Питательная среда для выращивания колибактерий Советский патент 1991 года по МПК C12N1/20 

1

(21)4698217/13

(22)31.05.89

(46) 23.08.91 . Бюл. № 31

(71)Всесоюзный научно-исследовательский институт прикладной энзимологии

(72)В.П.Грибаускене, Т ЛО.Падегимас, А.Б.Павиленене, А.-П.П.Ужкуренас, А.-О.П.Шпокене и А.А.Лаляан

(53)576.8.093(088.8)

(56)Патент Франции N 2466251, кл. А 61 К 39/00, опублик. 1979.

(54)ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ КОЛИБАКТЕРИИ

(57)Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается выращивания колибактерий. Цель изобретения - увеличение выхода бактериальных клеток и удешевление среды. Для глубинного культивирования колибактерий используют питательную среду, содержащую белковый гидролизат жмыха легких 0,5 - 1,5 мае.2, крахмал осаха- ренный 0,5 - 1,5 млс.% и воду - остальное. Жмыхи легких являются отходом производства эндокринных препаратов. Жмыхи легких гидролизуют Лер- ментным препаратом из Streptomyc.es species 197. Для этих целей можно также использовать протеазу из Bacillus subtilis. Выход колибактерий составляет 10-2610 кл/мл среды. 3 табл.

с

SS

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается выращивания колибактерий. Цель изобретения - увеличение выхода бактериальных клеток и удешевление среды. Для глубинного культивирования колибактерий используют питательную среду, содержащую белковый гидролизат жмыха легких 0,5 - 1,5 мас.%, крахмал осахаренный 0,5 - 1,5 мас.% и воду - остальное. Жмыхи легких являются отходом производства эндокринных препаратов. Жмыхи легких гидролизуют ферментным препаратом из STREPTOMYCES SPECIES 197. Для этих целей можно также использовать протеазу из BACILLUS SUDTILIS. Выход колибактерий составляет 10 - 26^.10⁹ кл/мл среды. 3 табл.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается выращивания колибактерий.

Цель изобретения - увеличение выхода бактериальных клеток и удешевление среды.

Питательную среду готовят следующим образом.

Осахаривание крахмала.

10 г нерастворимого кукурузного крахмала заливают 100 мл водопроводной воды, подогревают до 40 С, добавляют 50 мг амилосубтилина ГЗх, рН доводят до 6,6, подогревают до 85°С и выдерживают при перемешивании в течение 30 мин. Далее кипятят в водяной ванне в течение 1 ч, охлаждают до 75°С, добавляют 25 г амилосубтилина ГЗх, проверяют качество осахаривания с йодом (не должен дать синего окраши ания), рН доводят до 5,0 при помощи ортосЬоссЬорной кислоты, охлаждают до 58 С, прибавляют 2 мл глюкаваморина Гх с активностью 50 ед/мл и выдерживают при 58°С в течение 6 ч.

Получение белкового гидролизата жмыха легких.

При получении гидролизата жмыха легких для данной среды в реактор емкостью 0,5 м3 загружают 140 кг жмыха легких и 340 л воды, переметивчют, рН смеси доводят до 8,5 раствором едкого натрия, смесь нагревают до 45°С и вносят 1,5 кг берментного препарата из Streptomyces species 197. Гидроли- зуемую смесь однократно консервируют добавлением 2,5 л хлороформа или толуола. Процесс ведут при постоянном перемешивании и температуре 45°С в течение 8 ч, рН гидролизуемой смеси

о

оэ оо

СП

поддерживают раствором едкого натрия на уровне 8,5. Но окончании гидролиза смесь подкисляют до рН 5,0-5,5, нагревают до 100 С и выдерживают в течение 10 мин, затем фильтруют на вакуум-барабанном Фильтре с фильтропер- литом. Фильтрат упаривают и полученный концентрат сушат на распылительной сушилке.

Общий азот 10,2-10,5%, аминный азот 4,1 - 4,3%.

Содержание свободных аминокислот в гидролизате жмыха легких, предлагаемого для данной среды, и в других мясных гидролизатах представлено в табл. 1 .

Пример 1. Для глубинного культивирования колибактерий используют питательную среду следующего состава, мас.%: белковый гидролизат жмыха легких 1,0; осахаренный крахмал 1,0, водопроводная вюда 98,0. Количество клеток на выходе 25x10 кл/мл.

