Способ определения субпопуляций лимфоцитов на мазке Советский патент 1991 года по МПК G01N33/49 A61B10/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии.

Целью изобретения является повышение точности способа за счет раздельного выявления Т-хелперов, Т-супрессоров и нулевых лимфоцитов.

Способ осуществляют следующим образом.

Из пальца набирают кровь, готовят мазки, которые окрашивают красителем, содержащем нафтол ASBS, парарозанилин и уксуснокислый натрий. Краситель двухком- понентный и готовится сначала маточный насыщенный раствор парарозанилина в го- 2NHCI.

Далее готовится раствор А, содержащий 20 мг нафтол ASBS фосфата, 0,5 мл диметилформамида. 40 мл 0,1 N уксуснокислого натрия. Затем 8 капель 4%-ного раствора азотнокислого натрия смешивают с 8 каплями 4%-ного раствора парарозанилина. Растворы А и В смешивают, фильтруют и

устанавливают рН 5,2-5,4. Мазки в этой инкубационной среде выдерживают в течение 1,5-2 ч при 37°С. Затем мазки промывают и сушат. В лимфоцитах под микроскопом определяют распределение фермента кислая фосфатаза по цитоплазме клетки.

Лимфоциты по распределению фермента в клетке относили к тем или другим популяциям.

Так, клетки, в которых был фермент в виде 1-4 гранул в цитоплазме, были отнесены к Т-хелперам; клетки, в которых было до 5 и более гранул - к нулевым лимфоцитам. Клетки, которые содержали фермент в виде равномерного распределения по всей цитоплазме отнесены к Т-супрессорам. Эти данные нашли полностью подтверждение при контрольных иммунологических исследованиях.

Пример 1. Ребенок 4 лет. Сделана прививка живой коревой вакциной.

(Л

С

о VJ

го ho о

00

До вакцинации общее количество лимфоцитов в 1 мкл 6930 На мазках виявлено следующее количество субпопуляций в лимфоцитах:

1-хелперов 13% (2980 в 1 мкл);

Т-супрессоров 16% (1109 в 1 мкл);

В-лимфоцитов 39% (2701 в 1 мкл);

нулевых лимфоцитов 2% (139 в 1 мкл).

В процессе поствакцинации содержание Т-хелперов снизилось 0.035%, В-лимфоцитов 0,0632%, напротив, Т-супрессоры возросли до 24% и нулевые лимфоциты увеличились до 90, что дало возможность оценить состояние иммунизации в период вакцинации как положительное. Титр про- тивокоревых антител был равен 1:64.

Способ позволяет точно определить иммунный статус организма за счет быстрого

и раздельного определения псех субпопулч- ций лимфоцитов

Формула изобретения Способ определения субпопуляций

лимфоцитов на мазке путем их инкубации в среде, содержащей нафтол ASBS фосфат, парарозанилин и азотистокислый натрий и выявлении фермента кислой фосфатазы в клетках, отличающийся тем, что с целью повышения точности способа за счет раздельного выявления Т-хелперов, Т-супрессоров и нулевых лимфоцитов, инкубацию проводят в течение 1,5-2 ч и при наличии до 14 гранул.фермента в клетке определяют Т-хелперы, при диффузном распоеделении фермента - Т-супрессоры, а при 5 и более гранулах фермента - нулевые лимфоциты.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Целью является повышение точности способа за счет раздельного определения Т-хелперов, Т-супрессоров и нулевых лимфоцитов. Мазки инкубируют в среде для окраски на кислую фосфатазу. Инкубацию проводят при 37°С в течение 1,5 - 2 ч. При наличии в лимфоцитах 1 - 4 гранул фермента определяют Т-хелперы, при равномерном распределении фермента по цитоплазме - Т-супрессоры, а при 5 и более гранулах нулевые лимфоциты. Способ быстро и точно может определить иммунный статус организма.