Изобретение относится к индустриальному рыбоводству, а именно к получению живых стартовых кормов, используемый при подращивании личинок рыб, а также в микробиологической промышленности
Цель изобретения - получение и использование штамма бактерий Flavobacterium aguatile ВКМ-1651Д, способного высокоэффективно обеспечивать рост культуры инфузорий клона- Рага- mecium caudatum CA-2, отвечающего всем требованиям способа выращивания
Предлагаемый штамм бактерий Flavobacterium aguatile BKM-1651 Д выделяли путем многоступенчатого отбора из образцов прудовой воды в весенний пе- риодо Многоступенчатый отбор включал в себя массовые выделения чистых культур сапрофитных микроорганизмов методом Коха из стерильно отбираемых проб прудовой воды с последующим отбором штаммов, предпочитаемых инфузориями клона Paramecium caudatum CA-2 no хемосенсорным реакциям0
Заключительным этапом отбора штаммов явилось изучение удельной скорости роста индивидуальных и массовых культур инфузорий на суспензиях отобранных штаммов о
Выделенный штамм бактерий Flavobacterium aguatile BKM-1651 Д идентифицирован и определен по определителю
Бергио
Предложенный штамм бактерий Flavobacterium aguatile BKM-1651 Д хранится во Всесоюзной коллекции микроорганизмов ИБФМ АН СССР под номером В-1651 Д0 Клон инфузорий Paramecium caudatum СА-2 хранится в музее беспозвоночных организмов биотехнологической лабора- тории Г0 Днепропетровска.
Полученный штамм бактерий Flavobacterium aguatile BKM-1651 Д имеет следующие морфологические и физиологические характеристикио
Клетки представляют собой короткие палочки размером 1x0,25 мкм, грам- отрицательные, спор не образуют, без жгутиково
с
@
с& tc
&о
Рост на МПА при 2У°С в виде круглых колоний, поверхность которых гладкая, профиль выпуклый, колонии блестящие, образующие желто-оранже - вый пигменто
Кроме МПА штамм культивировали на среде Чапека следующего состава, г/л: глюкоза 20; NaNO 2; КгНР04 1; MgS(H 7; HZ0 0,5; KCl 0,5; FeSO«. 0,1; агар 20j вода дистиллированная 1 л при тех же условияко
Колонии круглые до 2 мм в диаметре, поверхность гладкая, профиль выпуклый, пигментация оранжевая
На крахмальной среде состава, г/л: пептон 10; К2НР04 5, крахмал растворимый 2, агар 20, вода дистиллированная 1 л, в аналогичных условиях культивирования на вторые сутки наблюдали рост штамма в виде круглых колоний морфологически сходных с ростом на МПА в среде Чапека ,
Температура культивирования 28°С при 37 С рост отсутствуете Минималь- нал температура культивирования штамма 15-16°Со рН среды 7,2-7,А о В добавках солей Had не нуждается, гид- ролизует желатину, казеин и не гидро лизует крахмал, целлюлозу, агар, кис лоты образует из следующих Сахаров: глюкозы, сахарозы, мальтозы
Не дает положительной реакции с метиловым красным и на присутствие в среде цитратов не образует индола, Е„5 не обладает уреазной активностью не восстанавливает нитриты до нитратов, каталазоположительныйо
Растет на среде МПБ и на среде, приготовленной из отходоз мясокомби- натов - бульонов от варки субпродуктов с добавлением 2%-ной глюкозы,,
Рост штамма на жидкой среде МПБ с добавлением 2%-ной глюкозы после 2- суточной инкубации характеризовался умеренным помутнением среды без образования пленки на поверхности и осадкао Помимо МПБ культура выращивалась при тех же условиях на среде Гисса (пептон 10 г, NaCl 5 г, вода дистиллированная 1 л, глюкоза 1%)0 Рост характеризовался слабым помутнением среды без образования газа и бес осадка.
