Способ получения производных 4(3Н)-оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридо(2,3- @ )пиримидина или их таутомерных форм Советский патент 1990 года по МПК C07D471/04 A61K31/519 A61P35/00 

Изоб,ретение относится к способу получения новых производных пиридо 2,3-3 пиримидина, обладающих фармакологической активностью и которые могут найти применение в медицине.

Цель изобретения - способ получения новых производных пиридо 2,З-dЗ пиримидина, обладающих более высокой противоопухолевой активностью.

Пример 1. Диэтиловый эфир N-f4- (2-ацетамидо-4(ЗН)-оксопиридо 2,З-d пиримидин-6-илметил)ами но бензоил глутаминовой кислоты.

При комнатной температуре в течение 5 ч выдерживают смесь 800 мг 2-ацетамидо-6-формил-4 (ЗН)-оксопири- ,З-d пиримидина в смеси 55 мл ледяной уксусной кислоты и 1,2 г диэти- лового эфира п-аминобензоил-1,-глута- миновой кислоты. Затем к смеси добавляют 0,19 мл борогидридно-триэтилами- нового комплекса. Смесь перемешивают

ы

в течение 40 мин при комнатной температуре и затем выдерживают при 60 С в течение 10 мин. Реакционную смесь охлаждают и концентрируют в вакууме. Полученный остаток растворяют в 90 мл метанола и раствор фильтруют. Остаток на фильтре промывают 20 мл метанола и 360 мл диэтилового эфира. Фильтраты объединяют и упаривают до- суха. Остаток пропускают через колонку с силикагелем (97:3 хлороформ:метанол) и получают 1,08 г диэтилового эфира N-Ј4- N (2-ацетамидо 4(ЗН)ок- сопиридо 2,3-d пиримидин-6-илметил ) амино бенэоил}-Ь глутаминовой кислоты,

П р и м е р 2. Диэтиловый эфир - (2-ацетамидо-4(ЗН)-оксо-З,6, 7,8--тетрагидропиридо 2,3-д пиримидин- 6-илметил)амино Збензоилl-L-глутамино- вой кислоты.

Смесь 340 мг диэтилового эфира N-f4- N -(2-ацетиламино-4(ЗН)-оксо- пиридо 2,З-d пиримидин-6-илметил)ами- но бензоил l-L-глутаминовой кислоты в 80 мл метанола и 40 мл ледяной уксусной кислоты помещают в сосуд гидрогенизации (Адамса). Добавляют 55 мг катализатора (окись платины) и смесь гидрируют при 4,2 атм (60 фунтов /кв.дюйм) и комнатной температуре в течение 15 мин. Катализатор отфильтровывают и фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток пропускают через колонку с силикагелем, используя в качестве элюирующего растворителя смесь хлороформа и метанола (97:3- 95,5:5), и собирают фракции по 20 мл Фракции 62-73 содержат побочный про- дукт-2-ацетиламино-6 метил-4(ЗН)-ок- сопиридо 2,3 пиримидин. Фракции 74-88 содержат 15,4 мг целевого продукта диэтилового эфира N-Ј4- N -(2- ацетиламино-4(ЗН)оксо-5,6,7,8-тет- рагидропиридо 2,З-d пиримидин-6-илметил) амино бензоил j-L-глутаминовой кислоты.

П р и м е р 3. N-((2-aue- тамидо-4(ЗН)-оксо-5,6,7,8-тетрагидро- пиридо 2,З-d пиримидин-6-илметил) амино бензоилt-L-глутаминовая кислота.

В 8 мл метанола растворяют 20 мг диэтилового эфира N-{4-ЈN -(2-аце- тиламино-4(ЗН)-оксо-5,6,7,8-тетрагид ропиридо 2,З-d пиримидин-6-илметил) амино бензоил .V-L-глутаминовой кислоты и добавляют 0,4 мл 1 н. водного

5

0

5 .Q

с

5

едкого натра. Смесь перемешивают при комнатной температуре 96 ч и затем добавляют 0,1 мл ледяной уксусной кислоты. Метанол удаляют в вакууме и полученный остаток растворяют в 5 мл воды. Эту смесь подкисляют 0,16 мл ледяной уксусной кислоты и полученное твердое вещество отделяют фильтрованием, получают 6,0 мг продукта -(2-ацетамидо-4(ЗН)- оксо-5,6, 7,8-тетрагидропиридор, З-d пиримидин-6-илметил)амино бензоил|- L-глутаминовой кислоты.

