Способ моделирования однокамерного эхинококкоза Советский патент 1992 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к медицине, а именно к гельминтологии.

- . - А

Цель изобретения - повышение воспроизводимости способа.

Для исполнения предлагаемого способа в качестве донорского материала используют ларвоцисты Echinococcus multilocularis от хлопковых крыс, на которых постоянно поддерживают лабораторный штамм паразита. Хлопковых крыс-доноров заражают следующим образом. Животным обоего пола в возрасте 1-1,5 мес и массой 40 - 60 г вводят в брюшную полость по 500 - 1000 про- тосколексов и 200 - 300 ацефалоцист, выделенных из ларвоцист альвеолярного эхинококка от предшествующих доноров того хе вида.

Хлопковых крыс-доноров заражают инокулятом, приготовленным следующим образом. Ларвоцисты альвеолярного эхинококка массой 30 - 50 г выделяют от предыдущих доноров того же вида

(1-2 крыс), вскрытых через 2 - 3 нес после заражения, и измельчают ножницами. Полученные фрагменты смешивают со стерильным физиологическим раствором хлорида натрия при соотношении объемов фрагментов ларвоцист и физраствора 1:10. Полученную смесь процеживают через мельничный газ с диаметром ячеек 1,0 мм. Полученный фильтрат повторно процеживают через мельничный газ с диаметром ячеек 0,3 мм. Затем фильтрат взбалтывают и после Л - 3 мин отстаивания удаляют надосадочную жидкость и заменяют ее свежим физраствором до конечного объема 50 мл. Эту операцию повторяют 5 - 7 раз до достижения полной прозрачности надосадочной жидкости, что необходимо для последующего подсчета зародышевых элементов в иноку- ляте. При последней замене надосадоч- ной жидкостью используют физраствор с антибиотиками (0,3 мг/мл гентамици- на и 2000 Ед/мп пенициллина).

(Л

1

4Ь

сл

2

В приготовленном таким образом и пригодном для заражения животных ино- куляте определяют концентрацию про- тосколексов и ацефалоцист альвеолярного эхинококка следующим образом. Инокулят равномерно перемешивают на магнитной мешалке со скоростью 1000 об/мин и забирают из него 1,0 мл в шприц с ограничителем объема и иглой внутренним диаметром 0,3 мм. Затем из шприца сразу яе наносят на предметные стекла 5 - 10 капель ино- кулпта и подсчитывают при малом увеличении микроскопа число протосколек- сов и ацефалоцист в каждой капле. Определив среднее число протосколексов и ацефалоцист в 1 капле и количество капепь в 1 мл инокулята, вычисляют число протосколексов и ацефалоцист в указанной единице объема инокулята.

Приготовленным инокулятом с известной концентрацией зародышевых элементов альвеолярного эхинококка заражают 25 - 30 хлопковых крыс обоего пола в возрасте 1-1,5 нес и массой 40 - 60 г. Каждому животному обрабатывают переднюю брюшную стенку 96 этиловым спиртом, голову и задние конечности- фиксируют руками, животное поворачивают головой вниз и заданный объем инокулята (0,5 - 1,0 мл), содержащий 500 - 1000 протосколексов и 200 - 300 ацефалоцист, вводят с помощью шприца и инъекционной иглы внутренним диаметром 0,3 мм в брюшную полость животного через нижнюю часть брюшной стенки во избежание травмирования петель кишечника.

Хлопковых крыс вскрывают через 2-3 мес после заражения, выделяют из их брюшной полости развившиеся ларвоцисты альвеолярного эхинококка, выделяют из ларвоцист зародышевые элементы, которыми заражают золотистых хомяков-реципиентов. Инокулят из донорских ларвоцист готовят так же, как это описано, за исключением того, что при определении концентрации в инокуляте зародышевых элементов учитывают содержание в инокуляте только ацефалоцист, так как протосколексами золотистые хомяки не заражаются. Золотистых хомяков заражают инокулятом так же, как и хлопковых крыс-доноров. Оптимальная доза инвазионного материала составляет 300 - 1000 ацефалоцист на животное.

Пример 1. Экспериментальную модель однокамерного эхинококкоза

5

0

воспроизводят у золотистого хомяка (самки) в возрасте 1 мес и массой 56 г. В качестве донорского материала используют ларвоцисты Echinococcus

multilocularis от хлопковой крысы, зараженной внутрибрюшинно протоско- лексами и ацефалоцистами альвеолярного эхинококка от экспериментально зараженного предыдущего донора того же вида. Хлопковую крысу-донор заражают внутрибрюшинно инокулятом, приготовленным следующим образом. Ларвоцисты альвеолярного эхинококка массой 32 г выделяют из брюшной полости предыдущего донора, вскрытого на 83-й день после заражения, измельчают ножницами и полученные фрагменты смешивали - со стерильным физиологическим раствором хлорида натрия при соотношении объемов фрагментов ларвоцист и физраствора 1:10. Смесь процеживают через мельничный газ с диаметром ячеек 1,0 мм. Полученный фильтрат пропускают через мельничный газ с диаметром ячеек 0,3 мм. Затем фильтрат взбалтывают и после 2 мин отстаивания удаляют надосадочную жидкость. Эту операцию повторяют 5 раз до полной прозрачности надосадочной жидкости. При

