Способ диагностики характера течения ревматоидного артрита Советский патент 1991 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к медицине, а именно к ревматологии, и может быть использовано для диагностики характера течения ревматоидного артрита.

Целью изобретения является ранняя диагностика и повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Больным ревматоидным артритом проводилась пункция суставов с целью получения синовиальной жидкости,

В качестве субстрата использовали БЫ- сокополимерную гиалуроновую кислоту, а с целью освобождения синовиальной жидкости от клеточных элементов и макромолеку- лярных конгломератов, способных ингибировать гиалуронидазу, синовиальную жидкость предварительно подвергали центрифугированию при 40000д в течение 30 мин. Об активности фермента судили по накоплению N-ацетилглюкозамина. количество которого определяли указанным ниже специфичным методом.

Инкубационная смесь состояла из 0,2 мл 0,4%-ного раствора гиалуроновой кислоты в бидистиллированной воде, 0,2 мл синовиальной жидкости, 0,2 мл ацетатного буфера при рН 3.8. с содержанием 0,3 М NaCI (конечная концентрация NaCI в пробе составляла 0,1 М). К каждому опыту ставили контроль на фермент синовиальной жидкости, а к каждой серии - контроль на субстрат и реактивы. Анализируемые смеси и контрольные растворы инкубировали 48 ч при 37°С. Затем для удаления белка пробы кипятили 3 мин, охлаждали, центрифугировали 15 мин при 10000 об/мин, отбирали аликвоты по 0,3 мл, прибавляли 0.1 мл тет- рабората калия (рН результирующего раствора 8,9) и кипятили 3 мин. После охлаждения прибавляли 2,9 мл реактива Эр- лиха, инкубировали 20 мин при 37°С, охлажО

ел го ю

а

дали, измеряли оптическую плотность анализируемых образцов против контроля на реактивы при 586 нм на спектрофотометре. Количество образовавшегося Kl-ацетилглюко- замина, эквивалентное количеству олигосаха- ридов, определяли по калибровочной кривой с N-ацетилглюкозамином в качестве стандарта; подчинение закону Бэра наблюдалось в области 5-100 мкг/мл. Результаты выражали в мкм N-ацетилглюкозамина на 1 г белка синовиальной жидкости, определяемого по методу Лоу- ри. Когда активность гиалуронидазы в синовиальной жидкости составляла 4,51 мкмоль/r белка и менее, диагностировали медленно прогрессирующее течение ревматоидного артрита, а при активности выше 4,51 мкмоль/г белка - быстро прогрессирующее течение ревматоидного артрита.

Способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1, Больная Б-а, 27 лет. Страдает ревматоидным артритом. Первое исследование гиалуронидазы в синовиаль- ной жидкости проведено в апреле 1984 г. (активность составила 20,53 мкмоль/г белка). Давность заболевания в. этот период составила 12 мес.

Другие лабораторные показатели в этот период. СОЭ 26 мм/ч; Т-лимфоциты 53%, реакция ВаалерРоузе 1:256, латекс-тест 1:160, уровень комплемента 58,0 ед. (норма 40-60 ед.).

По активности гиалуронидазы диагностировано быстро прогрессирующее течение артрита.

Повторное исследование активности гиалуронидазы проведено в январе 1986 г. Активность- 15,18 мкмоль/г белка. В это же время выпо/шена рентгенография коленных суставов и кистей. Отмечается значительное сужение суставных щелей, множественные узуры (111 стадия).

Таким образом, по результатам исследования активности гиалуронидазы в сину- виальной жидкости диагностировано быстро прогрессирующее течение ревматоидного артрита. Это же подтверждается рентгенографией суставов.

Пример 2. Больная П-а, 49 лет, Страдает ревматоидным артритом в течение 8 мес.

Первое исследование проведено в апреле 1984 г. На рентгенограмме кистей определялись явления остеопороза и незначительное сужение суставных щелей в области проксимальных межфаланговых суставов кистей (I стадия). Активность гиалуронидазы в синовиальной жидкости составила 1,77 мкмоль/г белка. Исследование крови: СОЭ 48 мм/ч, реакция ВаалерРоузе 1:128, латекс-тест отр.. Т-лимфоциты 49%, уровень комплемента 44 ед.

Повторное исследование активности гиалуронидазы проведено в марте 1986 г. Активность- 3,04 мкмоль/г белка.

По уровню активности гиалуронидазы диагностировано медленно прогрессирующее течение ревматоидного артрита.

В феврале 1988 г. проведена рентгено0 графия кистей и коленных суставов. Определяются явления остеопороза, умеренное сужение суставных щелей коленных суставов проксимальных межфаланговых суставов ки- стей(П стадия), т.е. подтверждается медленно

5 прогрессирующее течение заболевания.

Пример 3 Больной Сл-й, 48 лег Страдает ревматоидным артритом в течение 6 лет.

Первое исследование в 1984 г Актив0 ность гиалуронидазы в синовиальной жидкости 4,51 мкмоль/г белка. В крови СОЭ 52 мм/ч, реакция Вналер-Роузе 1 255. латекс- тест 1:320, Т лимфоциты 53%.. уровень комплемента 46 ед.

5На рентгенограмме кистей и коленных

суставов - умеренное сужение суставных щелей проксимальных межфаланговых суставов и коленных суставов, единичные узуры в суставах кистей (II стадия)

0Повторное исследование гиалуронидазы через 8 мес. Активность 3.87 мкмоль/г белка.

Диагностировано медленно прогрессирующее течение артрита.

5При рентгенографии кистей и коленных

суставов в 1986 и в 1988 г отмечается умеренное сужение суставных щелей проксимальных межфаланговых суставов кистей. более отчетливое сужение суставных щелей

0 коленных суставов, единичные узуры (II стз- дия). Таким образом, подтверждается медленно прогрессирующий характер течения ревматоидного артрита.

Всего обследовано 35 больных ревмато5 идным артритом, у которых уже в первые месяцы заболевания с точностью 97,1 % диагностирован характер течения ревматоидного артрита.

Формула изобретения

0Способ диагностики характера течения

ревматоидного артрита путем исследования биологических жидкостей, отличающийся тем. что, с целью ранней диагностики и повышения точности способа, опре5 деляют активность гиалуронидазы в синовиальной жидкости и при ее значении 4,51 и менее мкмоль/г белка диагностируют медленно прогрессирующее течение, а при значении более 4,51 мкмоль/г белка - быстро прогрессирующее течение артрита.

Изобретение относится к медицине, в частности к ревматологии, и может быть использовано для диагностики характера- течения ревматоидного артрита. Целью является ранняя диагностика и повышение точности способа. Сущность способа заключается в том, что у больных проводят пункцию суставов, берут пробу синовиальной жидкости и определяют в ней активность гиалуронидазы. При ее значении 4,51 мкмоль/r белка и менее диагностируют медленно прогрессирующий ревматоидный ар- трш, а при значении более 4.51 мкмопь/г белка - быстро прогрессирующий. Изобретение позволяет с точностью 97,1 % уже на втором месяце болезни диагностировать характер течения ревматоидного артрита. И t