Способ деполимеризации гепарина, сульфомукополисахарида или деоксирибонуклеината натрия Советский патент 1991 года по МПК C08B37/10 

I

(21)4203197/04

(22)03.08.87

(31)304799

(32)05.08.86

(33)AR

(46) 30.03.91. Бил. № 12

(71)АХОРКА С.A. (AR)

(72)Виктор Батиста Диас, Рикардо Хьюго Доманико (AR) и Фернандо Фусси (ГГ)

(53)547.995.17.07(088.8)

(56)Заявка ЕР I 021067 Al, кл. С 08 В 37/10, 1984.

(54)СПОСОБ ДЕПОЛИМЕРИЗАЦИИ ГЕПАРИНА, СУЛЬФОМУКОПОЛИСАХАРИДА ИЛИ ЛЕОКСИРИ- БОНУКЛЕИНАТА НАТРИЯ

(57)Изобретение относится к химии

полисахаридов, в частности к деполи- мериэации гепарина, сульфомукополи- сахарида или деоксирибонуклеината натрия, которые обладают противотромбоз- ным эффектом. Цель изобретения - упрощение процесса, возможность управления степенью деструкции при сохранении целевым продуктом строения исходного. Деполимеризацию ведут обработкой перекисью водорода в присутствии каталитических количеств сульфата Fe(2+) при рН 4-6,3, температуре 50- 80°С и в водной среде. Процесс ведут при соотношении исходный продукт (мае.): 30%-ная перекись водорода (объемн.), равном 5:1, с прекращением процесса в нужное время обработкой этанолом при рН 7. 4 табл.

SS

(Л

Изобретение относится к химии полисахаридов, конкретно к способу деполимеризации гепарина, сульфомукополи- сахарида или деоксирибонуклеината натрия, которые обладают противотромбоз- ным эффектом.

Целью изобретения является упрощение процесса и обеспечение возможности управления степенью деструкции при сохранении целевым продуктом строения исходного.

Согласно предлагаемому способу в качестве деполимеризующего агента используют перекись водорода в присутствии каталитических количеств сульфата железа (II) и процесс проводят при рН 4-6,3, температуре 50-80 С при соотношении исходный продукт (мае.): 30%-ная перекись водорода (объемн.), равном 5:1, с прекращением процесса в нужное время обработкой этанолом при рН 7.

Пример 1. 20 г (1,666 ммоль) гепарина натрия (Американской фарма- копеи) растворяют в 100 мл воды (МВ 12000), 4 г катионной смолы (AmberR-f

lite IR - 120, H форма) добавляют

к раствору при перемешивании. Как только рН раствора уменьшается до 4,0-4,5, смолу отфильтровывают и фильтрат собирают в колбу с круглым днищем. В процессе нагрева с обратным холодильником его подогревают при 80°С в водяной бане и затем к раствору добавляют при перемешивании 4,2 мл реагента, полученного путем смешения 4,0 мл 30%-ного Нг02 и 0,2 мл раствоо

GO

со

Јъ СО N5

О4

pa Fe(ll) (раствор ,5 г FeS04 7H20 в 100 мл воды).

Раствор поддерживают при 80°С и фиксируют значения рН. В заранее

определенные моменты времени из колбы отбирают по 20 мл пробы. В каждую пробу быстро вводят с одновременным перемешиванием несколько капель 0,1 М NaOH для того, чтобы повысить рН до J 7,0, 5 мл 0,5 М раствора NaCl, 25 мл этанола капельным методом, 3,3 мл 20%-ного раствора NaCl. Осадок собирают, промывают в этаноле, а затем в ацетоне. С вечера до утра его шивают в вакуумной печи при 50-60°С и пробы подвергают контролю с помощью вискозиметрии на определение молекулярного веса Offi) и концентрации (крепости).2

Результаты представлены в табл.К.

