Способ диагностики латентной формы хронического вирусного гепатита В у носителей НВ @ -антигена Советский патент 1989 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, а именно к гепатологии и инфекционных болезням.

Способ осуществляют следующим образом.

У пациента, поступающего в стационар для уточнения диагноза в связи с обнаружением в крови HBj-антигена, берут 4 МП крови в пробирку (центрифужную) , содержащую 0,04 мл раствора гепарина (1 мл гепарина - 5000 БД разводят в 9 мл физиологического раствора) .

Для отмывания эритроцитов в пробирку добавляют 4 мп 0,9%-ного раствора хлорида , осторожно перемешивают и центрифугируют 15 мин-при I500 об/мин. Удаляют надосадочную жидкость и 2-3 мм верхнего слоя осадка эритроцитов. После этого эритроциты еще дважды отмывают центрифугированием в О,9%-ном растворе хлористого на- ;трия. Уплотнение отмытого осадка про- .изводят центрифугированием 30 мин при

3000 об/мин. Из осадка готовят 20% ге- молизат, для чего 0,1 мп плотного осадка эритроцитов растворяют в 2 мп дистиллированной воды. В этом гемоли- зате и определяю т в ходе дальнейших реакций активность оС-ГФДГ, а также концентрацию гемоглобина. (Последит показатель необходим для расчета по формуле активности о -глицерофосфатде- гидрогеназы).

Перед определением активности фермента готовят субстратную смесь сле- ,дующего состава: 3,25 мг глицерофосфата натрия, 0,75 мг сернокислой магнезии, 4 мг АТФ растворяют в 9 .мл 1/15М раствора фосфатного буфера рН 7,4. К 0,2 МП гемолизата добавляют 2,25 мл субстратной смеси и 1 мл 0,1% раствора нитросинего тетразолия. Смесь инкубируют в термостате при 37°С 60 мин. По.сле ЭТОГО пробирки помещают в холодильник и завершает определение фермента на следующий день.

О С 4 О

После этого, т.е. в первый же день исследования, определяют концентрацию гемоглобина (Нв) в эритроцитах (в 20% гемолизате) по методу, описанному И С. Лугановой и М, Н. Блиновым.

На второй день исследования, вынутые из холодильника, пробирки с раствором центрифугируют 15 мин. при 1500 об/мин, удаляют надосадочную жид кость, а к осадку добавляют 5 ип аце- тона дпя экстрагирования образовавшегося формазана, периодически помешивая раствор тонкой с еклянной палочкой. Через 60 мин. раствор центрифуг гируют.1,5 мин. при 1500 об/мин. Над осадочную жидкость переносят в 10мм кювету спектрофотометра СФ 26. Величину оптической пло.тности надосадоч- ной жидкости, содержащей, формазан, из меряют при длине волны 570 нм против аналогичной кюветы с раствором ацетона. По калибровочной кривой переводят полученную величину оптической плотности в количество формазана в микрограммах .

Расчет активности «/-глицерофосфат- дегидрогеназы в эритроцитах производя по формуле:

мкМоль г НЬ

где т - количество формазана в микро- граммах;35 НЬ - количество гемоглобина в эритроцитах в граммах.

При значении активности 6963,3 мкМоль/г .{

jHb диагностируют латентную форму хрони- .

ческого вирусного гепатита В.

Значание определения активности с -глицерофосфатдегидрогеназы в эритроцитах дпя оценки возможного латентного поражения печени у носителей HBj-антигена приведено в таблице.45

Из таблищз следует, что верхний предел активности V-глицерофосфатде- гидрогеназы у здоровых лиц составляет 6963,2 МКМОЛЬ/г НЬ.50

Конкретные Примеры вьтолнения способа.

Пример 1. Пациент А. С., 29 лет. Носительство НВ -антигена было выявлено 6 лет назад при плановом 55 обследовании как донора на областной станции переливания крови. Постоянно находится на диспансерном наблюдении, продолжает оставаться носителем HBj5

0

25

30

35 .{

.

