Способ определения клофелина Советский патент 1991 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к биохимии, и может быть применено при судебно-экспертных исследованиях.

Цель изобретения - возможность осуществления способа при определении клофелина в биологической ткани.

Способ осуществляют следующим образом.

К 100 г измельченного биологического материала прибавляют 0,6 мг клофелина. перемешивают и через 24 ч извлекают кло- фелин троекратным настаиванием 70%-ным этанолом по 100 мл. Этанольные извлечения объединяют, фильтруют, добавляют 2 мл 0,5 М раствора триродано-кобальтата аммония, реэкстрагируют продукт реакции 10 мл хлороформа или 10 мл ацетона и проводят фотоэлектроколориметрические определения.

Расчет содержания клофелина определяют по формуле

Dx а 100

Х%

Do b

где Dx - оптическая плотность исследуемого раствора;

Do - оптическая плотность стандартного раствора;

а - содержание клофелигна, мг, в стандартном растворе;

b - навеска клофелина, мг, в исследуемом растворе.

П р и м е р 1. Эксперименты in vitro.

Использовались различные органы подопытных животных (печень, почки, желудок, кишечник). Во время экспериментов применяют известный способ добавок, т.е. берут тщательно измельченные органы в количестве по ЮОг, прибавляют 4 измельченных таблеток клофелина по 0,00015 (т.е. доза 0,6 мг клофелина), перемешивают и оставляют при комнатной температуре (20°С) в течение 1 сут. Затем клофелин извлекают троекратным настаиванием 70%-ным этанолом по 100 мл. Обьединив этанольные извлечения, их центрифугируют, фильтруют и упаривают до сухого остатка, прибавляют 10 мл 96%-ного этанола и 2,0 мл 0,5 М ;

СО

С

о

00

ю

00

ел со

раствора триродано-кобальтата аммония (при наличии клофелина образуется изумрудно-синего цвета комплексное соединение, которое хорошо экстрагируется хлороформом или ацетоном). Окрашенные хлороформные или ацетоновые фракции подвергают фотоэлектроколориметрирова- нию.

Измеряют оптическую плотность при длине волны около 570 нм в кювете толщи- ной 3 мм. В качестве раствора сравнения используют 0,5%-ный стандартный раствор клофелина (т.е. точную навеску 0,5000 г клофелина (ФС-42-1776-83), растворяют в воде в мерной колбе с емкостью 100 мл. В 1 мл стандартного раствора содержится 0,005 г клофелина, Раствор устойчив в течение 1 мес при хранении склянок с притертой пробкой в защищенном от света месте. Результаты определения клофелина в пече|4и приведены в табл.1.

Описанный способ позволяет определить в среднем 60,25+0,22% клофелина при содержании 10 мг в 100 г печени.

П р и м е р 2. Используя вышеописанный способ выделения клофелина из биоматериала, провели ряд экспериментов с различными объектами биологического происхождения, в частности желудок и кишечник с содержимыми, почки, а при извле- чении из кррви и мочи использовались иным способом (т.е. из них непосредственно выделяли клофелин (СМ5)з.

. Результаты проведенных исследований приведены в табл.2.

П р и м е р 3. Эксперименты в опытах in vivo.

Берут подопытных животных (кролики весом в 2,5-3 кг породы Шиншилла), которым парэнтерально вводят клофелин в различных дозировках, мг; 0,6; 2; 5.5; 10. После затравки животных определяют клофелин в различных биообъектах (параллельно проводят контрольные опыты).

Результаты опытов приведены в габп.З,

Применение способа в медицинской практике позволит определять содержание клофелина в различных объектах биологического происхождения как in vitro, так и in vivo и облегчит обеспечить возможность применения способа при проведении судебно- медицинских экспертиз

Формула изобретения Способ определения клофелина путем взаимодействия пробы с окрашивающим индикатором с последующей фотометрией продукта, отличают, мйх я тем, что, с целью возможности осуществления способа при определении клофелинэ в биологической ткани, пробу обрабатывают этанолом, в качестве окрашивающего индикатора используют раствор трироданокобальтата аммония, а перед фотометрией проводят реэкстрагирование хлороформом или ацетоном.

Изобретение относится к медицине, точнее к биохимии, может быть применено при судебно-экспертных исследованиях. Цель - возможность осуществления способа при определении клофелина в биологической ткани. Пробу обрабатывают этанолом, в качестве окрашивающего индикатора используют раствор трироданоко- бальтат аммония, а перед фотометрией проводят реэкстрагирование хлороформом или ацетоном. 3 табл.

Т a G п м ц s 1

.%

582 61,2 60,3 55,8 70,5

Та б л и ца 3