П р и м е р 4. Диэтиловый эфир .4- JN -(2-ацетамидо-4 (ЗН)-оксопири- ,З-d}пиримидин-6 илметил)-Ы -фор- миламино бензоил глутаминовой кислоты,

В течение 2 ч при 25°С перемешивают смесь 25 мл 98%-ной муравьиной кислоты и 4,9 мл (5,25 г,51,5 ммоль) уксусного ангидрида. К полученному раствору добавляют 2,43 г (4,5 ммоль) диэтилового эфира (2-ацета- мидо-4(ЗН)-оксопиридо 2,З-d пирими- дин-6-илметил)амино бензоилj-L-глутаминовой кислоты. Эту смесь перемешивают при 55 С в течение 15 мин и при 25 С 1 ч. Растворитель отгоняют при пониженном давлении и остаток растирают с диэтиловым эфиром. Твердый остаток отфильтровывают и перекристал- лизовывают из изопропанола, получают 2,0 г (78%) диэтилового эфира N-{4- М;-(2-ацетамидо-4(ЗН)оксопиридо 2, 3 пиримидин-6-илметил) - формил- амино бензоил(глутаминовой кислоты, т.пл: 180-182°С.

Спектр ПМР : 1,05- 1,23 (м., 6Н); 1,95-2,10 (м., 2Н); 2,16 (с., ЗН); 2,49 (т., IH, J 7,36 Гц); 3,97-4,10 (м., 4Н); 4,36- 4,39 (м. 1Н); 5,24 (м., 2Н); 7,51- 7,54 (м., 2Н, АА ВВ 0}7,84-7587 (м., 2Н, АА ВВ ); 8,21 (м., 1Н); 8,82 (с., 1Н).

Вычислено,%: С 57,24; Н 5,34; N 14,83.

47H3oN6°«Найдено,%: С 56,94; Н 5,11;

N 14,57.

П р и м е р 5. Диэтиловый эфир -(2-пивалоиламино-4(ЗН)ок- сопиридо 2,3 d пиpимидин-6-илмeтил)- N1-формиламино бенэоил1глутаминовой кислоты.

Аналогично примеру 4, используя диэтиловый эфир (2-пивалоил15

20

амино-4(ЗН)-оксопиридо 2,3-с1 пирими-6-илметил)-Ы -формиламинс бензоил j-Lглутаминовой кислоты,

В течение полутора часов в атмосфере водорода при давлении 2,8 атм . (40 фунтов/кв.дюйм) встряхивают смесь 0,743 г (0,36 ммоль) диэтилово- го эфира N-f4-ЈN г-(2-ацетамидо- 4(ЗН)-оксопиридо 2,3-d Зпиримидин-6- Ю илметил)-М -формиламшго /бензоил J-L- глутаминовой кислоты и 230 мг окиси платины в 75 мл смеси этанола и уксусной кислоты (2:1). Реакционную смесь фильтруют через цеолит и фильтрат сначала упаривают при небольшом пониженном давлении, а затем при высоком вакууме, поддерживая по возможности наиболее низкую температуру. Остаток растворяют в метилен- хлориде и пропускают через хромато- графическую колонку с хроматотроном, используя в качестве элюирующего растворителя 5%-ный раствор метанола в метиленхлориде; в результате полу- чают 0,684 г (93%) диэтилового эфира (2-ацетамидо-4(ЗН)-оксо-5, 6,7,8-тетрагидропиридо 2,З-d}пири- мидин-6-илметил)-К -формиламино бен- зоилJ-L-глутаминовой кислоты, т.пл. 188-190°С.

Спектр ПНР (Ые280 - d ) f: 2,08 (с., ЗН); 2,42 (т., 2Н, J 7,46 Гц), 2,78-2,91 (м., IH); 3,09-3,19 (м., 1Н); 3,89 (д., 2Н, J 5,98 Гц); 3,99-4,12 (м., 4Н); 4,42 (м., 1Н); 6,64 (м., 1Н); 7,51-7,54 (м., 2Н, АА ВВ1); 7,91-7,94 (м., 2Н, АА ВВ ); 8,61 (с., 1Н); 8,74 (д., IH, J 7,32 Гц).

Повторно хроматографируют центральные фракции. После удаления растворителя пробу растирают диэтиловым эфиром и твердое вещество собирают.

Вычислено,%: С 56,83; Н 6,01; 45 N 14,73.