0

45

50

55

антигена. Субъективных и клинических признаков гепатита нет. Биохимические показатели крови (содержание общего билирубина, активность АлАТ, тимоловая проба) нормальные. Активность - глицерофосфатдегидрогеназы нормальная - 6589,1 мкМоль/г НЬ (верхняя граница нормы - 6963,2 мкМоль/г НЬ). При гистологическом исследовании пункта та печени признаков воспалительных изменений в ткани не обнаружено. Пример 2. Пациент Ю, С.,

43лет. Впервые носительство тигена выявлено 4 года назад. При , стационарном и предыдупщх д cпaнcep- ных обследованиях клинических проявлений гепатита не обнаружено. Жалоб не предьявляет. Биохимические пока- з.атели крови без отклонений от нормы. Однако исследование о -глицерофосфат- дегидрогеназы в эритроцитах крови показало 6964,4 мк/Моль/г НЬ, что пре вьшгает верхнюю .границу нормы (6963,2 мкМоль/г НЬ).

Поставлен диагноз: латен.тньй хронический персистирующий гепатит В. Диагноз подтвержден пункционной биопсией печени.

Пример 3. Пациентка И. Е.,

44лет поступила с диагнозом хроническое носительство НВд-антигена для уточнения диагноза и определ.ения состояния печени.

НВд-антиген бьш впервые.обнаружен при обследовании в качестве безвозмездного донора по областной станции переливания крови. После этого анти.-. ген в крови обнаруживали повторно еще дважды. При поступлении в стационар жалоб не предъявляет, считает себя здоровой. Заболевание вирусным гепатитом в прошлом отрицает. Печень не увеличена. Билирубин крови общий - 7 мкмоль/л, прямой - 0,2 мкмоль/л, активность АлАТ также нормальная - 0,3 мкмоль/л. Активность с(- ГФДГ эритроцитов резко повышена I1693,5 МКМОЛЬ/Г НЬ,

При пункционной биопсии печени был выявлен хронический персистирующий гепатит.

Таким образом, предлагаемьй способ позволяет с высокой степенью точности, проверенной морфологическими исследованиями, выявлять латентньй хронический гепатит В. .

Показанием дпя применения данного, способа в клинической практике является обнаружение в крови Нв -антигена у Яиц без явных клинш1еских признаков гепатита.

По сравнению с прототипом, предпа- гаемый способ имеет следующие преимущества:

1)при высокой точности, подтвержденной морфологическими исследованиями, лишен травматичности;

2)отсутствуют какие бы то ни было осложнения, а следовательно, и противопоказания;

3)не требуется специальной подготовки больного;

4)методика исследования технически проста, легко воспроизводима, не требует сложного лабораторного оборудования и дефицитных реактивов, что делает ее доступной для выполнения в

биохимических лабораториях практически лечебных учреждений.

Точность способа - 96%, когда как точность диагностики в прототипе составляет 70-74%.

Формула изобретения

Способ диагностики латентной формы хронического вирусного гепатита В у . носителей НВ -антигена путем биохимического анализа крови, отличающийся тем, что, с целью повы- гаения точности способа, в эритроцитах крови определяют активность с/-глице- рофосфатдегидрогеназы и при ее значении 6963,3 мкмоль/г гемоглобина и более, диагностируют латентную форму хронического вирусного гепатита В.

Изобретение относится к медицине, а именно к гепатологии, и касается инфекционных заболеваний. Целью изобретения является повышение точности диагностики. Для этого у больного берут 4 мл крови, получают осадок эритроцитов, из которых готовят 20%-ный лизат. Затем в эритроцитах крови определяют активность α - глицерофосфатдегидрогеназы и количество гемоглобина. При значении активности 6963,3 мкМоль/г гемоглобина и более, диагностируют латентную форму хронического вирусного гепатита В. Изобретение позволяет повысить точность диагностики с 70-74 до 96 %. 1 табл.

6846,5±116,7 6729,8-6963,2 35

6440,9+174,2 6057,5-6824,3

7 Р 0,05

2-3 ° °