ШТАММ БАКТЕРИЙ BACILLUS LICHENIFORMIS, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОБИОТИЧЕСКОГО ПРЕПАРАТА, ПРЕДНАЗНАЧЕННОГО ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЖИВОТНЫХ, ПТИЦЫ И РЫБЫ Российский патент 2003 года по МПК C12N1/20 A61K35/74 C12N1/20 C12R1/10 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологической промышленности для получения пробиотического препарата, применяемого в ветеринарии при лечении и профилактике желудочно-кишечных заболеваний животных, птицы и рыб.

Известен штамм бактерий Bacillus licheniformis 31 (Институт микробиологии и вирусологии им. акад. Д.З. Заболотного НАН Украины), используемый в качестве одного из компонентов бактериального препарата биоспорин, предназначенного для лечения гнойно-септических заболеваний (SU 1722502 А1, кл. А 61 К 39/02, 1989).

Известен штамм бактерий Bacillus licheniformis 1C-1 (ВКПМ В-7038), используемый в качестве компонента бактериального препарата, обладающего широким спектром антивирусной и антибактериальной активности (RU 2142287 С1, кл. А 61 К 35/74, 10.12.1999).

Однако недостатком данного штамма можно считать особенного проявления его активности в составе комплексного бактериального препарата.

Задачей изобретения является выявление нового бактериального штамма Bacillus licheniformis, обладающего антибактериальной активностью по отношению к широкому спектру Гр+ и Гр-микроорганизмов, продуцирующего антибиотик широкого спектра действия, использования его в качестве бактериального пробиотического препарата для ветеринарных целей и рыбного хозяйства.

Технический результат достигается при осуществлении изобретения - повышение эффективности лечения, усвояемости кормов, повышение продуктивности и привесов животных, птицы, рыб.

Штамм бактерий Bacillus licheniformis В-1602 депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов ИБФМ им. К.С. Скрябина РАН под В-2252Д.

Штамм получен из природного изолята (почва). Подвергался селекции на подавление роста патогенных штаммов: стафилококка, синегнойной палочки, сальмонелл, трихофитов, протея, эпидермитов, кандидомикозов и др.

Культурально-морфологические и биохимические свойства штамма Bacillus licheniformis BKM В-2252Д.

Грамположительная палочка, способная образовывать споры. Размеры вегетативных клеток 2-5 мкм. Споры одиночные, центральные или овальные, подвижные. Жгутикование - перитрих.

Вегетативные клетки Bacillus licheniformis BKM В-2252Д хорошо растут на богатых питательных средах - МПА, МПБ и ПЖА при температурах 50^oС, рН 5,0-8,0. На МПА (мясопептонный агар) образует колонии белого цвета. Пигмент в среду не выделяет. Наблюдается рост до 7% NaCl.

Гидролизует глюкозу, мальтозу, сахарозу, оксидазо- и каталазоположителен.

Несбраживаемые соединения углерода: лактоза, маннит, сахароза.

Утилизирует ацетат и цитрат при аэробном выращивании.

Штамм нетоксичен для животных, человека и растений.

Штамм Bacillus licheniformis BKM В-2252Д продуцирует антибиотик широкого спектра действия, подавляющий стафилококки, грибки и синегнойную палочку.

Характеризуется показателями задержки роста тест-культуры, мм (метод перпендикулярных штрихов), представленными в таблице.

Для культивирования штамма Bacillus licheniformis ВКМ В-2252Д используют жидкую питательную среду на основе 0,3% ФГМС, рН 6,8-7,0, содержащую 0,2%-ную глюкозу (по сухому веществу), 0,005%-ную аминопептидазу или 0,02%-ную сыворотку крови.

Сухую биомассу микроорганизмов предварительно высевают в пробирку с мясопептонным бульоном (МПБ). При появлении видимого роста колонии пересевают на мясопептонный агар в пробирки.

Отбирают типичные колонии и пересевают их на жидкую среду МПБ во флаконах. Через сутки выросшую биомассу переносят в 15-литровую бутыль с 9-ю литрами питательной среды и культивируют 22 часа при 37-40^oС, получая посевной материал.

Питательную среду на основе ФГМС помещают в реактор, стерилизуют, охлаждают и засевают полученным материалом. Проводят аэробное культивирование при рН 6,8-7,2 с поддержкой 40%-ным раствором глюкозы.

