Гомогенный раствор 0,1/5 г диэти- лового эфира N-J4-(J2-(2- ацетамидо- -4-оксипиридр 2,3-d пиримидИн-6-ил)У- этил1бензоил1-1,-глутаминовой кислоты в 50 мл метанола, содержащего 3 мл 1но водного раствора гидроокиси натрия, перемешивают при комнатной температуре в течение /2 ч Добавляя 2 мй уксусной кислоты с последующим цент- рифугированием, можно получить 0,125 г (86%) предлагаемого соединения, названного 5,10-дидеазафолиевой кислотой, в виде микрокристаллического бесцветного твердого вещества, т0пЛо свыше 2006Со
ЯМР /ТФА-д) Ј, Ррт: 2,3-2,7 (м, 2Н); 2,/-3,0 (м, 2H); 3,25 (с0, 5Н); 4,9-5,25 (м, 1H); /,35 (АВ кв., АН, J 9 Гц); 8,50 (с., 1Н); 8,90 (со, 1Н).
Пример 2. (2-амино- -4-ОКСИ-5,6, /,8-тетрагидропиридо- „ 2,З-d -пиримидин-6-ил)этилТбензоил|- -L-глутаминовая кислота
Диэтиловый эфир (2-ацет- амидо-4-окси-5,6,7,8-тетрагидропиридо 2,3-сГ пиримидин-6-ил) этил бензоилЧ -L-глутаминовой кислоты гидролизуют по примеру 1-е
Получают предлагаемое соединение, названное 5,10-дидеаза-5,6,/,8-тетра- гидрофолиевой кислотой0 Выход 87%, ТоПЛо свьше 250 СOj
ЯМР (ТФА) Ј, рртГ 1,7-3,9 (м., 13Н); 5,0-5,25 (мГ, 1К); /,45; 7,85 (АВ квс, 4Н, J 9 Гц).
Пример Зо N-Ј4- 1-(2-амино- -4-ОКСИ-5,6,7,8-тетрагидропиридо- {j2,3-d пиримидин-6-ил) проп-2-шГ{бен- зоил -L-глутаминовая кислота0
Гомогенному раствору 1/,5 мг ди- этилового эфира (2-ацетами- до-4-окси-5,6,7,8-тетрагидропиридо- 2,3-dJпиримидин-6-ил npon-2-miJ бен- зоилу-Ь-глутаминовой кислоты в 2 мл метанолового раствора гидроокиси натрия дают отстояться при комнатной температуре /2ч Большую часть растворителя затем отгоняют при понижен- ном давлениис Смесь разбавляют водой и подкисляют уксусной кислотой. Осадок собирают фильтрацией, промывают водой и сушат при пониженном давлении (0,1 мм) в течение 48 ч с получением 9,7 мг (67%) предлагаемого соединения названного 5,10-дипеа а-Ю-метил- -5,6,/,8-тетрагидрофолиевой кислотой, т.шт. свыше 250 С„
ЯМР У, РРш: 0,8/-0,88 (ш„с„, 1Н каждый); 1-2,8 (м., 11Н); 3,13 (м„, 1Н); 4,59 (м., 1Н); 6,96 (д., 2Н, J 9 Гц); /,34 (д., 2Н, J 9 Гц),
Пример 4 о Диэтиловый эфир N-f4- 2-(2-пивалоиламино-4-гидрокси -5,6,/,8-тетрагидропиридо Ј2,3-dJ пи- римидин-6-ил этил бензоил -L-глута- миновой кислотыо
Смесь 0,59 г диэтилового эфира N-|4-(2-пивалоиламино-4-гидрокси- пиридоЦ2,3-dJ пиримидин-6-илэтинил)- бензоил}-Ь-глутаминовой кислоты и 1,5 г 5% палладия на угле в 30 мл трифторуксус.ной кислоты гидрируют при 3,7 ат и комнатной температуре в течение 24 ч„ Реакционную смесь разбавляют хлористым метиленом и фильтруют через целит. Растворитель удаляют при пониженном давлении Остаток вновь растворяют в хлористом метилене, экстрагируют насыщенным раствором бикарбоната натрия и сушат над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют при пониженном давлении Остаток хроматографируют на силикагеле использованием в качестве элюента смеси 4% метанола в хлористо метилене о
После испарения элюата получают 0,6 г (100%) диэтилового эфира N-Г4- 2-(пивалоиламино-4-гидрокси- -5,6,/,8-тетрагиДропиридо 2,3-dj пири мидин-6-ил) этшЛбензоилТ-Ь-глутами- новой кислоты в виде белого вещества ТоПЛс 250°С(
ЯМР (CDCl}, 300 МГц)и , ррт: 1,22 (т., ЗН, J /,2 Гц); 1,29 (с„, 9Н); 1,3 (т., ЗН, J 7,2 Гц); 1,61-3,35 (м., 13Н) ; 4,11 (KO, 2H, J 7,2 Гц) 4,23 (кс, 2Н, J 7,2 Гц); 4,/7-4,84 (MO, 1Н); 5,15 (уш.с, 1Н); /,17 (д., 1Н, J 7,5 Гц); 7,23 (д., 2Н, J 8,1 Гц); 8,56 (ушоС, 1Н)„
ИК (КВг), 3400; 3280; 2980; 1/35; 1630; 1570; 1460; 1390; 1350; 1310; 1200; 1155; 1025; 930; 800„
Вычислено, %: С 61,73; Н /,07; N 12.
