Способ диагностики гетерозиготных форм @ - и @ -талассемии Советский патент 1991 года по МПК G01N1/28 A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии„

Целью изобретения является повышение точности способа

Способ осуществляют следующим образом.

У лиц с подозрением на гетерозиготную # - или ft -талассемию берут кровь из пальцев, готовят тонкие мазки и определяют морфологические характеристики эритроцитов: их форму, размеры и насыщенность гемоглобином,,

Особое внимание обращают на наличие патологических форм эритроцитов, таких как мишеневидные, шлемовидные, узкоэллипсоидные с зазубренными краями, эритроциты с базофильной пунк- тацией, макропланоциты. Одновременно определяют содержание эритроцитов с HbF в мазках крови по методу Klei- hauer Bfaun, Betke (1957 г.), уро-

вень HbAg методом электрофореза на ацетит-целлюлозных пленках, уровень НЬ методом щелочной денатурации (Singer, 1951 г.), Параллельно про- вводят инкубацию крови с бриллиантовым крезиловым синим красителем для выявления ВВ нестабильного гемоглобина Н.

Дополнительно из вены берут кровь в объеме 15 мл, выделяют мембраны эритроцитов, определяют (Na4 + к) - АТФ-азную активность (белок), фосфор, а также фракционный состав нейтральных липидов при помощи тонкослойной хроматографии (по методу Шталью).

При выявлении пониженной по сравнению с нормой (Na + К+) - АТФ-азной активности и визуально определяемого увеличения липидной фракции в зоне триглицеридов в сочетании с наличием

со

00 СП

специфических морфологических изменений эритроцитов (мишеневидные9 овальные, узкоэллипсоидные, базофиль- нопунктированные на фоне пойкилоци- тоза) с повышенным уровнем НЬА и HbF, наличием эритроцитов, содержащих HbF, подтверждают диагноз гетерозиготной J5-талассемии, в сочетании же с наличием специфических морфологических нарушений эритроцитов (ми- шеневидные планоциты, пшемовидные, овальные, базофильнопунктированные на фоне макроцитоза) и наличием ВВ на фоне нормального или пониженного уровня HbA,j, и HbF и отсутствием эритроцитов с HbF - подтверждают диагноз оС-талассемии о В сочетании с отсутствием характерных морфологических нарушений эритроцитов и ВВ при нормальном содержании НЬА2 и HbF и отсутствием эритроцитов с HbF ставят диагноз (X,-талассемии - латентной формы заболевания, а при сочетании с-наличием характерных морфологических нарушений эритроцитов, эритроцитов, содержащих HbF и нормального содержания НЬА и HbF - ставят диагноз латентной гетерозиготной ft-талассемиио

Пример 1с Больной 20 лет. Дмагноз: гетерозиготная А-талассе- мия. Жалобы на общую слабость, утомляемость, иногда боли в лебом подреберье о

Анализ крови: НЬ - 126,0 г/л, эр. 4,8 , цветовой показатель 0,79, РОЭ 3 мм., лейкоциты 5,0 х х 10 /л, тромбоциты 50%, ретикуло- циты 30%, базофильная сетчатость в толстой капле (++), отмечается выраженный анизоцитоз за счет микро- цитов и макроцитов; умеренный пойки- лоцитоз, небольшая полихромазия, часть эритроцитов гипохромна. Встречаются овалоциты - 10-16 п/зр, мише- невидные эритроциты - 0-8 п/зр, шле- мовидные 2-3 п/зр, слезовидные - 0-3 п/зр, базофильнопунктированные - единичные в препарате. Лейкоцитарная формула, %: миелоциты 0-5; сегм 5,5; пале 3,5; моноциты 9,5; эозино- филы 4,5; лимфоциты 31,5.

При цитологическом изучении мазка периферической крови эритроцитп, содержащие HbF 10%, При инкубации крови с бриллиантовым крезиловыу синим красителем влутриэритроцитар

0

5

0

5

0

5

0

5

ные включения нестабильного гемоглобина не обнаружены.

