Способ определения содержания клеток в микробных препаратах Советский патент 1991 года по МПК G01N33/483 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в микробиологической, медицинской и пищевой промышленности для определения количественного содержания микробных клеток в различных композиционных препаратах.

Целью изобретения является повышение точности определения.

На фиг.1 изображен градуировочный график зависимости тока через измерительную ячейку от содержания клеток Е. coli М-т17 в пробе препарата; на фиг.2 - градуировочный график зависимости тока через измерительную ячейку от содержания клеток Bacillus thuringensis в пробе препарата.

Сущность способа заключается в следующем.

Дозированную лробу сухого препарата, содержащего микробные клетки,

помещают в электродную ячейку и измеряют ток при нагревании от комнатной температуры до 100вС.

По величине максимального тока по градуировочному графику определяют содержание клеток в пробе препарата.

Для каждого вида культуры снимают свою градуировочную кривую.

Снятие градуировочной кривой производят следующим образом

Выращенную на минеральной среде до стационарной фазы роста культуру концентрируют центрифугированием или с помощью сепаратора, а затем высушивают лиофильно. Высушенную биомассу размалывают в керамической ступке и хранят в закрытой посуде в эксикаторе с поглотителем влаги (

Для замещения части порошка клеточной биомассы берут NaCl той же дисперсии и обезвоживают подсушивани

05 00 Јь

О

sl

ОЭ

ем в эксикаторе с Готовят различные пропорции клеточной биомассы и NaCl, содержащие 10%, 20%,..., 100% клеточной биомассы. Затем дозированную пробу каждой смеси поочередно помещают в измерительную ячейку и измеряют ток при нагревании от комнатной температуры до 100 С.

По величинам максимальных токов для каждой пробы строят градуировоч- ный график зависимости величины максимального тока от количественного содержания клеточной биомассы в пробе препарата.

Пример 1. Построение градуи- ровочной кривой для культуры Е. coli М-17.

Культуру Ее coli М-17, выращенную на глюкозоминеральной среде до стационарной фазы роста, концентрируют центрифугированием (4000 об/мин в течение 30 мин, полученный концентрат содержит около 90% влаги). Концентрат Ее coli М-17 высушивают лио- фильио. Высушенную лиофильную биомассу Ео co,i М-17 размалывают в кет рамической ступке и хранят в эксикаторе с РлОь для исключения увлажнения .

Для количественного замещения части порошка Е„ coli М-17 берут NaCl той же дисперсности и подсушивают в эксикаторе с поглотителем влаги . Готовят несколько композиций с различным содержанием E.coli М-17: 0, 20, 33, 40, 50, 67, 100%. Затем поочередную пробу каждой при- -готовленной смеси с помощью дозатора помещают в измерительную ячейку.

Измерительная ячейка - двухэлект- родная импедансометрическая ячейка имеет титановые электроды, находящиеся на фиксированном расстоянии во фторопластовом корпусе. Ячейка разъемная. Предусмотрена промывка, обработка и стерилизация. Наружный кожух и резьбовой крепеж обеспечивают надежную фиксацию межэлектродного расстояния и достаточную герметичность места помещения пробы материала. Объем пробы составляет 0,06 см3 .

Измерение тока производят на установке, состоящей из ИМТ-0,5 (измеритель малых токов), самопишущего мил- 5 ливольтметра и блока подключения ячейки, состоящего из контактной системы, помещенной и термостат с зада

ваемой скоростью нагрева и с диапазоном нагрева до 150 С.

Ячейку с препаратом подключают к контактной системе и измеряют ток в процессе нагрева от комнатной температуры до 100вС„ В лроцессе нагрева регистрируют самопишущим милливольт- м«:тром величину напряжения., пропорциональную току через ячейку с препаратом. Ток вычисляют по формуле

ЧХ ХН R

Ru 1 + kft

vtw

5

0

5

0

5

0

5

0

5

где igX - ток через ячейку; i-H и

Кц - ток и сопротивление на выходе измерителя; КИ2 - Фиксированное сопротивление, соответствующее диапазону измерителя тока;

и ft соответственно коэффициент усиления измерителя и коэффициент обратной связи ().