0 последней замене надосадочной жидкости используют физраствор с антибиотиками (0,3 мг/мл гентамицина и 2000 ЕД/мл пенициллина) и объем фильтрата доводят до 50 мл.

j Б приготовленном таким образом инокуляте определяют концентрацию протосколексов и ацефалоцист следующим образом. Инокулят равномерно перемешивают на магнитной мешалке со

0 скоростью 1000 об/мин и забирают из него 1,0 мл в шприц с ограничителем объема и иглой внутренним диаметром 0,3 мм. Затем из шприца сразу же наносят на предметные стекла 5 капель

З инокулята и подсчитывают при малом увеличении микроскопа число протосколексов и ацефалоцист в каждой капле. Определив среднее значение числа про- тосколексоз и ацефалоцист в 1 капле,

Q равное 5,7 и 2,3 экз. соответственно, вычисляют и количество капель в 1 мл инокулята, равное 89, подсчитывают число протосколексов и ацефалоцист в 1 мл инокулята, которое составляет соответственно 507 и 205 экз.

Инокулят в указанном объеме вводя в брюшную полость хлопковой крысе (самке) в возрасте 1 мес и массой 51 г следующим образом. Переднюю

5

рюшную стенку крысы обрабатывают 6 ° этиловым спиртом, голову и задние онечности животного фиксируют рука- и и поворачивают крысу головой вниз с помощью шприца и инъекционной иг- ы внутренним диаметром 0,3 мм забиают 1 мл равномерно перемешиваемого на магнитной мешалке инокулята и ввоят в брюшную полость хлопковой крысе через нижнюю часть брюшной стенки.

Через 76 дн после заражения крысу вскрывают, выделяют из брюшной полости животного развившиеся ларвоцисты альвеолярного эхинококка, масса которых составляет 26 г, и используют их для приготовления инокулята описанным способом.

При количественном определении содержания зародышевых элементов паразита учитывают концентрацию только ацефалоцист. В 50 мл приготовленного инокулята концентрация ацефалоцист составляет 752 экз/мл. Этим инокуля- том заражают подопытного золотистого хомяка так же, как и хлопковую крысу- донора путем внутрибрюшинного введения животному 0,5 мл инокулята, содержавшие 300 ацефалоцист эхинококка. На 63-й день после заражения хомяка вскрывают и выделяют из брюшной полости животного развившиеся ларвоцисты эхинококка. Всего выделено 17 лар- воцист, масса которых варьирует от 0,48 до 5,63 г, а диаметр - от 5 до 12 мм. Все ларвоцисты однокамерного типа. При проколе стенки каждой ларвоцисты препаровальной иглой в одной точке поверхности наблюдают полное спадение всей ларвоцисты с истечением из нее гидатидной жидкости. Общая масса ларвоцист у животного составляет 26,8 г (35,6% от массы тела хоня- ка, равной 75,2 г). В 12 ларвоцистах выявлено множество выводковых капсул с 37 - 175 юными и зрелыми протоско- лексами в каждой. Остальные ларвоцисты стерильны.

S

Пример 2. Экспериментальную модель однокамерного эхинококкоза воспроизводят у золотистого хомяка (самца) в возрасте 1,5 мес и массой 68 г. Источник донорского паразитарного материала, способ заражения донора, а также способ приготовления инокулята из донорских ларвоцист альвеолярного эхинококка такие же, как и в примере 1. Концентрация ацефалоцист в используемом инокуляте 1000 экз/мл. Хомяк получает внутри- брюоинно t,0 мл инокулята способом по примеру 1. К сроку вскрытия животного через 7 мес после заражения брюшно хомяка резко увеличивается. При вскрытии из брюшной полости хомяка выделено 39 ларвоцист однокамерного типа, диаметр которых колебается от 8 до 32 мм, а масса варьирует в пределах 0,73 - 8,54 г. Общая масса выявленных у хомяка ларвоцист 41,3 г (48,7% от массы тела животного, рав5 ной 84,8 г). Во всех ларвоцистах обнаружены выводковые капсулы, содержавшие по 64 - 362 зрелых протоско- лексов.

Пременение способа позволяет повы сить воспроизводимость модели однокамерного эхинококкоза до 100%.

Формула изобретения

Способ моделирования однокамерного 5 эхинококкоза, включающий внутрибрю- шинно введение экспериментальному животному зародышевых элементов личиночной стадии эхинококка, отличающийся тем, что, с целью 0 повышения воспроизводимости способа, предварительно изолят Echinococcus multilocularis пассируют на хлопковой крысе, затем осуществляют забор ацефалоцист и вводят инокулят, содержа- S щий 300 - 1000 ацефалоцист, золотистому хомяку.

Изобретение относится к медици- не, а именно к гельминтологии. Цель - повышение воспроизводимости способа. Для этого изолят Echinococcus multi- locularis пассируют на хлопковой крысе. Затем забирают ацефалоцисты и вводят инокулят, содержащий 300 - 1000 ацефалоцист, золотистому хомяку. Применение способа позволяет повысить воспроизводимость модели однокамерного эхинококкоза до 100%.