С30Н37%°7
Найдено, %: С 44,56; Н 3,85; N Г/,3; Вг 24,38
Пример 5о Н- 4-Ј2-(2-амино- -4-ГИДРОКСИ-5,6,7,8-тетрагидропиридо 2,3-dJ пиримидин-6-ил) этшПбензошЛ - -L-глутаминовая кислота
Раствор, содержащий 0,53 г диэтилового эфира (2-(2-пивалоиламино-4-гидрокги-5,6, /,8-тетрагндропи- ридо 2 , З-dJпирит-шлин-б-нл) этшмбец- зоил -1-глутаминовой кислоты и 3 мл 1 Но раствора гилроксида натрия в 50 мл метанола, перемешивают /О ч при комнатной температуре. Смесь подкисляют уксусной кислотой Образовавшийся осадок отфильтровывают и промывают метанолом0
После высушивания при пониженном давлении получают 0,2 г (50%) N-J4- 2-(2-амино-4-гидрокси-5,6,7,8- -тетрагидропиридо 2, 3- 1 пиримидин-6- -ил)-этил1 бензоил -1,-глутаминовой кислоты с указанными свойствами,,
Пример 6„ Смесь 1 г диэтило вого эфира N- |4-(2-( 2-ацетамидо-4- -гидрокси-5,6,/,8-тетрагидропиридо 2, З-сПпиримидин-6-ил) этил -бензоил( -L-глутаминовой кислоты и Н80 мг d ( + ) - Ю -камфорсульфоновой кислоты в 50 мл безводного этанола кипятят 4 ч„ Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и оставляют на ночь Образовавшееся белое вещество отделяют фильтрованием,
Шестикратной дробной кристаллизацией из этанола получают 3/ мг диас- тереомера В d (+)10-клмфорсульфонат диэтилового эфира М-{4- 7-(2-ацетами до-4-гидрокси-5, 6, /,8-тетрагидропиридо Г2, 3 иримидин-6-ил) -этшЛбен- зоилj-L-глутаминовой кислоты, т„пл0 223-225°С,
№„Ј
Из маточного раствора испарением удаляют растворитель. Полученное твердое вещество дважды перекристал- лизовывают из этанола
Получают диастереомер В d (+)-10- камфорсульфоната диэтилового эфира (2-аиетамидо-4-гидрокси -5,6,7,8-тетрагидропиридо Ј2,3-djnnpH мидин-6-ил этил бензоилТ--L-глутаминовой кислоты MS, „ДА- -29,35°,
Пример 1, Диастереомер В N-|A- 2-(2-aMHHo-4-rHflpoKCH-5,6,7,8- -тетрагидропиридо 2,3-dJnnoHMHflHH-6- -ил)этилJбeнзoилy-L- лyтaминoвoй кисло ты „
Раствор диастереомера В d (+)-10- камфорсульфоната диэтилового эфира (2-ацетамидо-4-гидрокси- -5,6,7,8-тетрагидропиридо 2,3-dlnHpH- мидин-6-ил) этил бенэоилЯ-L-глутаминовой кислоты в 50 мл метанола, содержащего 3 мл 1 н. раствора гидроксида,
5
перемепинают /2 ч при комнатной температуре с образованием нлтрнгпой соли диастереомера В N-J4-j 2-(2-aMH- но-4-гидрокси-5 6,1,8-тетрагилропи- J ридо 2, 3-(-П пиримиднн-6-ил) зтилПбеп- зоилб-L-глутаминовой кислоты.