дин-6-илметил)амино бензол j-L-глута- миновой кислоты, получают предлагав- мое соединение.

Спектр ПНР (Me2SO-d6) сГ : 1,09- 1,16 (м., 1Н); 1,21 (с., 9Н); 1,90- 2,10 (м., 2Н); 2,39 (т., 2Н, J 7,37 Гц); 3,96-4,09 (м., 4Н); 4,31-4,43 (м., 1Н); 5,22 (с., 2Н); 7,50-7,53(АА ВВ ,2Н); 7,83-7,86 (АА ВВ );.8,21 (м., 1Н); 8,71 (д..1Н, J 5,87 Гц); 8,72 (м., Ш); 8,80 (с., 1Н).

П р и.м е р 6. Диэтиловый эфир N- 4-C.N -(2-пивалоиламино-4(ЗН)-ок- сопиридо 2, 3 2пиримидин-6-илметил)- N -ацетиламино бензоил}глутаминовой кислоты.

К перемешиваемой суспензии 0,65 г диэтилового эфира N-{4- Nг-(2-пи- валоиламино-4(ЗН)-оксопиридо 2,3-d J пиримидин-6-илметил)аминоj6eH3onnj глутаминовой кислоты (1,1 ммоль) и 0,22 г (2,2 ммоль) бикарбоната калия в 10 мл метиленхлорида, охлажденной, до 0-5°С, добавляют 0,097 г (1,2 ммоль) ацетилхлорида. Реакционную смесь перемешивают при 0-5°С в течение 10 мин и затем дают ей возможность принять комнатную температуру. После перемешивания в течение 45 мин при комнатной температуре добавляют 50 мл .мети- ленхлорида. Смесь экстрагируют последовательно трижды (порциями по 25 мл) водой, насыщенным раствором бикарбоната натрия и вновь водой. Водные экстракты объединяют и экстрагируют 50 мл метиленхлорида. Органические экстракты сушат безводным сульфатом магния и фильтруют, растворитель отгоняют при пониженном давлении. В результате получают 0,7 г диэтилового эфира N- N -(2-пивалоил- амино-4(ЗН)-оксопиридо 2,3 пирими- дин-6-илметил)-К -ацетиламино бензо- ил}глутаминовой кислоты.

30

35

40

C27K34NtO

lUj

Найдено,л: С 56,60; Н 5,90; N 14,43.

Спектр ПМР (Me2SO - d ) , J1 : 1,10- 1,17 (м., 6Н); 1,22 (с., 9Н); 1,88 (с., ЗН); 1,88-2,13 (м., 2Н); 2,40 (т., 2Н, J 7,46 Гц); 3,97-4,08 (м., 4Н); 4,30-4,42 (м., 1Н); 5,02 (с., 2Н 7,34-7,66 (АА ВВ f,2K); 7,83-7,86 (АА ВВ ,2Н); 8,19 (м., 1Н); 8,64 (м., Ш); 8,75 (д., Ш, J 7,39 Гц).

Пример. .Диэтиловый эфир Оя-(2-ацетамидо-4(ЗН)-оксо-5,6, 7,8-тетрагидропиридо 2,З-d пиримидин15

Ю

20

Ю

Ю

30

35

40

C27K34NtO

lUj

Найдено,л: С 56,60; Н 5,90; N 14,43.

Пример8. Диэтиловый эфир К- - - -пивалоиламино ьО-оксо- 5,6,7,8-тетрагидропиридо 2,З-d}пири- мидин-6-илметил)-К -формиламино J6en- зоил -L-глутаминовой кислоты.

Этот продукт получают аналогичным образом путем восстановления диэтилового эфира N-Ј4- N -(2-пивалоиламино- 4(ЗН)-оксопиридо 2,3-d}пиримидин-6- илметил)-Ы -формиламино бензоил1глу таминовой кислоты, т.пл. 152-153°С.

ИК--спектр (КВг)Д см- 3369 и 3250 (NH), 1732, Г637, 1605 ().

Спектр ПНР ( - dfr), Г : 1,12 1,2 (м., 6Н); 1,17 (с., 9Н); 1,90- 2,18 (м., АН); 2,43 (т., 2Н, J 7,4 Гц); 2,80-2,94 (м., Ш); 3,12- 3,20 (м., 1Н); 3,86 (д., 2Н, J - 5,59 Гц); 4,0-4,11 (м., АН); 3,90- 4,47 (м., 1Н); 6,40 (м., 1Н); 7,52- 7,55 (АА1 ВВ ,2Н); 7,92-7,94 (АА ВВ ,

2Н); 8,62 (с., Ш); 8,75 (д., 1Н, J 7,33 Гц).

