Способ определения гексенала в крови Советский патент 1991 года по МПК G01N33/49 

Изобретение относится к медицине, в частности к технике исследования биожидкостей человека.

Цель изобретения - повышение точности, ускорение и упрощение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Кровь центрифугируют при 3000 об/мин в течение 2 мин. К 1 мл полученной сыворотки (или мочи) прибавляют 0,2 мл 5 н. НС1 и 0,8 мл буфера (0,2 М) НС1-КС1 (рН 2-3). Раствор центрифугируют, осадок удаляют. Экстракцию из водного раствора проводят хлороформом. Хлороформный слой .отделяют, эту операцию повторяют трижды. Все хлороформные вытяжкки собирают и испаряют. К остатку добавляют точное количество хлороформа.

1 мкл вводят в инжектор хроматографа. В качестве полифазного сорбента используют 1%-ную универсальную жид- ку фазу (У$Ф) - инертон-супер. Газовый хроматограф совмещен с масс- спектрометром 2091 LKB и стеклянными набивными колонками длиной 60 см и диаметром 2 мм.

Рабочие условия анализа: температура сепаратора 493 К, В качестве газа-носителя используют гелий, подаваемый в колонку со скоростью 30 мл/мин, под давлением 0,2 атм. Температура источника ионов 523 К, инжектора 493 К. Температура колонки изменяется от 418 К со скоростью 12°/мин. Ускоряющее напряжение 3,5 кВ. Энергия ионизации электронов 70 эВ. Ток эмиссий катода 1.5 мА. Запись хроматографических пиксв провоО

го 1

& со

дят с помощью детектЬра по полному ионному току. Ц-ный УЖФ - инертонсупер выбран по экспериментальным данным. Для этих целей проведены исследования с 1-, 2-, 3-, 4- и 5%-ным УЖФ - инёртоя-супер и определен удельный удерживаемый объем гексена- ла на модельных смесях с кровью доноров (см. табл.1)i

Если анализ проводить с более низкой концентраций УЖ в полифазном сорбенте (ниже 1%), то может быть адсорбция на твердом носителе, так как при малых концентрациях неподвижной жидкой фазы (ЮТФ) он полность не покрывается с неподвижной жидкой фазой.

Количественный анализ гексенала проводят методом абсолютной калибров ки. Диапазон исследуемых концентраций препарата в хлороформном растворе Ь1( . Строят калибровочные графики для этих диапазонов концентраций.

Результаты количественного знали- ,за (см.табл.2) подвергают статистичес кой обработке (на.модельных смесях с кровью доноров).

Как видно из данных табл.2, относительная ошибка при 1-1СГ равна 0,6%, при Ы0-г- 0,98%, при МО - 2,26%, а при 5,70%. Согласно известному способу при точности 10 относительная ошибка составляет 3,15%. Для проведения известного способа требуется 3 ч, а для проведения предлагаемого способа - 30 мин.

Пример. Больной Е.Г.М.

Диагноз: рецидивные камни обеих почек; хронический пиелонефрит. Оперирован 14.03.88 г.

Гексенал вводили в количестве 5J30 мг. Кровь брали из локтевой вены

через 5, 10, 20, 40, 60, 80, 360 мин после введения гексенала. Количество гексенала в каждой пробе определяли предлагаемым способом.

Количественное определение гексенала проводили методом абсолютной калибровки.

Площади хроматографических пиков составляли, см , для пробы, взятой

По калибровочному графику определяли концентрацию (мг/мп) гексенала в пробах крови (учитывая разведение в 40 мкл), которая состави0

5

0

ла через мин, 5 10 20 40 60 80 360

после введения:

1,771,256,25

2,722,181,151010

Г4

г 4

10

,-у

10

10

Г 5 -У

10

4,57-10

Г -9

Формула изобретения

Способ определения гексенала в крови путем экстракции органическим растворителем и хромато-масс-спектро- метрии, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, ускорения и упрощения способа, в качестве неподвижной фазы используют 1%-ную универсальную жидкую фазу на основе битума (ГОСТ 3508-55) на инертс -супер.

Изобретение относится к медшш- .не, а именно к способам определения лекарственных препаратов в биосредах. Цель изобретения - повышение точности, ускорение и упрощение способа. Способ включает экстракцию гексенапа из крови и хроматографический анализ экстракта на колонке с 1%-ной универсальной жидкой фазой на основе битума (ГОСТ 3508-55) на инертон-супер с масс-спектрометрической детекцией. Ошибка определения на концентрациях составляет 0,98%. Время анализа 30 мин. 2 табл.

Таблица 1

Примечание. Х- средний результат; Sjf - среднеквадратическое

отклонение; ДХ - точность определения; ДХОТИ- относительная погрешность;

tcr - критерий Стъкще

Таблица 2

пределения; ДХОТИ-

tcr - критерий Стъкщента.