Пример 2, 20 г гепарина натрия растворяют в 100 мл воды при естественном ,6. Раствор нагревают до 50°С с обратным холодильником в 2 водяной бане, затем к нему добавляют 4,6 мл реагента, полученного путем смешения 4,0 мл 30%-ного Н202 и 0,6 мл раствора А (см. пример 1). Реакционную смесь выдерживают при 3 50° С и фиксируют его значение рН. В заданные периоды времени из колб отбирают по 20 мл пробы. Пробы затем подвергают обработке, аналогичной примеру 1.

Результаты сведены в табл. 2.

ПримерЗ. 20 г существующей в природе смеси сульфомукополисаха- рида следующего состава, %:

Кондроитинсульфат (КС)20

Дерматансульфат (ДС)50

Гепарансульфат (ГС)30

(,0 при 80°С, 30 ррм Fe -II), ,имеющей следующие характеристики:

Удельное оптическое

вращение, град-20

Гексуроновые кислоты

после гидролиза

(met Dische (карбазол), %30

Гексоамин после гидролиза (met Elson - Morgan) ацетилацетон+ +п-диметиламинобензальдегид), %30

Органические сульфаты

(в пересчете на S), %7

Определение:

5 0

5 0 5

0

5

0

5

Компоненты (электрофорез на аце- тилцеллншозе, 0,04 М ацетат бария, РН 5,0), % , , . .

Хондроитинсульфат 20 Дерматансульфат50

Гепарансульфат30

подвергают обработке, описанной в примере 1. Пробы отбирают и фиксируют их значения рН, оценивают истинную вязкость и электрофорез.

Результаты приведены в табл. 3.

Пример4. 20 г деоксирибонук- леината натрия млекопитающего растворяют в 100 мл воды при естественном ,3. Растворяют, нагревают с обратным холодильником, после этого осуществляют процедуру, описанную в примере 1. В заданные периоды времени из колбы отбирают пробы. По каждой пробе фиксируют рН, остаточный Н202 и точку опалесценции (добавляя по капле этанол в количестве, необходимом для постоянной опалесценции раствора). Затем к осадку деполимери- зованных нуклеинатов добавляют два объема этанола.

Результаты представлены в табл.4.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет получать молекулы точно такого же строения, что и исходные, и отличающиеся только MB, благодаря че- ,му появляется возможность изучения изменений их биологических и фармакологических свойств в зависимости только от MB; позволяет получать целевой продукт с довольно низким содержанием токсичных тяжелых металлов, таких как медь, при использовании его отпадает необходимость обработки токсичными хелатными реагентами для удаления загрязнений. Так как реакцию можно 0 легко прекратить в любой заданный момент времени, с помощью предлагаемого способа можно получать однородный хорошо идентифицируемый продукт.

Согласно предлагаемому способу можно получать олигомеры, отличающиеся , от исходной молекулы только MB, которые не обладают характерными для исходных продуктов побочными токсичными эффектами. Кроме того, основные побочные эффекты, вызываемые исходными молекулами, такие как кровотечение, анафилактические реакции, торможение агрегации кровяных пластинок, могут быть исключены путем уменьшения MB с. помощью предлагаемого способа без

изменения при этом терапевтических и фармакологических свойств.

Формула изобретения

о

Способ деполимеризации гепарина, сульфомукополисахарида или деоксири- бонуклеината натрия обработкой депо- лимеризуня им агентом, содержащим

перекись водорода и соль двухвалентного металла, при повышенной температуре в водной среде, о т л и ч a roil и и с я тем, что, с целью упрощения процесса и обеспечения возможности управления степенью деструкции при сохранении целевым продуктом строения исходного,, в качестве деполи- меризующего агента используют перекись водорода в присутствии каталитических количеств сульфата железа (II) и процесс проводят при рН 4-6,3, температуре 50-80°С при соотношении исходный продукт (мае.): 30%-ная перекись водорода (объемн.), равном 5:1, , с прекращением пррцесса в нужное время обработкой этанолом при рН 7.

Таблица 1

Время, 4i

РН

Т

5,9 6,5 6,5 6,5 6,5

ТаблицаА

Остаточный H20Z, %

Точка опалесцен- ции, об/об

0,500 0,550 0,630 0,680 0,680