Способ определения проокислительной активности химических веществ Советский патент 1991 года по МПК G01N33/52 G09B23/28 

Изобретение относится к биохимическим и медицинским исследованиям, в частности к фармакологии, и может быть использовано для определения активности факторов, стимулирующих скорость переокисления липидов.

Цель изобретения - ускорение способа.

Способ осуществля ют следующим образом.

Приготовляют модельную систему с конечной концентрацией олеиновой кислоты - 6 мг/мл (21,3 мМ/л), рН 7,5. Олеиновую кислоту в количестве 319,3 мМ растворяют в 4 мл этанола и прибавляют 7 мл 20 мМ раствора КН2Р04 Затем тщательно перемешивают, доводят рН модельной системы до значения 7,5 путем капельного добавления Юн. раствора КОН. К0,8мл приготовленной модельной системы добавляют 0,2 мл раствора исследуемого прооксиданта (в этаноле или фосфатном буфере) и переносят кювету в установку для измерения сверхслабых свечений В данную кювету быстро вводят 1 мл 1,2%-ного раствора На02 и регистрируют на самописце или с помощью интенсиметра в течение 3-5 с быструю вспышку хемилюминесценции Затем проводят контроль аналогично опыту, только вместо раствора прооксиданта добавляют 0,2 мл его растворителя. Определяют свето- сумму быстрой вспышки, вычисляют процент ее увеличения по сравнению с контролем и данные заносят в протокол Исследования

Измерение хемилюминесценции проводят на установленных для измерения сверхслабых световых потоках, работающих в режиме счета фотонов.

О

о ел

со

о ел

П р и м е р 1 (расчет). При комнатной температуре в течение 5 с регистрируют быструю вспышку хемилюминесценции при добавлении инициатора Н202 в кювету с модельной системой, содержащей исследуемый прооксидант, и производят измерение ее интенсивности (число импульсов I0), а затем измеряют интенсивность хемилюминесценции в контроле (число импульсов к). Если, например, о 1500, a IK 1000, то вели- Ьину прооксидантной активности (ПОА) вещества определяют по формуле

ПОА (-}s- - 1 ) 100 % 50 % .

П р и м е р 2 (конкретное осуществление способа). Проведено определение прооксидантной активности ряда прооксидантов. Липидорастворимый прооксидант - эрго- кальциферол, растворяли в этаноле перед введением в модельную систему, а водорастворимые проксиданты -FeSCbrThteO (ионы двухвалентного железа), адренохром и азид натрия - в фосфатном буфере. Данные определения ПОА этих веществ представлены в таблице.

Ход осуществления работы по предлагаемому способу занимает 5-10 мин, что дает выигрыш во времени по сравнению с известным способом и ближайшим аналогом в 5-7 раз.

Предлагаемый способ позволяет определить проокислительную активность не только водорастворимых, но и липидораст- воримых прооксидантов. Предлагаемый способ обеспечивает высокую чувствительность, хорошую воспроизводимость, а также быстр и прост в осуществлении.

Способ может быть использован как в процессе фармакологии, так и в научных медицинских и биохимических исследованиях.

Ф о р м у л а и з о б р ете н и я

Способ определения проокислительной активности химических веществ путем введения исследуемого вещества в модельную

систему, содержащую субстрат и инициатор свободнорадикального окисления с после/дующей регистрацией хемилюминесценции, отличающийся тем, что. с целью ускорения способа, в качестве субстрата используют олеиновую кислоту в концентрации 6 мг/мл в этанолфосфатном буфере, в качестве инициатора - 1,2%-ный раствор перекиси водорода, а прооксидантную активность определяют по нарастанию величины светосуммы быстрой вспышки хемилюминесценции после добавления исследуемого вещества.

Изобретение относится к способам определения факторов регуляции перекисного окисления липидов, а именно к способам определения прооксидантной активности вещества. Цель изобретения - ускорение способа. Исследуемое вещество в растворе вводят в модельную систему, представляющую собой 21,3 мМ этанол-буферного раствора олеиновой кислоты с PH 7,5, куда добавляют инициатор 1,2%-ный раствор перекиси водорода, после чего регистрируют быструю вспышку хемилюминесценции и по нарастанию величины со светосуммы по сравнению с контролем определяют проокислительную активность вещества. Способ позволяет ускорить определение проокислительной активности в 5 - 7 раз.

Примечание. Величина активности представляет собой среднее арифметическое из пяти параллельных опытов.