Найдено,%: С 58,53; И 6,60; 13,61.

N

C3(H40NtO(,

20

25

Вычислено,%: С 58,81; Н 6,58, N 13,72.

П р и м е р 9. Диэтиловый эфир N-{4- N -(2-пивалоиламино-4(ЗН)-ок- со-5,6,7,8-тетрагидропиридоГ 2,3-d J пиримидин-6-HnMerrmi)-N -ацетиламино бензоил1-Ь-глутаминовой кислоты.

К раствору 0,64 г (1,03 ммоль) диэтилового эфира -(2-пи- валоиламино-4 (ЗН) -оксопитэидо 2,3-d пиримидин-6-илметил)-Ы -ацетиламино бензоилj-L-глутаминовой кислоты в 40 мл ледяной уксусной кислоты добавляют 96 мг окиси платины. Суспензию встряхивают в атмосфере водорода (3,2 ати; 45 фунтов/кв.дюйм) в течение 2,5 ч, смесь разбавляют 100 мл метиленхлорида и фильтруют через цеолит для удаления катализатора. Фильт- 35 рат упаривают при пониженном давлении, и остаток растворяют в 100 мл метиленхлорида, экстрагируют дважды (по 75 мл) насыщенным раствором би30

Диэтиловый эфир (0,092 г, 0,16 ммоль N-{4- N -(2-ацетамидо-4(ЗН)-оксо-5,6, 7,8-тетрагидропиридо (2,3 }пиримидин- 6-илметил)-Н -формиламино бензоил V- L-глутаминовой кислоты в 10 мл 0,25 н. водного раствора едкого натра перемешивают при 25 С в течение 72 g и затем воду упаривают при пониженном давлении. Остаток растворяют в 15 мл воды, раствор охлаждают до О С и подкисляют уксусной кислотой. Твердое вещество собирают фильтрованием спустя 30 мин и получают 0,046 г (60,5%) (2-амино-4(ЗН)-ок- со-5,6,7 9 8-тетрагидропиридо 2,3-d J пиримидин-6-илметил) -формиламино бензоилУ-L-глутаминовой кислоты.

Спектр ПМР ( - dt) Л1 : 1,81- 2,2 (м., АН); 2,33 (м., ЗН); 2,73 (м., 1Н); 3,1 (м., Ш, 3,85 (м., 2Н); 4,39 (м., 1Н); 6,2 (м., 1Н); 7,49- 7,51 (м., 2Н, АА ВВ ); 7,90-7,93 (м., 2Н, АА ВВ ); 8,59-8,62 (м., 2Н).

Аналогично описанному 200 мг диэтилового эфира N -Ј4- Ы-(2-пивал- оиламино-4(ЗН)-оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридо 2,3-d .Зпиримидин-6-илметил)45

карбоната натрия. Водные слои повтор-40 N -ацетиламино}бензоилJ-L-глутамино-.

вой кислоты перемешивают в течение 72 ч в 5 мл 0,2 н.гидроокиси натрия. Реакционную смесь нейтрализуют 0,5 н. соляной кислотой, охлаждают до 0°С, образующееся твердое вещество собирают, фильтрованием, получают N-Ј4- N - (2-амино-4(ЗН)-оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридо 2,З-d}пиримидин-6-илме- тил)-К -ацетиламино бензоил j-L-глу- таминовую кислоту.

Пример 11. М-{4- Ы -(2-ами- но-4(ЗН)-оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридо 2, З-d пиримидин- -6-илметил) -N - формиламино бензоил l-L-глутаминовая кислота.

Раствор 20 мг (2-амино- 4(ЗН)-оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридо С2, 3 пиримидин-6-илметил)-амино J бензоил }-Ь-глутаминовой кислоты в

но экстрагируют 75 мл метиленхлорида, органические слои объединяют и сушат безводным сульфатом магния. После удаления осушающего агента фильтрованием растворитель отгоняют при пониженном давлении, получают 0,54 г (84%) диэтилового эфира N- - (2-пивалоиламино-4(ЗН)-оксо-5,6,7,8- тетрагидропиридоЈ2,3 3пиримидин-6- илметил)-и -ацетиламино бензоил глутаминовой кислоты, которую дополнительно очищают перекристаллизацией из этилацетата, т.пл. 120-123 С.