При достижении концентрации 20 млрд. бактериальных клеток прекращают подачу глюкозы и отключают подачу воздуха при достижении рН 4,6.

Полученную культуральную жидкость с биомассой охлаждают до 20^oС, перекачивают в емкости или расфасовывают во флаконы.

При указанном способе культивирования получают препарат в виде жидкой лекарственной формы, названной "Субтилис-Л", с содержанием 85-90% спор бактерий Bacillus licheniformis ВКМ В-2252Д.

Препарат "Субтилис-Л" безвреден и не содержит посторонней микрофлоры. Безвредность проверена на белых мышах массой тела 18-20 г и на годовиках карпах, которым перорально вводили 1,0 мл препарата.

Пробиотическая активность препарата "Субтилис-Л" в одной дозе (15-20) млрд. клеток/мл.

Предлагаемый штамм Bacillus licheniformis ВКМ В-2252Д может быть использован как производственный для получения препарата пробиотического действия, рекомендуемого для лечения желудочно-кишечных заболеваний животных, птицы и рыб.

Изобретение поясняется примерами.

Пример 1. Бактериальная геморрагическая септицемия карпа.

В прудовом хозяйстве заболела рыба с клиническими признаками бактериальной геморрагической септицемии. Лабораторный анализ патматериала показал наличие патогенной микрофлоры во внутренних органах рыб. Количество больных рыб (двухлетки карпа) достигало 30% от общего количества. Назначено лечение с добавлением в корм путем его смачивания 3,5 млн. микробных клеток (спор) "Субтилис-Л" на 1 кг живой массы тела рыбы. Корм с "Субтилис-Л" давали рыбе 1 раз в день в течение 7 дней. Через 14 дней после окончания курса лечения установлено, что количество больных рыб уменьшилось до 10%, а признаки острого воспаления остались лишь у отдельных экземпляров.

Пример 2. Сохранность цыплят.

Проведены производственные испытания "Субтилис-Л" на сохранность цыплят в первые две недели после их посадки. "Субтилис-Л" применялся перорально в жидком виде путем выпаивания с 4%-ным раствором глюкозы и в лиофильно высушенном виде путем добавления в корм. Отход цыплят контрольной группы составил 4,3%. Усредненный отход в опытных группах составил при даче лиофильно высушенного "Субтилис-Л" с кормом - 2,1%, при выпаивании жидкого "Субтилис-Л" - 0,6%. В опытных группах цыплята более интенсивно набирали вес: после первых трех дней для контрольной группы средний вес составил 58 грамм, для опытной - 69 грамм.

Пример 3. Сохранность поросят.

В хозяйстве наблюдался значительный отход поросят в связи с заболеваниями желудочно-кишечного тракта. Проведенные микробиологические и патологоанатомические исследования выявили несколько видов заболеваний ЖКТ поросят бактериальной этиологии. Назначен курс лечения: применение "Субтилис-Л" перорально сразу после рождения из расчета 1 доза на 3-х поросят на 4%-ной глюкозе в течение 5-7 дней. Курс профилактики: применение "Субтилис-Л" внутрь из расчета 1 доза на 10 новорожденных поросят на 10%-ной глюкозе в течение 3-х дней. Сохранность поросят поднялась на 60% и достигла стабилизации на уровне 94%, который поддерживается на этом уровне профилактикой.

Проведенные исследования показали эффективность бактериального препарата "Субтилис-Л" на основе предложенного штамма Bacillus licheni-formis BKM В-2252Д.

Изобретение относится к биотехнологии, ветеринарии и может быть использовано для получения препарата из группы пробиотиков. Штамм бактерий Bacillus licheniformis BKM В-2252Д выделен из почвы. Клетки грамположительны, тип дыхания аэробный. Гидролизует глюкозу, мальтозу, сахарозу, оксидазо- и каталазоположительны. При аэробном выращивании утилизирует ацетат и цитрат. Подавляет рост стафилококков, сальмонелл, протея, кандидомикозов, синегнойной палочки и других патогенных микроорганизмов. Штамм используют как производственный для получения пробиотического препарата "Субтилис-Л". Изобретение обеспечивает быструю нормализацию деятельности желудочно-кишечного тракта животных, птицы и рыб. Перспективен в лечении и профилактике бактериальных инфекций. 1 табл.

Штамм бактерий Bacillus licheniformis ВКМ В-2252 Д, используемый для получения пробиотического препарата, предназначенного для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний животных, птицы и рыбы.