Штамм вируса ядерного полиэдроза для производства инсектицидного препарата Советский патент 1991 года по МПК C12N7/00 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к производству биологических инсектицидов для лесного и сельского хозяйства.

Целью изобретения является получение нового штамма вируса ядерного полиэдроза, обладающего большой вирулентностью по отношению к непарному шелкопряду.

Штамм Pd-1-5 получен путем отбора из природного изолята вируса, выделенного обычными методами из больной гусеницы непарного шелкопряда. Депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов института ВНИИгенетика, где получен коллекционный номер ВКМП virus-1.

Штамм имеет следующие морфологические и физиологические характеристики.

Морфологические признаки. Относится к группе бакуловирусов, в частности к вирусам ядерного полиэдроза, к виду Porthetria dispar.

Палочковидные вирусные частицы - ба- куловирусы включены в полиморфные белковые тела - полиэдры. В среднем в каждом полиэдре включено по 1215 ± 15 вирусных частиц, размерами 40-70 нм х 250-350 нм. Вирусные частицы имеют оболочку развития, в которой могут содержаться как одио

СА) 00

сЈ

ночные нуклеокапсиды, так и пучки, состоящие из 3-5 и более нуклеокапсидов. Классы вирусных частиц характеризуются следующими отношениями нуклеокапсидов: q 1 69 ± 0,9; q2 18 ± 1,1; дз 64 ± 1,8; ц 31 ± 0,8; qs 25 ± 1,1 (q - количество вирусных частиц, содержащее определенное количество нуклеокапсидов).

Физиологические признаки. Штамм Pd-1-5 культивируется в гусеницах непарного шелкопряда, зараженных путем скарм- ливания искусственного корма, инфицированного вирусом.

Состав искусственной питательной среды (ИПС) для выращивания гусениц непарного шелкопряда; агар 10 г; пшеничные отруби 25 г; солодовые ростки 45 г; фасоль 20 г; кормовые дрожжи 15 г; аскорбиновая кислота 3 г; фолиевая кислота 5 мг; метабен 2 г; этиловый спирт 12 мл; вода 400 см3.

При заражении гусениц 4 возраста 1 г ИПС опрыскивают (смешивают) 0,2 мл водной суспензии полиэдров с титром 107.

Инкубационный период заболевания 4- 6 дней. Вирус репродуцируется практически во всех тканях гусениц. Оптимальная температура для репродукции вируса 24 ± 2°С. Рекомендуется хранить штамм при температуре от -12 до -70°С.

В качестве прототип взят штамм вируса ядерного полиэдроза непарного шелкопряда S-13-p, который используется при производстве вирусного инсектицида Вирин-ЭНШ и получен путем адаптации вируса ядерного полиэдроза ивовой волянки к непарному шелкопряду.

Характеристики штамма Pd-1-5 и известного штамма приведены в таблице.

Как видно из таблицы, предлагаемый штамм Pd-1-5 в 10 раз активнее, а количество контаминантной микрофлоры в 100 раз ниже по сравнению с этими же показателями известного штамма S-13-p.

Пример. Получение вирусного инсектицида.

Партию гусениц непарного шелкопряда по достижении ими четвертой возрастной стадии инфицируют вирусом ядерного полиэдроза, штамм Pd-1-5. Корм опрыскивают вирусной суспензией штамма Pd-1-5 с титром 107 полиэдров в 1 мл. Через 12 дней проводят сбор инфицированных гусениц.

Партию вирусосодержащих гусениц измельчают в гомогенизаторе при 1500 об/мин и добавляют равное по весу количество аэросила. В процессе смешивания получают светло-серую порошкообразную смесь вирусный инсектицид. Полученный инсектицид (Вирин-НШ) представляет собой воздушно-сухой, сыпучий, легко и равномерно ресуспендируемый в воде, стойкий при хранении в течение 5 лет порошок, содержащий вирусные включения, тканевые фрагменты гусениц и аэросил, который одновременно является наполнителем и при- липателем. 1 г инсектицида содержит 1 х 1010 вирусных включений,

Выход вируса из одной зараженной и погибшей от данного штамма гусеницы составляет 1-2 млрд. полиэдров. Препарат, наработанный на штамме Pd-1-5, является экологически чистым, обладает избирательным действием только к целевому насекомому - непарному шелкопряду. Вирин-НШ безопасен для теплокровных животных и человека. Для получения сравнительных данных параллельно из другой партии инфицированных гусениц аналогичным образом получают вирусный инсектицид на основе известного штамма S-13-p. Биологическая активность, выраженная в ЛКзо, составляла соответственно 0,004 и 0,02 мг/г

корма для гусениц Portheria dispar второго возраста.

Таким образом, штамм Pd-1-5 позволяет получить инсектицид, который патогенен для гусениц Porthetrla dispar, причем по

своей активности в пять раз превышает инсектицид, полученный на основе известного штамма S-13-p.

Формула изобретения

Штамм вируса ядерного полиэдроза Porthetria dispar ВКПМ virus-1 для производства инсектицидного препарата.

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к производству биологических инсектицидов для лесного и сельского хозяйства. Целью изобретения является получение нового штамма вируса ядерного полиэдроза, обладающего большей вирулентностью по отношению к непарному шелкопряду. Штамм вируса ядерного полиэдроза Pd -1-5 получен путем отбора из природного изолятора вируса, выделенного обычными методами из больной гусеницы непарного шелкопряда и депонирован во Всесоюзной коллекции промышленных микроорганизмов Института ВНИИгенетика, где ему был присвоен коллекционный номер ВКПМ virus-1. Суспензия вируса штамма Pd-1-5 в воде имеет ЛКводля гусеницы Porthetria dispar, равную 3 х 104 полиэдров на 1 мл или 0,2 х 105 полиэдров на гусеницу, в то время как штамм-прототип имеет ЛКво 4x10 и 4 х 10 соответственно. Биологическая активность препарата, основанного на штамме Pd -1-5, для гусениц Porthetria dispar второго возраста составила 0,004 мг/г корма, а у аналогичного препарата, полученного на основе штамма-прототипа, 0,02 мг/г корма. 1 табл. сл с