Спектр ПМР ( - df) f : 1,06- 1,19 (м., 6Н); 1,16 (с., 9Н); 1,82 55 (с., ЗН); 1,84-2,17 (м., 6Н); 2,42 (т., 2Н, j 7,40 Гц); 2,80-2,94 (м., Ш); 3,17-3,23 (м., Ш); 3,68 (д., 2Н,

50

0

5

0

5

5

0

J 5,59 Гц); 3,98-4,10 (м., 4Н); 4,39-4,45 (м., 1Н); 6,33 (с., Ш); 7,43-7,46 (АА ВВ, 2Н); 7,90-7,93 ХАА ВВ , 2Н); 8,79 (д., 1Н, J 7,33 Гц).

Пример 10. N-{-4- N(-(2-aMH- но-4(ЗН)-оксо-5,6,7,8-тетрагидропи- ,3 пяримидин-6-илметил)-К - формиламино бензоилj-L-глутаминовая кислота.

Диэтиловый эфир (0,092 г, 0,16 ммоль) N-{4- N -(2-ацетамидо-4(ЗН)-оксо-5,6, 7,8-тетрагидропиридо (2,3 }пиримидин- 6-илметил)-Н -формиламино бензоил V- L-глутаминовой кислоты в 10 мл 0,25 н. водного раствора едкого натра перемешивают при 25 С в течение 72 g и затем воду упаривают при пониженном давлении. Остаток растворяют в 15 мл воды, раствор охлаждают до О С и подкисляют уксусной кислотой. Твердое вещество собирают фильтрованием спустя 30 мин и получают 0,046 г (60,5%) (2-амино-4(ЗН)-ок- со-5,6,7 9 8-тетрагидропиридо 2,3-d J пиримидин-6-илметил) -формиламино бензоилУ-L-глутаминовой кислоты.

Спектр ПМР ( - dt) Л1 : 1,81- 2,2 (м., АН); 2,33 (м., ЗН); 2,73 (м., 1Н); 3,1 (м., Ш, 3,85 (м., 2Н); 4,39 (м., 1Н); 6,2 (м., 1Н); 7,49- 7,51 (м., 2Н, АА ВВ ); 7,90-7,93 (м., 2Н, АА ВВ ); 8,59-8,62 (м., 2Н).

Аналогично описанному 200 мг диэтилового эфира N -Ј4- Ы-(2-пивал- оиламино-4(ЗН)-оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридо 2,3-d .Зпиримидин-6-илметил)0,5 мл 97%-ной муравьиной кислоты нагревают при 90 С в течение 1 ч. Растворитель отгоняют при пониженном давлении и остаток растирают с диэтиловым эфиром. Твердое ве- шество собирают фильтрованием, получают 17 мг N-{4- N -2-амино-4(ЗН)- (оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридо-6-ил- метил)- -формиламиноj6eH3oan j-L- глутаминовую кислоту, которую дополнительно очищают, растворяя в О,1 н. едком натре, и осаждают добавлением ледяной уксусной кислоты.

10

формиламино бензоил1глутаминовой кислоты.

Диэтиловый эфир (1,44 г, 2,4 ммоль) N - (2-пивалоилами- но-4(ЗН)-оксо-5,6,7,8-тетрагидропири ,З-d пиримидин-6-илметил)-N -фор миламино бенэоилj-L-глутаминовой кис лоты растворяют в 1 н. едком и раствор перемешивают при 25°С в те чение 72 ч. Добавляют активированный уголь и суспензию перемешивают, филь руют. Фильтрат подкисляют ледяной уксусной кислотой и белый осадок coll р и м е р 12. №-Г4-См -(2-амино- 15 бирают фильтрованием спустя 30 мин

Iл Л

4(ЗН)-оксо-5,6,7,8-тетрагндропиридо 2,З-d пиримидин-6-илметил)амино}бен- зоилj-L-глутаминовая кислота.