При изучении фракции гемоглобина методом электрофореза на бумаге НЬА составляет 3,6%. При исследовании медотом щелочной денудации уровень HbF составляет 2,2%.

Сывороточное железо 30,3 мкмоль/л, общая железосвязывающая способность - 70,9 мкмоль/л,. свободный трансфер- ,рин 40,6 мкмоль/л, коэффициент насыщения трансферрина железом 43%.

На основании проведенных исследований пробанду был поставлен диагноз гетерозиготной ft-талассемии. При специальном исследовании мембраны эритроцитов оказалось, что (Na + К )- АТФ-азная активность мембран эритроцитов понижена и составляет 0,60 мМ/мг б.ч., а при фракционировании нейтральных липидов мембраны эритроцитов методом тонкослойной хроматографии липидная фракция в зоне триглицири- дон увеличена (2+).

Пример 2. Вольной 37 лет, жалобы на общую слабость, легкие боли в коленях, небольшое увеличение селезенки при тяжелых простудных заболеваниях

Объективно: склеры желтушны, печень и селезенка не прощупываются0

Анализ крови: НЬ г/л, эритроциты 5,2 10 /л, цветной показатель 0,69, РОЭ 6 мм, лейкоциты 7,0 х х 10 /л, тромбоциты 51%, ретикуло- циты 19%, базофильная сетчатость в толстой karnie (+)„ Отмечается склонность эритроцитов к макроцитозу, встречаются овалоциты 8-12 п/зр., шлемовидные эритроциты - единичные в п/зр. Лейкоцитарная формула, %: миелоциты 0,5; сегмо 66,5; моноциты 4,5; эозинофилы 4; базофилы 0,5; лимфоциты 24,0,

При цитологическом изучении -мазка периферической крови эритроциты, содержащие HbF не обнаружены. При инкубации крови с бриллиантовым крезиловым синим красителем внутри- эритроцитарные включения нестабильного гемоглобина - 5%.

При исследовании гемолизата методом электрофореза на бумаге НЬА составляет 1,5%, при исследовании методом щелочной денатурации уровень HbF составляет 0,5%„

Термостабильность гемоглобина 75, 0%.

Уровень сывороточного железа - 18 мкмоль/л, общая железосвязываю- щая способность 64,8 мкмоль/л, сво- .водный трансферрин 46,8 мкмоль/л, коэффициент насыщения 27%.

У больного поставлен диагноз об-талассемии.

Дри проведении диагностики гетерозиготных формой- и ft-талассемии оказалось, что у больных, подозревакг- щихся на носитель гена (X,- или А-та- лассемии, в 90% были выявлены признаки или ft-талассемии.

1649359

Формула

и

обретения

выявления эритроцитов НЬА2 и HbF

Способ диагностики гетерозиготных формой- и Л-талассемии путем в крови измененных форм и определения уровня гемоглобина, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа в случаях латентных и стертых форм заболевания, в крови дополнительно определяют содержание Na+- и К -зависимой АТФ-аэы и фракционный состав нейт

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии. Цель изобретения - повышение точности диагностики наследственных формвЈ- и А-талассемиИо Наряду с определением в крови изменений форм эритроцитов уровня HbAj, и НЪР гемоглобина дополнительно определяют содержание и К -зависимрк АТФ-азы и фракционный состав нейтральных липидов мембран эритроцитов. При значении содержания АТФ-азы 0,6 мм/мг и ниже и увеличении фракции триглицеридов до 2+ - 3 , а также при наличии менений в содержании НЬА и HbF и форме эритроцитов диагностируют заболевание. (Л

Точность диагностики гетерозигот- J5 Рольных липидов мембран эритроцитов,

и при значении содержания 0,6 мМ/мг и ниже и увеличении фракции триглицеридов до 2 - 3 диагностируют заболевание.

ной талассемии значительно выше. Предложенный способ имеет большое практическое, а также теоретическое значение для понимания механизмов проявления генетических заболеваний.

20

Составитель Л.Стебаева Редактор Т.Лазоренко Техред С.Мигунова

Заказ 1516

Тираж 405

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент, г.Ужгород, ул. Гагарина,101

20

Корректор А.рбручар

Подписное