание . Здесь и в последующих таблицах титры даны в обратных величинах.

Та б ли ц а 2 Анализ в РТГА иммунной сыворотки к штамму вируса гриппа А(Чимкент) 48/90

Формула изобретения

Штамм вируса гриппа А(НЗ№2) ГКВ fsfe 2263, используемый для приготовления

5 диагностических препаратов.

Таблица 1

Таблица 3

i

Исследование антигенной структуры нейраминидазы штамма вируса гриппа А(Чимкент) 48/90 в РПГА с антительными эритроцитами диагностикумами

Таблица 4

Изучение антигенных взаимосвязей штамма вируса гриппа А(Чимкент) 48/90 с моноклональными антителами

Исследование состава антигенных детерминант гемагглютинина штамма вируса гриппа А (Чимкент) |8/90 методом специфической иммуноадсорбции

Таблица5