К 32 мл 5%-ного раствора хлористого водорода в метаноле (приготовленном разбавлением метанолом 2 мл концентрированной соляной кислоты до объема 60 мл) добавляют 0,717 г (1,3 ммоль) дизтилового эфира N-Г4О -(2-ацетамиго-4(ЗН)-оксо-5,6,7,8- тетрагидропиридоЈ2,3 пиримидин-6- илметил)-N -формиламино бензоил -Ь- глутаминовой кислоты (приготовленного в соответствии с примером 2). Реакционную смесь перемешивают при 45°С в течение 18 ч. После охлаждения реакционной смеси до 25°С добавляют 4 мл 6 н.едкого натра и смесь дополнительно перемешивают 72 ч при

20

25

30

после охлаждения до О С. Получают 0,87 г (84%) того же продукта, т.пл. (разложение )выше 198°С.

ИК-спектр (КВг) Лмо(кс , см- : 3460-2600 (NH и СООН); 1695, 1655 и 1600 (с-0).

Спектр ПМР (), f : 1,85- 2,02 (м., 6Н); 2,3 (т. 2Н, J 7,4 Гц 2,81-2,88 (м., IH); 3,23-3,32 (м.,2Н) 4,2-4,4 (м., 1Н); 5,92 (с. 2Н); 6,34 (т., IH, J 5,28 Гц); 6,55-6,57 (м.,

2н, АА ВВ ); 7,61-7,64 (АА ВВ , 2Н);

8,08 (д., IH, J 7,64 Гц); 9,7 (ши- рокий с., Н).

Пример 13. Готовят раствор (2-амино-4(ЗН)-оксо-5,6,7,8- тетрагидропиридо 2, 3 }шримидин-6-ил- метил)аминоЗбензоил -Ь-глутаминовой, кислоты в смеси 15% ацетонитрила

40

45

25°С. Раствор концентрируют при пони- 35 и 85% раствора 0,1%-ного триэтилами- женном давлении. Добавляют 20 мл и смесь подкисляют ледяной уксусной кислотой, добавляя ее по каплям. Смесь выдерживают 2 ч при 0°С, твердое вещество собирают и получают 0,485 г (88%) (2-амино-4(ЗН)- оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридо .2,3-d J пиримидин-6-илметил)амино}бензоил j -L-глутаминовой кислоты, т.пл. (разложение) 198 С.

Спектр ПМР (Me,SO - dЈ) : 1,86- 1,1 (м., 6Н); 2,31 (т., 2Н, J 7,2 Гц);ч2,8-2,86 (м., 1Н); 3,24-. 3,28 (м., 2Н); 4,2-4,4 (м., 1Н); 5,94 (с., 2Н); 6,29 (с., 1Н); 6,34 (т., IH, J 5,24 Гц); 6,56-6,58 (АА ВВ (,2Н); 7,62-7,65 (АА ВВ ,2Н); 8,06 (fl,,J 5,15 Гц); 9,7 (широкий с., Ш).

Этот продукт может быть получен гидролизом диэтилового эфира Ы -(2-пивалоиламино-4(ЗН)-оксопири- дидо 2,3 пиримидин-6-илметил)-К 50

55

на в уксусной кислоте (буферный рН 7,0) из расчета 1 мг глутаминовой кислоты на 1 мл растворителя. Этот раствор вводят в хроматографическую колонку 10 см Циклобонд 1 фазу, используя тот же растворитель. Устанавливают скорость потока 1,10 мл/мин с регистрацией УФ-спектра при 254 нм.

Первый диастереоизомер, существенно свободный от другого, получают с временем удерживания 45,58 мин (изомер А). Второй диастереоизомер, существенно свободный от первого, получают с временем удерживания 48,32 мин (изомером в).

Исследования показали, что предлагаемые соединения проявляют цитоток- сичность в клеточных культурах. Напри мер, по отношению к CCRF-CEM человеческим Т-клеткам, образующимся при лейкемии, установлены следующие значения (для нескольких образцов), представленные в табл.1,

формиламино бензоил1глутаминовой кислоты.

Диэтиловый эфир (1,44 г, 2,4 ммоль) N - (2-пивалоилами- но-4(ЗН)-оксо-5,6,7,8-тетрагидропири- ,З-d пиримидин-6-илметил)-N -фор- миламино бенэоилj-L-глутаминовой кислоты растворяют в 1 н. едком и раствор перемешивают при 25°С в течение 72 ч. Добавляют активированный уголь и суспензию перемешивают, фильтруют. Фильтрат подкисляют ледяной уксусной кислотой и белый осадок coл Л

0

5

0

после охлаждения до О С. Получают 0,87 г (84%) того же продукта, т.пл. - (разложение )выше 198°С.

