Способ микроклонального размножения абрикоса Советский патент 1991 года по МПК A01H4/00 C12N5/04 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к методам микроклональ- ного размножения растений, и может быть использовано для клонального микроразмножения и ускоренного получения большого количества генетически однородного посадочного материала абрикоса.

Цель изобретения - ускорение размножения и снижение уровня бактериального заражения.

Способ осуществляют следующим образом.

Весной срезают однолетние черенки из различных частей кроны пдлодоносящего дерева и помещают в сосуды с водой. Через месяц вегетативные почки распускаются и образуют побеги длиной 1-3 см. Верхушки побегов, состоящие из конуса нарастания и 2-4 пар примордиальных листьев, изолируют и предварительно стерилизуют 70%-ным этанолом в течение 1 мин, после чего проводят стерилизацию в 0,1%-ном растворе ди- ацида. В табл. 1 приведен состав питательных сред (рН 5.8) для способа кло- нэльногомикроразмноженияабрикоса. После 3-кратной промывки в стерильной дистиллированной воде апексы побегов помещают на среду 1 (табл.1), затем полученный материал культивируют на среде 2 и проводят укоренение на среде 3 с последующим переносом на безгормональную среду Му- расиге-Скупа. Полученные растения адаптируют к условиям открытого грунта путем подращивания в стерильной почве, после чего получают посадочный материал, пригодный для выращивания в нестерильных условиях.

П р и е р 1. Апексы побегов длиной 4-5 мм стерилизют 1 мин в 70-градусном этиловом спирте и 20 мин в 0,1%-ном растворе диацида, трижды промывают стерильной водой и помещают на питательную среду 1, содержащую, мг/л:

Минеральные соли по прописи MS Тиамин HCII

Никотиновая кислотаI

ПиридОксин HCIf

Инозит50

Глицин10

БАПI

О

о

4 Ю О

ИУК

ПВП, г/л Сахароза,г/л Агар, г/л рН среды

0,1 10 30 7 5,8.

Для получения 100%-ной стерильности испытывают разное время выдерживания апексов в 0,1%-ном растворе диацида, результаты представлены в табл.2.

Из табл.2 видно, что время 20 мин является оптимальным. При такой экспозиции получают 100% -ную стерильность при полной жизнеспособности эксплантов.

Л р и м е р 2. На первом этапе культивирования в пиаттельную среду 1, приготовленную на основе прописи MS, кроме общепринятых концентраций витаминов (тиамин, никотиновая кислота, пиридоксин - по 1 мг/л) вводят дополнительные вещества, повышающие выживаемость эксплантов, мг/л; инозит 50; глицин 10 и ИУК 0,1.

Для стимулирования пролиферации пазушных меристем в состав среды для размножения (2) вводят БАП в различных концентрациях.

В табл. 3 показано влияние цитоктини- на (БАП) на микроразмножение абрикоса.

Из табл. 3 видно, что полное отсутствие в среде цитокинина является нежелательным, так как приводит к некрозу верхушек побегов и затем к гибели всех эксплантов. Культивирование можно производить при концентрации БАП в среде 0,1 и 1 мг/л в зависимости от поставленной цели: для размножения материала и быстрого получения большого количества микропобегов следует использовать цитокинин в концентрации 1 мг/л. Перед укоренением целесообразнее снизить концентрацию БАП в 10 раз (0,1 мг/л) для восстановления апикального доминирования, приводящего к росту побегов в длину.

. П р и м е р 3. Для индукции ризогенеза побеги культивируют на среде 3, содержащей половину нормы минеральных солей по прописи М5,тиамин, никотиновую кислоту и пиридоксин - по 1 , ауксин (ИМК) и сахарозу в различных концентрациях.

Результаты приведены в табл.4.

Из табл.4 видно, что лучшим для укоренения является вариант 9, в котором побеги выдерживают на среде с 1 мг/л ИМК в темноте 10 дней, а затем пересаживают на безгормональную среду. Оптимальная

концентрация сахарозы 3% (30 г/л). Культивирование на безгормональной среде проводят в условиях освещения.

Применение предлагаемого способа в

биотехнологии по сравнению с известным способом дает следующие преимущества: сокращение на 1 год сроков получения посадочного материала за счет упрощения и уменьшения трудоемкости стадии введения

в культуру, а также снижение заражения бактериальными и грибными инфекциями на первом этапе культивирования за счет использования апексов растущих побегов.

Ф о р м у л а и з о б р ет е н и я

Способ микроклонального размножения абрикоса, включающий стерилизацию эксплантатов, введение их в культуру, предварительное культивирование, пролиферацию пазушных меристем до получения микропобегов, их последующее укоренение и адаптацию к условиям открытого грунта, отличающийся тем, что, с целью ускорения размножения и снижения уровня бактериального заражения, в качестве эксплантатов используют апексы побегов, полученных из распустившихся почек срезанных черенков, стерилизацию проводят последовательно в 70%-ном этаноле и в

0,1 %-ном растворе диацида, предварительное культивирование проводят на питательной среде Мурасиге-Скуга в присутствии 1 мг/л тиамина, 1 мг/л никотиновой кислоты, 1 мг/л nnpHflOKCrtHa HCI, 50 мг/л инозита,

10 мг/л глицина1 1 мг/л с-бензиламинопури- на при содержании сахарозы 30 г/л и агара 7 г/л, профилерацию меристем проводят на среде Мурасиге-Скуга в присутствии 1 мг/л тиамина, 1 мг/л никотиновой кислоты, 1

мг/л пиридоксина HCI, 1 мг/л бензиламино- пурина при содержании сахарозы 30 г/л и агата 7 г/л, укоренение проводят в течение 10 дней в темноте на питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащей интегредиенты в количестве 1/2 набора по прописи в присутствии 1 мг/л тиамина, 1 мг/л никотиновой кислоты, 1 мг/л пиридоксина HCL, 1 мг/л индолилмасляной кислоты при содержании сахарозы 30 г/л и агара 7 г/л, затем

полученный растительный материал переносят на безгормональную среду в условия освещения, а адаптацию полученных растений осуществляют путем подращивания в стерильной почве.

Таблица 1

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для ускоренного получения большого количества генетически однородного посадочного материала абрикоса. Целью изобретения является ускорение размножения и снижение уровня бактериального заражения. Способ заключается в том, что введение в культуру проводят путем стерилизации побегов, полученных из почек, взятых весной непосредственно от взрослого плодоносящего дерева. Культивирование проводят в несколько этапов на модифицированной фитогормонами среде Мурасиге-Скуга. 4 табл.

КР определяется количеством вновь образованных побегов на один первоначальный побег.

Таблица 2

Таблица 3

Таблица 4