По вычисленным значениям максимального тока для каждой из проб препарата, содержащего определенное количество клеток E.coli М-17, строят градуи - ровочный график зависимости тока через ячейку от содержания клеток в пробе препарата (фиг . 1) .

Пробу препарата, содержащего микробные клетки E.coli М-17, объемом 0,06 см3 помещают в ячейку, ячейку подключают к измерительной установке. Замеряют ток при нагревании от комнатной температуры до 100 С. Максимальный ток составляет 3, А. По градуировочному графику определяют содержание клеток E.coli М-17 в пробе препарата. Оно составляет 65,9jt 11,5%.

Параллельно в пробе исследуемого препарата определяют содержание микробных клеток методом посева проб. Оно составило 66,1%.

В табл.1 приведены результаты по определению содержания микробных кл ток в препаратах данным способом к по способу посева проб.

Пример 2. Построение градуи- ровочной кривой для Bacillus thurin- i ensis проводят по аналогии с построением градуировочного графика для E/coli М-17.

Культуру В. thuringensis, выращенную на глюкозоминеральной среде

концентрируют, сушат, приготавливат порошок, который хранят в эксикаоре с поглотителем влаги Pj.Для количественного замещения части порошка В. thur ingensis берут NaCl той же дисперсности и подсушивают в эксикаторе с . Готовят несколько композиций с различным процентным содержанием В. thuringensis: О, 20, 33, 40, 50, 67, 100%. Затем оочередно так же как и в случае с E.coli M-17 пробу каждой приготовленной смеси с помощью дозатора помещают в измерительную ячейку, описание которой приведено выше, и измеряют ток через ячейку в процессе нагрева от комнатной температуры до 100°С на установке и по методике, указанной в .примере 1 .

По вычисленным значениям максимального тока для каждой пробы преарата, содержащего определенное коичество клеток Bacillus thuringensis, строят градуировочный график зависимости тока через ячейку от соержания клеток в пробе препарата (фиг.2).

Пробу препарата, содержащего клетки В. thuringensis, объемом 0,06 см3 помещают в измерительную ячейку, ячейку подключают к измерительной установке. Замеряют ток при нагревании

от комнатной температуры до ЮО°С. Максимальный ток составляет 0,64 х хКГ Ао По градуировочиому графику определяют содержание клеток В.thuringensis в пробе препарата. Оно составляет 34,7±1,5%.

В табл.2 приведены результаты по определению содержания клеток Bacillus thuringensis в препаратах данным способом и по способу посева роб.

5

Таким пораэом, данный способ поз- яолтет повысить точность определения содержания клеток в микробных пре- па i а т ах.

Формула изобретения

Способ определения содержания клеток в микробных препаратах, включающий приготовление пробы препарата, измерение параметра и оценку количества клеток по градуировочпому графику, отличающийся тем, что, с целью повышения точности опре- дел,ения содержания клеток, нагревают пробу сухого прелгарата до 100 С, определяют электрический ток, возникающей в пробе препарата в процессе нагревания, а в качестве измеряемого параметра используют максимальный ток в пробе препарата,,

Таблица 1

25 Препарат

Содержание клеток в препарате, %

30

Таблиц а 2

35

40

75,4±1,5 34,7±1,5 15,341,5

74,0i4,0 35,0±3,0 15,0±2,0

мах JO-I2A

Изобретение относится к микробиологии и направлено на повышение точности определения содержания клеток в микробных препаратах. Дозированную пробу сухого препарата, содержащего микробные клетки, помещают в электродную ячейку, нагревают от комнатной температуры до 100° С и измеряют ток ячейки, возникающий при нагревании. По величине максимального тока, пользуясь градуировочным графиком, определяют содержание клеток в пробе препарата. Для каждого вида культуры снимают свою градуировочную кривую. 2 ил о, 2 табл.

50100

Доля E.col M-I7 , %

мах

50100

Доля Васе iПи S /luii/7ЈЈ/7S«:s , %

Фиг. 2