Способ выявления ДНК в слизистой шейки матки на цитологическом препарате Советский патент 1992 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии.

Цель изобретения - более полное выявление ДНК в клетке.

Способ осуществляется следующим образом.

Из слизистой шейки матки готовят мик- ролрепарат изолированных клеток (из клеточной взвеси на физиологическом растворе), высушивают при комнатной температуре и помещают на 5 мин в раствор 2 М NaCl и 10 мМ ЭДТА (этилендиаминтетра- уксусная кислота) для экстракции гистоно- вых белков из ядерного матрикса с последующим помещением мазка на 10-12 мин в 0,02 н. раствор HCI, где завершается указанный процесс. Таким образом, происходит разрушение связей дезоксирибонук- леиновой кислоты с белковыми

комплексами, в значительной мере обусловливающими ее пространственную структуру. Далее материал помещают в 0,88 М раствор сахарозы на 10-15 мин для гомогенизации ДНК с последующей фиксацией в изопропиловом спирте в течение 10 мин. Освобождение фосфатных радикалов дезок- сирибонуклеиновой кислоты, которые впоследствии связываются с флюорохромом, производят помещением препарата на 4-5 мин в 5 н. раствор HCI при комнатной температуре. Затем препараты промывают в 3 емкостях с дистиллированной водой, готовят мазок и окрашивают в течение 5 мин 0,2%-ным раствором ауромина 0, содержащим 1 г метабисульфита натрия (на 100 мл раствора).

Процесс обработки микропрепарата завершают споласкиванием в 3 сменах дис(

I

тиллированной воды. Исследование препарата осуществляют на люминесцентной установке Биолам-УИ соспектрофотометрической насадкой СФН- 10, блоком АЦП и ЭВМ Электроника-60 с программным обеспечением. Определение ДНК проводят, последовательно измеряя интенсивность люминесценции клеточных ядер в сине-фиолетовой области (А 420-500 нМ) с использованием иммерсионной системы микроскопа (увеличение X 1400) и нефлюоресцирующего масла (по 1,516) до получения репрезентативной выборки в каждом конкретном случае с последующим получением на ЭВМ ряда статических характеристик и гистограмм плоидности ДНК, Пример. Больная 36 лет. Клинический диагноз: подозрение на рак шейки матки. Взят соскоб с шейки матки. Предлагаемым методом приготовлены мазки. Мазки исследованы на содержание ДНК в клетках эпителия. По содержанию ДНК в клетках

определена умеренная дисплазия. Проведение повторного гистологического исследования подтвердило этот диагноз.

Способ позволяет более полно выявить

ДНК в клетках, что дает возможность уточнить диагноз заболеваний, связанных с гиперплазией эпителия шейки матки. Формула изобретения Способ выявления ДНК в слизистой

шейки матки на цитологическом препарате путем инкубации с ауромином 0, гидролиза в соляной кислоте и определения ДНК по интенсивности люминесценции, отличающийся тем, что, с целью полного выявления

ДНК, препараты до инкубации обрабатывают последовательно в среде, содержащей 2 М NaCI и ЭДТА в течение 5-6 мин, затем в 0,02 н. HCI в течение 10-12 мин и 0,88 М сахарозе в течение 10-15 мин, а гидролиз

проводят в 5 н. HCI в течение 4-5 мин при комнатной температуре.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии. Цель изобретения - выявление более полно ДНК в клетках эпителия. Препараты до окрашивания последо- вательно обрабатывают в среде, содержащей 2 М NaCl и ЭДТА в течение 5-6 мин, затем в 0,002 н. HCI в течение 10-12 мин и 0,88 М сахарозе в течение 10-15 мин, а гидролиз проводят в 5 н. HCI в течение 4-5 мин при комнатной температуре. Способ позволяет полностью выявить содержание ДНК в клетке, что позволяет использовать этот тест в качестве диагностического при решении вопроса о предраке или раке шейки матки.