Способ определения жизнеспособных протосколексов эхинококка в пробе IN VIтRо Советский патент 1991 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к медицине и ветеринарии и может быть-использовано в исследованиях по экспериментальной терапии эхинококкозов.

Цель изобретения - ускорение и повышение воспроизводимости способа.

Способ осуществляется следующим образом.

На предметное стекло помещают две капли взвеси исследуемых протосколексов в физиологическом растворе. Первая капля- контрольная, вторая - тестируемая. С помощью фильтровальной бумаги из второй капли удаляют физиологический раствор и наносят на протосколексы 1 каплю глицерина. Обе капли покрывают покровными стеклами и тотчас подвергают микроскопии при малом увеличении микроскопа. У живых протосколексов под влиянием глицерина наблюдается контрактура тела. При этом протосколексы уменьшаются в размере в 1,5-2 раза по сравнению с контролем, утрачивают округлую форму, приобретают неправильные очертания, паренхимы тела протосколексов просветляются, известковые тельца становятся невидимыми. По внешнему виду протосколексы напоминают кристаллы. Указанные изменения наступают через 1 - 2 с и наблюдаются в течение 30- 40 мин после добавления глицерина. У погибших протосколексов при добавлении

О

со ел ю о

глицерина указанные изменения при сравнении с контролем не наблюдаются.

П р и м е р. У больной Г., 57 лет, с диагнозом эхинококкоз печени, подтвержденный компьютерной томографией и серологическими исследованиями, проведена оценка эффективности интрзоперационно- го обезвреживания зародышевых элементов эхинококка. Во время операции в 8-ом сегменте печени выявлена эхинококковая киста диаметром 8 см. Киста вскрыта, содержимое ее удалено. Остаточная полость обработана 2%-ным раствором формалина по Спасокукоцкому. Перед вскрытием эхинококковой кисты последнюю пунктировали и определяли наличие и жизнеспособность протосколексов эхинококка. В 20 мл пунктата после 5 мин отстаивания удаляли насадочную жидкость и заменяли еефизиологическим раствором, затем после 5 мин отстаивания собирали шприцем осадок, из которого наносили 2 капли на предметное стекло: 1 каплю контрольную, вторую - тестируемую. В тестируемую каплю добавляли глицерин и подвергали микроскопии,

В контрольной и тестируемой каплях при микроскопии выявлены протосколексы эхинококка. В тестируемой капле после добавления глицерина у всех 36 протосколексов отмечена выраженная контрактура тела и другие морфологические изменения, что свидетельствовало о жизнеспособности протосколексов в эхинококковой кисте перед удалением ее содержимого. Эффективность обезвреживания протосколексов раствором формалина в остаточной полости фибброз- ной капсулы определяли путем воздействия на протосколексы, выделенные в смыве физиологическим раствором из остаточной полости после удаления из последней раствора формалина. 100 мл смыва помещали в стеклянный стакан и после 10 мин отстаивания удаляли надосадочную жидкость, Заменяли ее свежим физиологическим раствором. Через 5 мин отстаивания забирали шприцем осадок, из которого 2 капли наносили на предметное стекло: одну каплю

0

5

0

5

0

5

0

5

контрольную, вторую-тестируемую. В тестируемую каплю добавляли глицерин и подвергали обе капли микроскопии.

В контрольной и тестируемой каплях выявлено соответственно 8 и 14 протосколексов эхинококка. В тестируемой капле после добавления глицерина у протосколексов не обнаружены контрактура тела и другие морфологические изменения по сравнению с контролем, что свидетельствовало о их гибели и эффективности интраопе- рационного обезвреживания раствором формалина.

Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает повышение скорости, точности, упрощение и удобство метода определения жизнеспособности протосколексов эхинококка. Повышение скорости достигается быстрым появлением дифференцирующего признака - контрактуры тела паразита, наступающей через 1 - 2 с после добавления глицерина к живым протоско- лексам. Повышение точности достигается тем, что на результаты тестирования не влияют наличие и степень окрашивания инкубационной среды и исходное состояние морфологической структуры протосколексов, а дифференциальный признак жизнеспособности паразита в течение 30 - 40 мин наблюдения. Упрощение метода достигается тем. что он основан на хорошо различимом критерии - контрактуре тела живого паразита с уменьшением его размера в 1,2 - 2 раза по сравнению с исходным, что не требует специальной подготовки оператора.

Формула изобретения

Способ определения жизнеспособных протосколексов эхинококка в пробе in vitro, включающий обработку пробы химическим агентом, микроскопию, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения воспроизводимости способа, пробу обрабатывают глицерином и при наличии контрактуры тела протосколекса определяют его жизнеспособным.

Изобретение относится к медицине и ветеринарии и может быть использовано в исследованиях по экспериментальной терапии эхинококкозов, Цель - ускорение и повышение воспроизводимости способа. Для этого на каплю исследуемого материала наносят каплю глицерина, покрывают покровным стеклом и микроскопируют при малом увеличении. У живых протосколексов под влиянием глицерина наблюдается контрактура тела. При этом протосколексы уменьшаются в размере в 1,5 - 2 раза по сравнению с контролем, утрачивают округлую форму, известковые тельца становятся невидимыми. Указанные изменения наступают через 1 - 2 с и наблюдаются в течение 30 - 40 мин после добавления глицерина. Способ прост, быстро выполним, хорошо воспроизводим. k