Пример 2. Аналогично примеру 1 готовят питательную среду следующего состава, мас.%: белковый гидролизат жмыха легких Л,5; осахаренный крахмал 0,5 водопроводная вода 99,0.

10

Количество клеток E.coli 88 при росте на питательной среде с пептоном приведено в табл. 2.

Количество клеток E.coli 88 при росте на питательной среде с гидрол затом жмыха легких, полученного с и пользованием щелочной протеазы из subtilis, приведено в габл.З.

Применение предлагаемой питател ной среды для выращивания колибакт рий обеспечивает ускорение роста и результате ускоренного роста в 2,5 за (на 150%) повышает выход количе ства клеток по сравнению с выращив нием на известной питательной сред

Компоненты предлагаемой питател ной среды являются простыми, легкод ступными и дешевыми, что обеспечив ет удешевление и упрощение состава среды и технологического процесса цепом и дает возможность применять данную питательную среду в полупрои водственных и производственных мас 25 бах изготовления коливакцины.

15

20

Формула изобретени

Питательная среда для выращивани Зо колибактерий, содержащая источники углерода и азота, воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения выхода бактериальных кле ток и удешевления среды, в качестве

Количество клеток на выходе 10х хЮ кл/мл.

Поимер 3. Аналогично примеру 1 готовят питательную cpenv слелуюшего состава, мас.%: белковый гидролизат жмыха легких 1,5j осахаренный крахмал 35 источника азота она содержит жмых 1,5; водопроводная вода 97,0. Количе- легкого - отход производства эндо- ство клеток на выходе 26x10 кл/мл.

Сравнительные данные выхода количества КЛРТОК E.coli 88 при росте на средах с другими мясными гидролизата- ми представлены в табл. 2 и 3, из которых видно,что наибольшее количество клеток получено при росте на предлагаемой пикринных препаратов, подвергнутый гидролизу ферментным препаратом из Streptomyces species 197,- а в каче во ве источника углерода - осахаренный крахмал при следующем соотношении понентов, мае..%: жмых легкого - отх производства эндокринных препарато подвергнутый гидролизу ферментным 45 паратом из Streptomyces species 19 0,5-1,5, осахаренный крахмал 0,5-1 чода - остальное.

тательной среде, в состав которой входит гидролизат жмыха легких с использованием Streptomyces species 197.

и.

10

6716854

Количество клеток E.coli 88 при росте на питательной среде с пептоном приведено в табл. 2.

Количество клеток E.coli 88 при росте на питательной среде с гидроли- затом жмыха легких, полученного с использованием щелочной протеазы из Вас. subtilis, приведено в габл.З.

Применение предлагаемой питательной среды для выращивания колибактерий обеспечивает ускорение роста и в результате ускоренного роста в 2,5 раза (на 150%) повышает выход количества клеток по сравнению с выращиванием на известной питательной среде.

Компоненты предлагаемой питательной среды являются простыми, легкодоступными и дешевыми, что обеспечивает удешевление и упрощение состава среды и технологического процесса в цепом и дает возможность применять данную питательную среду в полупроизводственных и производственных масшта- 25 бах изготовления коливакцины.

15

20

Формула изобретения

Питательная среда для выращивания колибактерий, содержащая источники углерода и азота, воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения выхода бактериальных клеток и удешевления среды, в качестве

источника азота она содержит жмых легкого - отход производства эндо-

источника азота она содержит жмых легкого - отход производства эндо-

кринных препаратов, подвергнутый гидролизу ферментным препаратом из Streptomyces species 197,- а в качестве источника углерода - осахаренный крахмал при следующем соотношении компонентов, мае..%: жмых легкого - отход производства эндокринных препаратов, подвергнутый гидролизу ферментным пре- паратом из Streptomyces species 197 0,5-1,5, осахаренный крахмал 0,5-1,5, чода - остальное.

Пептон, мас.% 1,0 Крахмал кукурузный нерастворимый , мае.% 1,0 Количество клеток, 109/мл9

0,51,50,25 2,0

0,51,50,25 2,0

0,5 10

0,310,5

1,0 0,5

1,0

13

0,5

Т а б л ц п я 3

1,5

0,25 2,0

1,5 . 0,25 2,0

14

0,8 14,8