Добавляя 2 мл уксусной кислоты с последующим центрифугированием, по- Q лучают свободную кислоту, т, пл„ 224-22/°С (раэло),
Мб&Ои -21,0581° (с 0,636, 0,1 н„ №ЮН),3
Ъмак 2/8; 222 нм,
ЙМР (CDC13) ( , ppm: 1,85 (м„, 2Н); 1,98 (MO, 1Н); 2,25 (м,, 1Н); 2,45 (м., ПО; 2,68 (м„, 1Н); 2,92 См., 5Н); 3,25 (т., 1Н, J 10 Гц); 0 3,82 (д„, Н, J 10 Гц);5,13 (м., 1Н); 7,43 (д., 2Н, J 9 Гц); /,84 (д., 2Н, J 9 Гц)э
Оптическая чистота 9/%0 Пример 8 Дилстереомер А 5 м-{4- 2-(2-амино-4-гидрокси-5,6,7,8- -тетрагидропиридо L2,3-dJnHpHMHflHH- -6-ил)этшт бeнзoил|-L-г.rryтaминoвoй
КИСЛОТЫо
По методике примера 7, но с исполь0 зованием диастереомера A d (+)-10- камфорсульфоната диэтилового эфира N- Г4- Ј2-(2-ацетамидо-4-гидрокси- -5,6,/,8-тетрагидропиридо 2,3-dJnn- римидин-6-ил) этил бeнзoилy-L-глy тамиc новой кислоты, вместо диастереомера В получают диастереомер A N-|4- 2- -(2-ЛМИНО-4-ГИДРОКСИ-5,6,7,8-тетрагидропиридо 2,3 пиримидин-6-ил)- этил бензоил)-L-глутаминовой кислоты,
0 т0шк 253-255 С (раэЛоК
(od)||q +31,0915° (с 3,605, 0,1н, NaOH) АМЗКС 2/8; 222 нм„
ЯМР (CDC1,) 8, ррп: 1,85 (м.,2Н); 1,98 (мэ, 1Н); 2,25 (м„, 1Н); 2,45
5 (м., 1Н); 2,68 (Мо, 1Н); 2,92 (м., 5Н); 3,25 (т, 1Н, J 10 Гц); 3,82 (д.. 1Н, J 10 Гц); 5,13 (м.. 1Н); 7,43 (До, 2Н, J 9 Гц); 7,84 (д., 2Н, J 9 Гц)о
0 Оптическая чистота 97%„
Пример 9. В 40 мл воды (рН примерно 5) суспендируют 10 г N-{4-Г2-(2-амино-4-гидрок си-5,6,7,8- -тетрагидропиридо 2,3-d J пиримидин5 -6-ил)этил1бенэоилТ-L-глутаминовой кислоты (диастереомер В)в К получен ной суспензии по каплям при перемешивании прибавляют 8 мл 5 и водно раствора гилроксида натрия и эатем
1 н„ раствор гидроксида натрия в воде до момента перехода твердого вещества в раствор (примерно 3,5 мл), рН полученного раствора около 8„ За- тем добавляют 50 мл метанола0 Раствор оставляют на ночь в холодильнике Образовавшийся осадок отделяют фильтрованием, промывают небольшим количеством холодного металла После вы- сушивания при комнатной температуре в вакууме получают динатриевую соль диастереомера В М-|4-Ј2-(2-амино- -4-гидрокси-5,6,7,8-тетрагидропири- до 2,3-cf пиримзодин-6-ил) этшубензо- илТ-Ь-глутаминовой кислоты (8,1 г), ИК (КВг), 3440-3120; 1640; 1620; 1600; 1548; 1504; 1402; 1368; 1310 см 1,
ЯМР (DZ0, 300 МГц)Ј, ppin: 7.76 (д„, 2Н, J 6 Гц); 4,32 (к„, 1Н, J 9 Гц); 3,33 (к„, 1Н, Гц,2 Г 2,95 (к., 1H, J 11,9 Гц); 2,75 (м„, 2Н); 2,55 (к., 1Н, J 11 Гц, 3 Гц); 1,2 (т., 2Н, J 7 Гц); 2,17 (м0, 1Н); 2,14 (м., 2Н); 1,76 (м„, 1H); 1,68 (MC, ЗН)о
Вычислено, %: С 46,58; Н 5,4; N 12,93.
С2« HjjNjOjNa 2
Найдено, %: С 45,98; Н 5,2; N 12,4.
