Способ диагностики тимомегалии у детей Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к практической медицине, в частности к клинической иммунологии и педиатрии, мо- жЈт найти применение в практическом здравоохранении при обследовании де- ,тей с подозрением на наличие гиперплазии вилочковой железы и дальнейшем их лечении с применением иммуно- модуляторов.

Цель изобретения - упрощение, сокращение времени и вероятности осложнений.

Способ осуществляется следующим образом.

Дгхя осуществления способа необходимо произвести подсчет общего количества лейкоцитов, лимфоцитов и определить число Т- и В-лимфоцитов в крови.

Определение числа Т- и лимфоцитов.

1.Забор крови. Кровь получают из безымянного пальца После обработки этанолом палец прокалывают скарификатором и кровь в объеме 0,2 мл самотеком набирают в туберкулиновый шприц (смоченный предварительно раствором гепарина концентрации 200 ед/мл и высушенный при 37°С в термостате). Кровь помещают в стеклянную центрифужную пробирку объемом I0 мл и тщательно встряхивают.

2.Выделение материала для исследований. Количество лейкоцитов и

О 4

ND

СО СО СП

лимфоцитов определяют по стандарт )ым методикам, для чего отбирают 0,02 мл крови. Оставшуюся кровь центрифугируют при 200 g в течение 1 мин Отслоившуюся плазму выливают, а осадок используют для выделения лейкоцитарной взвеси

3«. Пригото;лление лейкоцитарной взвеси. Лейкоцитарную взвесь полу чают путем лизиса эритроцитов гемолитической жидкостью следующего состава; к 0,083% «ному раствору хлористого аммония добавляют 0,04 г/л ЭДТА. Доводят рН раствора до 7,2«вй 7,4 7, раствором бикарбоната натриЯа К оставшимся после центри- фугирования клеткам крови добавляют 5 мл гемолитической жидкости на 30 с при постоянном помешивании Яатем добавляют мл среды 199 для прекращения действия гемолитической .кдкости на клетки, центрифугируют iO мин при 200 g, сливают надосадоч- :гую жидкость, осадок осторожно встряхивают Добавляют 1 - 2 мл гемолити- ческой жидкости на 3-5 с, затем добавляют 10 мл среды 199, центрифуги- руют 0 мин при 200 g. Надосадочную жидкость сливают,. Остатки жидкости удаляют фильтровальной бумагой, К полученному осадку клеток добавляют 0,2 мл среды 199«

4Й Определение числа Т- и фоцитовз, Определение числа Т и В лимфоцитов проводят методом розет- кообразозаиия Реакции ставят в 96 луночных планшетах для иммунологических реакций одноразового пользования,,

В лунку планшета наливают 0,05 мл полученной суспензии лейкоцитовs добавляют 0905 мл суспензии эритроцитов барана для определения Т-лимфоцитов или 0,05 мл 0,5%-нсй суспензии эритроцитов мыши для опре- деления В-лимфоцитОва Крышку на план шете закрепляют и центрифугируют при 200 g в течение 5 мин Планшет инкубируют 30 мин при °С, затем в лунки осторожно добавляют каплю 3%-ного раствора глутарового альдегида, выдерживают при комнатной температуре 5 мин. После этого надосадочную жидкость удаляют, а в лунки наливают по 0,1 мл дистиллированной водыв Осадок тщательно ре суспендируют и готовят мазки в

5 Определение абсолютного содер- жания розеткообррзующих клеток в 1 мкл крови

ттыс/мкд -р°Л%

РОЛ

тыс/мм

100%

5

где О- тыс/мкЛ абсолютное количество розеткообразующих

10лимфоцитов в 1 мкл

крови;

5

ТЫС/МКА

РОЛ%

-абсолютное содержа- ние лимфоцитов в

1 мкл крови;

-количество розетка- образующих лимфоци тов, %а

Всего обследовано 369 детей в возрасте от четырех мес до четырех 0 лет Из них у 52 человек выявлены нормальные показатели Т и В-лимфоцитов, абсолютные значения лимфоцитов были значительно выше нормы„

Содержание лимфоцитов в крови де 5 теи с тимомегалией приведены в таблиц е

Высокие абсолютные показатели Т- и В-лимфоцитов, увеличение абсолютного значения лимфоцитов характери- 0 зуют их функциональную незрелость, обусловленную тимомегалиейй Так, абсолютное число лимфоцитов у детей с тимомегалией увеличено до 6,5- 8,, абсолютное число Т-лимфо - цитов до 2,5-4,0 10 /л, а В-лимфоцим тов 1,2-2, Кроме того, возможно наличие дисбаланса между относительным и абсолютным числом лимфоцитов, который заключается в 0 жении относительного числа Т лимфо цитов до 15-30% при нормальных значе ниях их абсолютного и повышенном абсолютном числе лимфоцитов до 6,5 8, и В-лимфоцитОв до 1,2- 2,6 09Аги

