Способ определения биозараженности винограда и виноматериалов Советский патент 1991 года по МПК G01N33/02 

Изобретение относится к пищевой промышленности, в частности к винодельческой и консервной, и касается определения пораженного плесенями сырья.

Цель изобретения - повышение точности определения жизнеспособности плесеней.

Сущность способа заключается в следующем.

Виноград перерабатывают, мезгу прессуют, отделяют суслосамотек и первое давление и в среднюю пробу сусла вводят рутин, инкубируют с последующим определением изменения концентрации рутина. Среднюю пробу сусла берут в количестве 50 см3, вводят 5 мг рутина и делят пополам по 25 см3. Одну часть пробы стерилизуют при 100°С в течение 10 мин, а другую инкубируют при 37°С в течение 30 мин.

В результате инкубирования происходит расщепление рутина до дисахарида рутиназы и агликона под действием специфического фермента плесеней - рутиназы. Пробы фильтруют через мембранный фильтр и определяют концентрацию рутина высокоэффективной жидкостной хроматографией. При снижении концентрации рутина выше 10% сырье признается пораженным плесенями. Отсутствие различий в концентрации рутина в контрольном и исследуемом образцах, по величине не превышающих 10%, служит основанием для признания сырья здоровым.

Способ осуществляют следующим образом.

Пример 1. Виноград сорта Фетя- ска сортируют на здоровый и пораженный плесенями, перерабатывают на дробилке-гребнеотделителе, мезгу прессуют, отделяют сусло-самотек и первое давление и отбирают среднюю пробу по ГОСТ 14137-74. Средние пробы от каждой партии переработанного винограда в трех

W

Ј

Os 00

сл

со

45

повторностях в количестве по 50 см каждой помещают в колбочки, в которые вводили по 5 мг рутина. Образцы делят пополам по 25 см , одну половину стерелизуют кипячением при 100°С в течение 10 мин, а другую половину каждой пробы оставляют без изменений. Стерилизованные образцы - кон- троли помещают вместе с испытуемыми в термостат и инкубируют при 37°С в течение 0,5 ч. Отбирают из каждой пробы 5 см образца, фильтруют через мембранный фильтр 0,45 мкм и определяют концентрацию рутина на жидкостном хроматографе Милихром на колонке 62x2 мм, с сорбентом Силасорб Cia. В хроматограф вводят 15 мкм мембранно отфильтрованного образца и элюируют смесью ацетонитрила и воды в соотношении 20:30 (по объему) при рН 2,8, доведенной ортофосфорной кислотой, со скоростью 30 мкл/мин потока подвижной фазы. Детектирование ведут при 360 нм с идентификацией пика рутина путем сопоставления приведенного времени удержания образца с приведенным временем удержания раствора чистого рутина, анализируемого в тех же условиях. Концентрацию рутина определяют по калибровочному графику. Сопоставляя концентрации рутина в контрольной и исследуемой проОе судят о пораженности сырья плесенями.

В табл. 1 приведены данные, характеризующие концентрацию рутина в контрольных и исследуемых образцах здорового и пораженного винограда сорта Фетяска.

В пробах сусла, полученного из здорового сырья, и в стерилизованном образце концентрация рутина не изменилась, откло- н.ения не превышают ошибку метода анализа. В процессе стерилизации происходит инактивация ферментов плесеней и внесенный в образец путин не подвергается расщеплению, его содержание не меняется. В образце пораженного плесенями винограда концентрация рутина снизилась, он разрушился под дейпвием ферментов, присутствующих в пораженном плесенями винограда.

П р и м е р 2. Виноград сортов Рислинг, Рейнский, Пино, Траминер, Алиготе, Амур перерабатывают на дро- билке-гребнеотделителе, не сортируя на здоровые и пораженные плесенью ягоды, Мезгу прессуют, отделяют сусло-самотек и первое давление и отбирают среднюю пробу по ГОСТ 14137-74. Средние пробы каждого сорта переработанного винограда в количестве 50 см помещают в колбочки, в каждую из которых вводят 5 мг рутина. Образцы делят пополам по 25 см3, одну половину стерилизуют кипячением в течение 10

мин, а другую половину каждой пробы оставляют без изменений. Стерилизованные образцы - контроли помещают вместе с испытуемыми в термостат и инкубируют при

37°С в течение 0,5 ч. Из каждой пробы отбирают по 5 см3 образца, фильтруют через мембранный фильтр 0,45 мкм и определяют концентрацию рутина на хроматографе Милихром на колонке 62x2 мм с сорбен0 том Силасорб С 1в. В хроматограф вводят 15 мкл мембранно отфильтрованного образца и элюируют смесью ацетонитрил - вода в соотношении 20:80 по объему при рН 2,8, доведенной ортофосфорной кислотой, со

5 скоростью потока подвижной фазы, равной 30 мкл/мин. Детектирование ведут при 360 нм с идентификацией пика рутина путем сопоставления приведенного времени удерживания образца с приведенным вре0 менем удерживания раствора чистого рутина, анализируемого в тех же условиях. Концентрацию рутина определяют по калибровочному графику. Уменьшение кон- центации рутина в контрольных и

5 исследуемых пробах через 0,5 ч свыше 10% позволяет признать сырье пораженным плесенями. Если же уменьшение концентрации рутина не превысило 10%, то проводят определение концентрации рутина

0 через каждый час, но не более 4,5ч в сумме. При отсутствии различий в содержании рутина в контрольной и исследуемой пробах по прошествии 4,5ч сырье признавали здоровым.

5

В табл. 2 приведены данные характеризующие концентрацию рутина в исследуемых образцах винограда по отношению к контрольным.

0 В образцах сусла Рислинг, Рейнский и Алиготе после 0,5 ч инкубации происходит заметная убыль рутина(по отношению к контролю), что позволяет утверждать факт пораженности этих партий

5 винограда плесенью. Сортообрацез сусла Пино поражен плесенью, что подтверждено 3,5ч инкубирования.

В образцах сусла Траминер и Амур не обнаружено изменений концентрации

0 рутина (по отношению к контролю) на протяжении всего времени инкубирования, что позволяет установить факт отсутствия поражения сырья плесенью, сырье здоровье. Представленные примеры показывают

5 возможность использования определения рутиназной активности в пораженном плесенью исходном сырье, предназначенном для переработки. Рутиназа является специфическим ферментом плесеней, активность которого обнаруживается по расщеплению

рутина, добавляемого в пробу, а рутин может служить индикатором для определения плесеней в сырье.

Предлагаемый способ (в отличие от известного) обеспечивает: специфичность определения, большую точность определения при различной степени пораженности сырья; возможность контроля за ходом процесса пастеризации, обработки бентонитом и других технологических операций, связанных с удалением ферментов из обрабатываемого материала.

0

Формула изобретения Способ определения биозараженности винограда и виноматериалов по наличию продукта метаболизма грибов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения жизнеспособности плесеней, в пробу исследуемого продукта вводят рутин с последующим делением ее на две части, одну из которых стерилизуют, измеряют концентрацию рутина в этих частях и сравнивают их между собой, а определение наличия продукта метаболизма осуществляют по результату сравнения.

Таблица 1

Изобретение относится к пищевой промышленности, в частности к винодельческой и консервной, и касается определения пораженного плесенями сырья. Цель изобретения - повышение точности определения жизнеспособности плесеней. Это достигается за счет выбора вещества, характеризующего наличие такого поражения. В качестве такого вещества используют рутин

Таблица 2