Проведены биологические испытания полученных соединений„
Значения ИК л., определенные на полноклеточных линиях клеток лейкемии человека (CCRF-CEM), для диастереомера А 5,5-конфигурации и диастереомера В И,5 конфигурации равны 2, 3,4-Ю мкг/мл соответственно 0
В подмышечную область мышей линии C57BL/G подкожно имплантируют клетки мелономы В-16„ Для испытания каждой дозировки используют по десять мышей Ежедневно мышам внутрибрюшинно вводя N-f4-Ј2-(2-амино-4-гидрокси-5,6,7,8- -тетрагидропиридо 2,З-dJ пиримндин- -6-ил)этил бензоил -L-глутаминовую кислоту, диастереомер А и диастерео- мер В. Через десять дней определяют массу опухоли контрольных зверьков, получивших только разбавитель, и для подсчета процента ингибирования сравнивают ее с массой опухоли зверьков, получивших испытуемое соединение.
Полученные результаты приведены в табло 1 о
г 5
0 ; «
0
5
0
5
5
10 женских особей мышей линии СЗН заражают внутрибрюшинно в подмышечную область клетками лимфосаркомы 6C3HED Затем в течение 8 дней им вводят испытуемое соединение в эмульфоре 1Р (0,5 мл). Контрольные зверьки подвергаются аналогичной обработке, но не получают испытуемого соединения (см„ табл0 2)о
Мышам линии СЗН имплантируют клетки аденокарциномы СЭН молочной железы, после чего им вводят испытуемое соединение, контрольные зверьки получают только разбавитель (см табл0 3)
Мышам линии СЗН имплантируют клетки миэломы Х5563 клеток плазмы, после чего внутрибрюшинно (0,6 мл/день) в эмульгаторе ежедневно в течение 10 дней им вводят испытуемое соединение, контрольные зверьки получают только разбавитель (см„ табл„ 4)„
В обычных моделях указанные опухолевые клетки имплантируют подкожно в подмышечную область мышей После внутрибрюшинного ведения измеряют длину и ширину опухоли у животных, получающих испытуемое соединение, и контрольной опухоли (только физиологический раствор), чтобы вывести процент ингибирования (табло 5)о
Проведенные испытания показали, что производные пиридо| 2,3- пирими- дина, полученные по предлагаемому способу, эффективны против различных опухолей и ингибирутот в отличие от метотрексата действия трансформилазы глицинамидного рибонуклеотида (САР- трансформиланд) в ходе de novo биосинтеза пурина„ Такими же свойствами обладает Na-соль этого соединения.
Кроме того, производные пиридо- (2,З-d)пиримидина, полученные согласно предлагаемому способу, относятся к категории малотоксичных соединений Формула изобретения
Способ получения производного пиридо 2,З-d пиримидина формулы
ОН
N YYCH2CH HOH2N 1 N
«н
-CONHCHCH7CH9COOH ,
1 L l
COOH
или его SS-, RS-изомеров, или смеси диастереомеров, или фармацевтически приемлемых солей со щелочными металОН5
l Y v-CH2CH2 - - CONH R,HN NN
Hю
где R - низший алканоил;
RS Cf-Cg-алкил, подвергают гидролизу или гидрогено- лизу с последующим вьщелением целе
лами, отличающийся что соединение общей формулы
ТГМ ,
вого продукта в виде SS-, RS-изомеров или смеси диастереомеров, или фармацевтически приемлемьк солей со щелочными металлами
Таблица 1
Непрерывно вливают (2 мл/день) 1% NaHC03 ежедневно в течение 5 дней,
I
20
59
93
Токсична
0,62 1,25 2,50 5,00
Внутрибрюшинно (0,5 мл/день) в мульфоре ежедневно в течение 10 дней
5/5 6/6 6/6 0/6
Внутрибрюшинно (0,5 мл/день) в эмульфоре, дни 1, 3, 5, 7и9
50 100 200 400
Внутрибрюшинно (0,6 мл/день) в эмульфоре, только в 1,3,5,7 и 9 день
Таблица 3
(2 мл/ден течение 5
5/5 6/6 6/6 0/6
10/10 10/10 10/10 8/10
Т а б л и ц а 4
Таблица 5
Аденокарцинома молочной железы СЗН
Легочная карцинома льюиса
Яичниковая карцинома
5-дневная задержка, Токсичная доза.
Продолжение табл.5
100 100
10 10
| Шредер Э„, Любке К | |||
| Пептиды - М.: Мир, 196/, ч„1, с„ 112. |
