Способ определения количества реакционных центров фотосистемы 2 растений Советский патент 1991 года по МПК A01G7/00 G01N33/00 

Изобретение относится к биофизике, биохимии и физиологии растений, а именно к способам определения количества реакционных центров растений, и может быть использовано в исследованиях структурно- функциональной организации пигмент-бел- коволипидного комплекса фотосистемы двух растений.

Цель изобретения - повышение точности и ускорение способа.

П р и м е р 1. Суспензию клеток водоросли Chlamydomonas reinhardll инкбируют в течение 10-15 мин при комнатной температуре в среде А, содержащей 0,1% тритона Х-100; 0,8-1 М трис-HCI (рН 8,0-9,3): 35-40 мМ NaCI; 0,5-1,0 мМ этилендиаминтетраа- цетата натрия.

В аликвоте определяют концентрацию хлорофилла в 80%-ном ацетоне для вычисления величины фотосцятетической единицы. Для спектрофотометрических измерений фотоиндуцированных изменений поглощения образца А А при 678 нм в кювету ( см) вносят 50 мкМ силикомолибдата натрия и доводят до 2 мл суспензией клеток.

Измерения ДА Пезо проводят на двух- лучевой фосфороскопической установке. Мощность зондирующего света - 50 эрг , мощность действующего света 2,8 105 эрг . Точность измерения составляет 10 ед. оптической плотности.

П р и м е р 2. Хлоропласты выделяют из 10-14-дневных проростков гороха на холоду (при 0° + 4°С). Для этого 50 г листьев разрушают в гомогенизаторе в течение 2-3 с в среде, содержащей 0,35 М NaCI, 0,02 М трис-HCI буфер (рН 7,8) и 2 мг/мл аскорбата натрия. Фильтрат, полученный после отжимания массы через полотно и восемь слоев

О

о

JN vj

Os

марли, центрифугируют в течение 1 мин при 1000 об/мин, осадок отбрасывают, су- пернатант вновь центрифугируют при 5000 об/мин в течение 5 мин. Супернатант (обломки хлоропластов) отбрасывают, а оса- док целых хлороггластов ресуспендируют в среде А. Концентрацию хлорофилла определяют в 80%-ном ацетоне.

Определение количества реакционных центров фотосистемы двух растений в хло- ропластах проводят по примеру 1.

П р и м е р 3. Проводят выделение фрагментов хлоропластов, обогащенных фотосистемой двух растений. Для этого хлоропласты тщательно суспендируют в среде, содержащей 0,07 М фосфатный буфер (рН 7,0), 0,5 М сахарозу и 0,035 М NaCI. Затем вносят в реакционную смесь 1 %-ныЙ раствор дигитонина для разрушения хло- ропластной мембраны. Полученную суспен- зию обрабатывают на ультразвуковом диспергаторе (22 кГц, 400 Вт, 1 мин), чтобы получить фрагменты хлоропластов с одинаковой степенью нарушенности мембран, и после добавления NaCI (до 2%) инкубируют на ледяной бане при энергичном перемешивании втечение 40 мин. Гомогенат центрифугируют 15 мин при 4000 хд. осадок отбрасывают, а к супернатанту быстро добавляют тритон Х-100 до конечной концентрации 0,1-0,15% и вновь центрифугируют при 20000 хд в течение 45 мин. Фрагменты хлоропластов собирают и ресуспендируют в среде А. Измерения проводятся по примеру 1.

Формула изобретения Способ определения количества реакционных центров фотосистемы двух растений, включающий определение концентрации хлорофилла в исследуемом образце и последующее спектрофотометри- ческое измерение фотоиндуцированных изменений поглощения образца, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, в качестве исследуемого образца используют клетки или хлоропласты или субхлоропластные частицы, спектрофотометрическое измерение проводят в среде, содержащей 25-100 мкМ силикомолибдата натрия и 0,5-1 мМ этилен- диаминтетраацетата натрия, а количество реакционных центров фотосистемы 2 определяют по количеству первичного донора электрона фотосистемы 2-Пбво.

Изобретение относится к биохимии, биофизике и физиологии растений, а именно к способам определения количества реакционных центров фотосистемы 2 растений. Целью изобретения является повышение точности и ускорение способа. Для достижения поставленной цели спектрофотометрическое измерение протоиндуцированных изменений поглощения проводят в среде, содержащей 25 - 100 мкМ силикомолибдата натрия и 0,5 - 1 мМ этилендиаминтетраацетата натрия. В качестве исследуемого образца используют клетки или хлоропласты или субхлоропластные частицы, а количество реакционных центров протосистемы 2 определяют по количеству первичного донора электрона протосистемы 2 - П₆₈₀.