ИК-спектр (КВг) Лмо(кс , см- : 3460-2600 (NH и СООН); 1695, 1655 и 1600 (с-0).

Спектр ПМР (), f : 1,85- 2,02 (м., 6Н); 2,3 (т. 2Н, J 7,4 Гц). 2,81-2,88 (м., IH); 3,23-3,32 (м.,2Н) 4,2-4,4 (м., 1Н); 5,92 (с. 2Н); 6,34 (т., IH, J 5,28 Гц); 6,55-6,57 (м.,

2н, АА ВВ ); 7,61-7,64 (АА ВВ , 2Н);.

8,08 (д., IH, J 7,64 Гц); 9,7 (ши- рокий с., Н).

Пример 13. Готовят раствор (2-амино-4(ЗН)-оксо-5,6,7,8- тетрагидропиридо 2, 3 }шримидин-6-ил- метил)аминоЗбензоил -Ь-глутаминовой, кислоты в смеси 15% ацетонитрила

и 85% раствора 0,1%-ного триэтилами-

на в уксусной кислоте (буферный рН 7,0) из расчета 1 мг глутаминовой кислоты на 1 мл растворителя. Этот раствор вводят в хроматографическую колонку 10 см Циклобонд 1 фазу, используя тот же растворитель. Устанавливают скорость потока 1,10 мл/мин с регистрацией УФ-спектра при 254 нм.

Первый диастереоизомер, существенно свободный от другого, получают с временем удерживания 45,58 мин (изомер А). Второй диастереоизомер, существенно свободный от первого, получают с временем удерживания 48,32 мин (изомером в).

Исследования показали, что предлагаемые соединения проявляют цитоток- сичность в клеточных культурах. Например, по отношению к CCRF-CEM человеческим Т-клеткам, образующимся при лейкемии, установлены следующие значения (для нескольких образцов), представленные в табл.1,

Эти соединения не являются ингибиторами дигидрофолат-редуктазы, следовательно, цитотоксичность соединений может быть изменена простым добавлением гипоксантина. Цитотоксич- ность истинных ингибиторов дигидрофолат-редуктазы в той же системе может быть изменена только одновременным добавлением гипоксантина и тими- дина.

Хотя соединения не являются ингибиторами дегидрофолатредуктазы, они проявляют значительную неопластическую активность при испытаниях на живых организмах. Это подтверждаг- ют представленные в табл.2 данные для N-(4-CN -(2-амино-4-(ЗН)-оксо-5, 6, 7,8-тетрагидропиридо.2,3-с1 пирими-. дин-6-илметил)амино бензоил}-Ъ-глута- миновой кислоты.

Такой высокий уровень антинеоплас- тической активности на живых тканях является весьма неожиданным при столь

0

низком уровне активности по отношению к дигидрофолат-редуктазе.

Что касается токсичности, то эти соединения по определению являются антиметаболитами и их терапевтический эффект основан на вмешательстве в ферментные превращения, В связи с этим указанные соединения являются потенциально токсичными, если их введение не будет тщательно контролироваться. Как видно из вышеприведенных данных, токсичность может быть уменьшена путем соблюдения дозировки. Более того, токсичность предлагаемых соединений значительно ниже, чем применяющегося в клинической практике метотрексата.

Формула изобретения

/ Способ получения производных

4(ЗН)-оксо-5,6,7,8-тетрагидропиридо-- (2,З-d)пиримидина общей формулы I

Изобретение касается гетероциклических веществ, в частности получение производных пиримидина. Новые соединения проявляют цитотоксичность в клеточных культурах, например к CCRF-CEM человеческим Т-клеткам, образующимся при лейкомии, при низком уровне по отношению к дигидрофлат-редуктазе. 2 табл.

R., - водород или группа R5CO-, в которой R g- водород или С ,,-С -алкил; означает L- конфигурацию относительно указанного атома углерода,

HNK

CH0-N-/ V- CONH-CH-CH-CHnCOORIЈ Ј О

COOR2

R. и имеют указанные значения;

R и R3 - одинаковые или различи являются С ,-С -алкилом;

R4 Са-С -алканоил,50

Rl

сн2- ъгсокн-сн-сн2сн2соонсоон

35

или их таутомерных форм, о т л и ч а- ю щ и и с я тем, что соединение об- щей формулы II

подвергают каталитической гидрогенизации с получением соединения общей формулы (На)

СОШ - СН - CH2CH2COOR3

COOR

2

где и имеют указанные знаТ а б л и ц а 2