Пример 1, Больной ГЦ, 2 го да6 Ребенок поступил в грудное отделение детской областной больницы с диагнозом: пневмония, затяжное тече-

5

0

нией Рентгенологически у ребенка

выявлено: срединная ткань в верхней и средней трети грудной клетки рас ширена в обе стороны за счет тени вилочковой железы КТТ-индекс 0}58

При иммунологическом обследовании выявлено: лимфоциты 8, /л, Т-РОЛ 52%, абс. 4,22Ч09/л, В-РОЛ 38%, абс. 2,81 109/л Увеличение абсолютных показателей лимфоцитов, а

г лкже Т и В-мшмфоцитов свидетель- ствует об их функциональной незре- лости и обусловлено тимомегалией, что нашло подтверждение при рентге™ невском обследовании

Пример 2„ Больной К,

1год 3 мес«, История болезни № 335 Поступил в кожное отделение детской больницы № 3 с дигнозом: детская экземав

При иммунологическом обследова- нии больного выявлено: Лимфоциты 7,94 109/л; Т-РОЛ 52%, абс. 4,13 x / 109/л, В-РОЛ 20%, абс. ,59 109/л Выявленное увеличение абсолютных показателей лимфоцитов, и В-РОЛ свидетельствует о функциональной незрелости лимфоцитов, характерной для тимомегалии, что было подтверждено при рентгенологическом исследовании (КТТ-индекс 0,45),

Пример Зь Больной Щ, ,

2года, Поступил в кожное отделение детской больницы № 3 с диагнозом: детская экзема,,

При иммунологическом обследРва™ нии установлено: лимфоциты 8,6-10 / Т-РОЛ 8%, абсп 1,55-109/л, В-РОЛ 15%, абс. 1,29-109/л Явный дисба ланс между относительными и абсолютными показателями Т и В-лимфо- цитов обусловлен функциональной не зрелостью лимфоцитов, выявляемой при тимомегалииа Однако при рентгеноло гнческом обследовании больного в прямой проекции тень тимуса не опре пелялась и КГТ индекс не превышал 0}38« При рентгенологическом обсле довании в боковой проекции вьивлено увеличение вилочковой железы

Анализируя изложенные данные, мо но заключить, что изменения показа

423956

телой иммунлот-о статуса в виде су щественного увеличения показателей Т и В лимфоцитов, а также дисбаланс между Относительными и абсолютными показателями при увеличенном абсолютном числе лимфоцитов может слу жить основанием для постановки диагноза тимомегалия.

10

Использование предлагаемого спо- соба диагностики тимомегалии у детей имеет следующие преимущества: нет необходимости проводить рентгеноло-

15 гическое обследование детей; сокращение времени и сложности исследования (время исследования сокращается до 4 ч, не нужна R-установка, пленка); при массовых иммунологических обсле-

20 дрваниях детей дает возможность выявить детей с тимомегалией и проводить своевременное профилактическое лечение; отсутствует побочный,, эффект.

25

Формула изобретения

Способ диагностики тимомегалии

у детей путем клинического исследо-

ЗС вания, отлич ающий ся тем, что, с целью упрощения, сокращения времени и снижения осложнений проводят исследование крови с определением числа лимфоцитов Т- и В-лимфоцитов и

3f при значении числа лимфоцитов

(6, 5-8,5) 10 кл/л, абсолютного количества Т-лимфоцитов (2,5-4,0)-I О9кл/л при нормальных значениях относительного числа или относительном числе

4С Т-лимфоцитов 15-30% при нормальном абсолютном количестве, числа Влгшмфо цитов (1 ,2-2,6) -10 кл/л диагностируют наличие тимомегалии у детей.

Изобретение относится к прак- тической медицине, в частности к кли- ническои иммунологии и педиатрии, может найти применение в практическом зравоохранении при обследовании детей с подозрением на наличие гиперплазии вилочковой железы и дальнейшем их лечении с применением иммуномодулято- ров. Цель изобретения - упрощение способа, сокращение времени и снижение осложнений Для этого проводят иммунологическое обследование детей и при повышении абсолютного числа лимфоцитов до 6,5-8,5 , абсолютного числа Т-лимфоцитов до 2,5 4,0«1 О9/л и В-лимфоцитов до 1,2- 2,6 10 /л или дисбалансе относительного и абсолютного содержания Т- и В-лимфоцитов, заключающемся в снижении относительного числа Т-лимфоцитов до 15-30% при нормальных значениях их абсолютного числа и повышенном абсолютном числе лимфоцитов до 6,5 8,5«109/л и В-лимфоцитов до 1,2- 2, диагностируют наличие тимо- мегалии у детей. S to