Адъювант для противопастереллезной вакцины Советский патент 1991 года по МПК A61K39/00 

Изобретение относится к области биологии, ветеринарии, а именно к масляным адьювантам, и может быть использовано для активной иммунизации животных и в сывороточном деле.

Целью изобретения является снижение вязкости и реактогенности.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Адъювант готовят непосредственно перед изготовлением вакцины из 90-95% синтетического полиальфаолефи- нового масла (М)Д) и И-10% этерифициро- ванного триглицерина (Т-3).

Синтетическое полиальфаолефиновое масло представляет собой химически инертную бесцветную прозрачную жидкость с вязкостью при 20°С 10-14 мм2.с и плотностью 780-800 кг/м , имеет температуру застывания ниже - 40°С.

Масло получают в виде дистиллата, выкипающего в пределах 280-380°С при разгонке гидрированных полиальфаолефинов.

По химическому составу полидпьфаоле- финовое масло представляет собой смесь изопарафиновых углеводородов (85-90%) и нафтеновых углеводородов (10-15%) с числом углеродных атомов 20-28.

Этерифицированный триглицерин ТУ- 18-17/35-75 является эфиром олеиновой кислоты, стойкий неогнеопэсный продукт, полностью растворенный на 96° спирте, представляет собой коричневую, тягучую жидкость с гидрофильно-липофильным балансом, равным 4,5. В синтетическом поли- альфаолефиновом масле растворяют 4-10% эмульгатора этерифицированного триглицерина и автоклавируют при 120°С в течение 1 ч. Готовый адьювант представляет собой прозрачную маслянистую жидкость светло-коричневого цвета.

Ё

О

о

vj 00 О 00

Адъювант испытывают в составе эмульгированной вакцины против пастереллеза крупного рогатого скота, овец и буйоолов, содержащей, мас.%:

Синтетическое полиальфаолефиновое масло (М Ц) 45

Этерифицированный триглицерин (Т-3) 5

Антиген до 100

Антигеном служит формалинизированная суспензия производственных штаммов пас- терелл, используемая для изготовления коммерческой эмульгированной вакцины против пастереллеза крупного рогатого скота, овец и буйволов.

Для изучения реактогенности масляных адъювантов, содержащих различное соотношение компонентов (полиальфаолефиновое масло и Этерифицированный триглицерин), а также стабильности и имму- ногенной активности эмульгированных про- тивопастереллезных вакцин на их основе. Изготовляют 5 серий опытных противопаст- ,ереллезных вакцин .

Состав опытных эмульгированных про- тивопастереллезных вакцин приведен в табл.1.

Вакцины готовят в виде 50% эмульсии на лабораторном размельчителе тканей РТ- 2.К. проавтоклавированному и охлаждение- му до комнатной температуры адьюванту при постоянно работающей мешалке постепенно приливают объем 20 млрд. формали- низированной суспензии пастер-злл (антиген). Окончательное эмульгирование проводят при 5000 об/мин в течение LS-4 мин. Полученные вакцины проверяют на стерильность путем высева на различные питательные среды. К дальнейшим исследованиям допускаются лишь стерильные пре- параты.

Стабильность вакцин проверяют центрифугированием при 3000 об/мин в течение 30 мин и двухнедельным выдерживанием вакцин в термостате при 37°С. Вакцины признаются стабильными если не происходит расслоение водно-масляной фазы (допускается отход 10% масляной фазы от общего объема вакцины). Динамическую вязкость проверяют на ротационном виско- зиметре Реотест-2.

Результаты проверки стерильности, стабильности, вязкости вакцин сведены в табл.2.

Данные приведенные в табл.2, показы- вают, что для создания стабильных вакцин низкой вязкости оптимальным является 5- 10% содержание эмульгатора в адъювенте (соответственно 2,5-5% в вакцине) Повышение содержания эмульгатора в вакцине

приводит к значительному увеличению вязкости продукта.

Для изучения иммуногеной активности каждой вакциной иммунизируют внутримышечно по 6 кроликов (вес 1,5-2 кг) в дозе 1,5 мл. Четыре животных служат контролем. Через 24 дня после вакцинации животных заражают предварительно смертельной дозой 18-ти часовой культуры P.multocida штамм 796. Результаты контрольного заражения приведены в табл.3.

Из табл.3 следует, что все опытные вакцины обладают сходной иммуногенной активностью. Изменение процентного соотношения компонентов в адъюванте существенно не сказывается на иммуногенной активности вакцины.

Оценку реактогенности адъювантов, на основе которых изготавливают вакцины, проводят на белых мышах. Десяти белым мышам весом 17-18 г вводят в область подушечки задней конечности 0,025 мл испытуемого адьюванта. Вторая конечность служит контролем. Через 14 дней мышей убивают, задние лапки отсекают по скакательный сустав и взвешивают раздельно. Реактоген- ность определяют как процент прироста мзссы в результате воспалительной реакции по формуле

« М. 1-100%,

м

где К - коэффициент реактогенности;

М1-сумма веса опытных лапок;

м - сумма веса интактных (контрольных) лапок.

Результаты реактогеиности адъювантов приведены в табл.4.

Результаты показали, что изменение содержания компонентов в адъюванте не влияет на его реактогенность.

Безвредность вакцины проверяют на белых мышах в сравнении с эмульгированной вакциной против пастереллеза крупного рогатого скота, овец и буйволов. С этой целью 40 белых мышей с массой тела 16-18 i разбивают на 4 равные группы. Каждому животному вводят вакцины согласно схемы (табл.5).

Результаты испытания на белых мышах показали, что животные всех групп на .протяжении периода наблюдения были живы, следовательно, вакцина на основе синтетического масла (МЦ) и эмульгатора этерифи- цированного триглицерина (Т-3) безвредна.

Таким образом, увеличение содержания этерифицированного триглицерина сверх указанных пределов не вызывает существенного изменения иммуногенной активности, реактогенности и стабильности вакцины, однако значительно увеличивает вязкость препарата и ведет к необоснованному расходу компонентов.

Снижение содержания этерифициро- ванного триглицерина ниже 5% не позволяет получать стабильные эмульгированные препараты.

Формула изобретения Адъювант для противопэстереллезной вакцины, содержащий масло и эмульгатор,

отличающийся тем, что, с целью снижения вязкости и реактогенности, в качестве масла используют синтетическое по- лиальфаолефиновое масло, в качестве эмульгатора этерифицированный триглице- рин при следующем соотношении компонентов. мас.%:

Полиальфаолефиновое масло 90-95 Этерифицированный триглицерин 5-10

Таблица 1

Изобретение относится к области биологии, ветеринарии, а именно к масляным адъювантам, и может быть использовано для активной иммунизации животных и в сыворочном деле. Цель изобретения - снижение вязкости и реактогенности вакцины против пастереллеза сельскохозяйственных животных. Адъювант готовят растворением в синтетическом полиальфаолефиновом масле (МЦ) 5 - 10% эмульгатора этерифицированного триглицерина (Т - 3) и автоклавированием при 120°С в течение 1 ч. Адъювант испытывают в составе противопастереллезной вакцины на стерильность, стабильность, безвредность, вязкость, иммуногенность и реактогенность. Получены эффективные стабильные вакцины низкой вязкости. 5 табл.

Таблица 2

Таблица 3

Таблица 4

Таблица 5