Данный вид бактерий является типичным представителем автохтонной водной микрофлоры, играет большую . роль в питании гидробионтов и не явг
o
5
0
5 о
г
0
$
5
ляется патогенным для беспозвоночных организмов„
Предложенный штамм бактерт й хранится на скошенном МПА с добавлением 2%-ной глюкозы под вазелиновым маслом Для длительного хранения штамм следует лиофильно высушивать и запаи- вахь в стеклянные ампулы стерильно,,
Новый штамм Flavobacterium aguat ВКМ-1651 Д обладает способностью при использовании его биомассы высокоэффективно обеспечивать рост инфузорий Paramecium caudaLum СА-2 без аэреции перемешивания среды и без использования специальных сред для культивирования инфузорий,,
В табл0 1 приведены сравнительные данные продуктивности периодической чультуры инфузорий Paramecium cauda- tum СА-2 при росте на различных видах микробиального корма на деминерализованной среде Лозина-Лозинского и на водопроводной воде
Использование предложенного штамма при получении живого стартового корма для личинок рыб осуществляют следующим образомD
Заполняют водой (водопроводной дехлорированной артезианской, прудовой) не содержащей живого зоопланктона любые имеющиеся емкости любой глубины Вносят биомассу бактерий штамма Flavobacterium aguatile ВКМ-1651 Д из расчета 0,1-0,2 г/л (сырой массы)
Биомассу бактерий вносят по сырой массе с целью упрощения проведения процесса массового культивирования инфузорий, учитывая постоянную величину влажности 80%, изменяющуюся в допустимых пределах концентрацию микроорганизмов и титры клеток бакаерий штамма Flavobacteriura aguatile BKM- ВКМ-1651 Л в культуральной воде (табло 2) „
Титр клеток определяли на ФЭК-56 при красном светсфильтре (длина волны 610 нм)с
Биомасса бактерий используется в живом виде с культуральной средой и без таковой в лиофильно высушенном и замороженном состоянии,, После этого в полученную бактериальную суспензию вносят культуру инфузорий Paramecium caudatum СА-2 в таких количествах, чтобы концентрация организмов составила в растворе 10-200 клеток в 6 м3„ Время цикла культивирования инфузорий
зависит от исходной концентрации организмов в растворе„
При концентрации организмов 10 - 50 мг/мл время созревания культуры 5-6 сут при концентрации 100-200 мг/мл 2-3 сут„ Температура инкубирования
20-28°С, рН 7-8,50 Процесс не требует аэрации, перемешивания среды и регулирования светового режимао
Получаемая биомасса инфузорий хорошо поедается в живом виде личинками карповых и сиговых рыб и может непосредственно подаваться в лотки с личинками без отделения культураль- ной воды, при этом не происходит загрязнения воды в лотках ядовитыми продуктами распада органических веществ (табл„ 3)о
Пример 1 о Заполняют чистой водой, свободной от зоопланктонных организмов, емкости, вносят биомассу
бактерий штамма Flavobacterium aguatil ВКМ-1651 Д9 не отделенную от культу- ральной среды, из расчета 0,1 г/л0 После этого вносят инокулянт инфузорий клон Paramecium caudatum CA-2 и доводят плотность организмов в исходном растворе до 10 мг/мл„ Выдерживают 5 сут при 20°Со Через 5 сут получают корм, состоящий из живой биомассы инфузорий в количестве 3 г/л При увеличении инокулянта инфузорий до плотности 200 мг/млэ время выдержки составляет 2 сут о
Пример 20 Заполняют емкости чистой водой и вносят биомассу бактерий в замороженном состоянии штамм Flavobacterium aguatile ВКМ-1651 Д из расчета 0,2 г/л0 Вносят инокулят культуры инфузорий клон Paramecium
caudaturn CA-2 из расчета достижения плотности организмов в роде 100 мг/млс Выдерживают 2 сут при 21°С0 Через
2 сут получают корм, состоящий из живой биомассы инфузорий в количестве 4,5 г/л о
Пример За Заполняют емкости чистой водой и вносят биомассу бакте-
рий, лиофильно высушенную и расфасованную в запаянные ампулы, из расчета 0,2 г/ло Вносят инокулят культуры инфузорий клон Paramecium caudatum СА-2 из расчета достижения плотности
организмов в воде 200 мг/мло Выдерживают 2 сут при 25°С„ После выдержки получают корм, состоящий из живой биомассы инфузорий в количество г/л-. Из приведенных примеров видно,
что с использованием биомассы бактерий Flavobacterium aguat ile ВКМ-1651 П можно легко получить живой стартовый корм в любое время года и без специального оборудования для культпвирования инфузорий в количествах 3 - 4,5 г/ло Время созревания культуры в зависимости от количества задаваемой биомассы бактерий и величины ино- кулята составляет 2-5 сут, при этом
оно легко регулируется0
Предлагаемьй штамм бактерий позволяет получать наиболее предпочитаемый личинками рыб инфузориальный корм в виде биомассы инфузорий Paramecium caudatum CA-20
Формула изобретения
Штамм бактерий Flavobacterium aguatile ВКМ-1651 Д, используемый для получения живого стартового корма при подращивании личинок рыб0
Изобретение относится к индустриальному рыбоводству, а именно к получению живых стартовых кормов для личинок рыб, а также к микробиологической промышленности Целью изобретения является получение штамма бактерий Flavobacterium aguatile BKM- 1651Д, используемого для получения живого стартового корма при подращивании личинок рыб о 3 табл„
Таблица 1
Таблица 2
Paramecium caudatum
Опыт Контроль
О60,0±10,5 60,0+11,1 500+27,3 570+77,3
858,3+9,6 103,3+13,9 2410+86,7 1895+78,6
2458,3+14,7 156,6±23,6 2176+107,4 1966+63,95
7231,6+6,5 156,6+13,51133,3+66,81146+75,4
Таблица 3
Tetrahymena piriforenis Опыт Контроль
| Способ получения живых кормов для личинок рыб | 1979 |
|
SU1041081A1 |
