Способ приготовления переживающих срезов пириформной доли мозга Советский патент 1991 года по МПК G01N33/48 A61B10/00 

Изобретение относится к области медицины, а именно к нейробиологии.

Целью является полное выделение миндалевидного комплекса пириформной доли мозга.

Способ осуществляют следующим образом.

Пириформная доля мозга включает в себя как часть миндалевидный комплекс, представляющий собой совокупность поверхностно расположенных структур обонятельной коры и глубинно расположенных ядер.

Для удаления этой части мозга предложен резец с емкостью в форме объемного образования - эллиптического параболоида, который позволяет получить в комплексе как обонятельную кору, так и глуббино-рас- положенные ядра миндалевидного комплекса.

После декапитации и извлечения мозга из черепа его располагают базальной поверхностью кверху. Устройством из пириформной доли мозга иссекают кусочек ткани, имеющий форму эллиптического параболоида с продольным размером, равным 5 мм. Иссечение проводят под углом 18-22° (оптимально 20°) к продольной оси мозга.

Иссеченный кусочек ткани помещают основанием на столик, имеющий охлаждение, и разделяют с помощью вибротома на срезы, толщина которых варьируется в пределах 220-350 мкм

Полученные срезы переносят в первую порцию инкубационной среды, в которой выдерживают 30 мин (преинкубация). В качестве инкубационной среды используют бикарбонатную среду Кребса-Рмнгерз, в состав которой входят следующие компоненты, ммоль л-1: NaCI 118, KCI 4,7; CaClz 2,5; КНРОд 1.2; MgS04 1,2; NaHCOa 25; глюкоза 10. Инкубационную среду при комнатной температуре насыщают газовой смесью, сою

с

о ч

ю

I

держащей 95% Оа и 5% СО2. С момента извлечения мозга из черепа до перемещения срезов в инкубационную среду должно пройти не более 5 мин,

Нейрофизиологические исследования проводят на срезах, которые после преинку- бации помещают в свежую порцию инкубационной среды (рабочая порция). Фиксацию срезов (устранение их смещения при перемещении инкубационной среды) обеспечивают с помощью помещения их между двумя нейлоновыми сеточками. Для исследования срезов используют комплекс устройств и приборов, предназначенных как для обеспечения длительного переживания срезов, так и регистрации электрической активности компонентов нервной ткани. Под контролем микроскопа к различным структурам миндалевидного комплекса вводят стеклянные микроэлектроды с диаметром кончика до 10-20 мкм. Регистрируют вне- vt внутри-клеточную активность и фокальные потенциалы в структурах палеокортекса (периамигдаляр- ная кора, ядро латерального обонятельного тракта) и ряда ядер миндалевидного комплекса (базомедиальное, медильное, кортикальное, базолатеральное, эндопири- формные). Полученные результаты характеризуют электрофизиологические ответы различных структур, а также их своеобразие, обусловленное взаимодействием различных образований миндалевидного комплекса, сохраняющих целостность и комплексность в составе срезов.

Морфологический контроль эффективности иссечения пириформной доли мозга и констатацию топографии введенного микроэлектрода осуществляют после завершения регистрации электрофизиологич еских ответов путем окрашивания срезов гистологическими методами (крезиловым фиолетовым и гематоксилином-эозином).

Изучение микропрепаратов показало, что способ, реализуемый с помощью специального устройства, обеспечивает изолиро

ванное выделение миндалевидного комплекса, а иссекаемые кусочки и срезы этого образования мозга полностью сохраняют свою структурную организацию.

Пример. Из мозга после выделения предлагаемым устройством иссекали под углом 20° к продольной оси мозга часть не более 5 мм . Предварительно делали разрез продольно с уровня перекреста зрительных трактов вдоль медильной границы комплекса. Далее режущую поверхность, находящуюся на переднем крае резца, приводили в сопрокисновение с поверхностью мозга так, чтобы основание резца, стоящего верти- кально, пришлось на уровень inclsura olfactorla. После этого резец погружали в ткань мозга на глубину выступа до 1,5 мм. Затем положение резца меняли до 45° к поверхности мозга и устанавливали режущую кромку до 90° к поверхности мозга. Затем резец вводили наклонно вниз до полного заполнения резца тканью мозга. Из биоптата готовили срезы, которые помещали в питательную среду. Среды использовали в дальнейшем для нейробиологических исследований. Морфологический и физиологический контроль срезов позволил установить наличие сохранных связей нервных клеток пириформной доли мозга.

Способ позволяет выделить полностью миндалевидный комплекс пириформной доли мозга с сохраненными нейтронными связями и использовать переживающие срезы в нейробиологических исследованиях.

Формула изобретения

I

Способ приготовления переживающих срезов пириформной доли мозга путем ис- сечения ткани с последующей инкубацией в питательной среде, отличающийся тем, что, с целью полного выделения обра- зования иссечение проводят по форме эллиптического параболоида, при этом угол иссечения устанавливают от 18 до 22° к продольной оси мозга.

Изобретение относится к медицине, а именно к нейробиологии Целью является получение полного отдела пириформного отдела мозга. Цель достигается тем, что специальным резцом, выполненным в форме эллиптического параболоида, иссекают отдел миндалевидного комплекса. При этом угол иссечения устанавливают от 18-20° к продольной оси мозга. Способ позволяет получить пириформную долю мозга с сохраненными нейтральными связями