Способ получения бициклического соединения или его фармацевтически приемлемых солей Советский патент 1986 года по МПК C07K5/65 A61K38/05 

Изобретение относится к способу получения бициклического соединения или его фармацевтически приемлемых солей новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине.

Цель изобретения - способ полу-чения новых бициклических соединений обладающих более высокой гипертензивнон активностью и низкой токсичностью,

Пример 1. Гидрохлорид этилового эфира глицина (20 г) растворяют в 10 г раствора 0 г 2-инданона в 200 мл метанола( после чего к полученному раствору, охлаждаемому на ледяной бане, прибавляют порциями при перемешивании 5,0 г цианоборгидрида натрия. После перемешивания при комнатной температуре в течение 2 ч реакционную смесь выливают в 500 мл ледяной воды, всю эту смесь подщелачивают бикарбонатом натрия и экстрагируют 300 мл этилацетата. Экстракт пpo 5ывaют водой и высушивают, после чего этилацетат отгоняют при пониженном давлении (в вакууме), к остатку прибавляют 10 Ш1 20%-ного этанольного раствора хлористого водорода и 200 миллилитров диэтилового эфира„ после чего отстаивают при комнатной температуре. Образующийся при этом кристаллический осадок отделяют фильтрованием и сушат до постоянного веса, В итоге получают 11 г гидрохлорида этилового эфира N-(индaи 3-ил)глицинa в виде бесцветных игольчатых кристаллов, имеюищх т,г.ш, 1б5-167с, i .

Пример 2. 2-Инданон (40 г)

растворяют в 300 мл метанола, к, раствору прибавляют 78 г фосфита третбутилового эфира глицина и 150 г воды, после чего к этой смеси, охлаждаемой на ледяной бане, прибавляют порциями при перемешивании (в течение 15 мин) 23 г цианоборгидрида натрия. Затем полученную реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. Далее к этой реакционной смеси прибавляют порциями в течение 1 ч 400 мл 20% ной фосфорной кислоты, 200 мл водь и смесь перемешивают в течение 30 мин, после чего экстрагируют 800 мл диэтилового эфира, водный слой подщелачивают водным раствором гидроокиси натрия до рН 10

и экстрагируют 4 порциями (в общей сложности 500 мл) хлороформа. Экстракт сушат над безводным сульфатом натрия и затем упаривают при пониженном остаточном давлении. К полученному маслянистому остатку добав-ляют сначала 50 мл этанола, а затем 150 мл воды и смесь охлаждают. Образуюш 1йся при этом кристаллический осадок отделяют фильтрованием и дважды перекристаллизовывают из водного этанола, В итоге получают 47 г третбутилового эфира (индан-2-ил)глицина в виде бесцветных призматических кристаллов, имеющих т, пл, 54-55°С.

Пример 3, Раствор 22,3 г К-карбобензокси-Ь-аланина и 14 мл триэтиламина в 200 мл тетрагидрофурана охлаждают до и к этой смеси осторожно прибавляют по каплям 13,1 мл изобутилхлоркарбоната. После перемешивания в течение 30 мин к этой смеси прибавляют по каплям при охлаждении до (-10)-(-5)°С раствор 24,1 г гидрохлорида этилового эфира N-(индан-2-ил)глицина и I4 мл триэтиламина в 200 мл хлороформа. После выдерживания в течение ночи при комнатной температуре реакционную смесь промывают последовательно водой, а затем водным раствором бикарбоната натрия, 10%-ной соляной кислотой и водой, после чего сушат над безводным сульфатом натрия. Затем растворитель отгоняют при пониженном давлении, остаток растворяют в 100 мл метанола, к раствору добавляют 75 мл 2 н, раствора гидроокиси натрия и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч. Затем смесь подкисляют 10%-ной соляной кислотой с целью выделения обра- зуюшегося маслянийтого продукта, который экстрагируют в делительной вот ронке 500 м:а этилацетата. Полученный экстракт промывают водой, высушивают над безводным сульфатом натрия и упаривают в вакууме с целью отгонки растворителя,, В остатке получают 25 г М-карбобензокси-Ъ-аланил-М (инд.ан-2-ил)глицина в виде масла. Продукт растворяют в 50%-ном этаноле и подвергают каталитическому восстановлению в присутствии 4 г 10%-ного палладия на угле. Когда поглощени водорода закончится, катализатор отфильтровывают и фильтрат концентрируют при пониженном давлении. При остатке 50 мл метанола получают 11 г 1-аланил-Н-(индан-2-ил)глицина в ви де -бесцветных игольчатых кристаллов имеющихт. кип, 180-182°С. Пример 4, N-Карбобензокси-L-аланин (21,8 г) в 12,3 миллилитр триэтиламина растворяют в 200 мл те рагидрофурана и к раствору, температуру которого поддерживают на уро не -15°С, осторожно прибавляют по каплям при перемешивании 8,5 г этил хлоркарбоната. После завершения при капывания перемешивание продолжают в течение 15 мин и затем в реакцион ной смеси прибавляют по каплям при перемешивании и охлаждении до или ниже раствор 22 г трет-бутилово го эфира N-(индан-3-ил)глицина в 100 мл хлороформа, После перемешива ния при комнатной температуре в течение 1 ч реакционную смесь выливают в 500 мл воды, хлороформенный сл отделяют и хлороформ отгоняют при п ниженном давлении. Остаток растворя ют в 300 мл этилацетата, раствор np мывают двумя 50-миллилитровыми порци ями 1 н. водного раствора гидрокиси натрия, одной 50-миллилитровой порцией воды, двумя 50-мйллилитровыми порциями 20%-ного водного раствора фосфорной кислоты и.одной 50-миллилитровбй порцией воды (в указанном порядке), после чего сушат над безводным сульфатом магния и растворитель отгоняют Б вакууме до получения в остатке 35 г К-карбобензокси-Ь-аланил-Ы-(индан-2-ил)глицин-третбутилового эфира в виде масла. Маслянистый продукт растворяют в 300 мл метанола, и после добавления 7 г щавелевой кислоты в 3,5 г 10%-ном палладий на угле (содержащего 50% воды), подвергают каталитическому восстановлению при комнатной температуре и нормальном давлении. После завершения поглощения водорода, что является свидетельством завершенияреакции, катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме с целью отгонки растворителя и к .остатку прибавляют 500 мл этанола. При охлаждении раствора образуется кристаллический осадок, который выделяют фильтрованием, и после сушки получают 21,8 г оксалата трет-бутилового эфира Ь-аланил-Н(индан-2-ил) глицина, имеющего т, пл. 138-141°С, Удельное врашение: ct.V +20,4 (С 1, метанол). Пример 5, Смесь 143 г этилового эфира 3-фенилпропионовой кислоты, 234 г зтилоксалата и 154 мл 28%-ного раствора этилата натрия в этаноле нагревают на водяной бане, имеющей температуру 60-70°С в течение 1,5 ч, осуществляя при этом отгонку этанола из смеси при пониженном давлении. К полученному в остатке красноватому сиропу прибавляют 1,3 л 15% (в объемном исчислении) серной кислоты. Смесь кипятят с обратным холодильником при перемешивании в течение 15 ч, после чего образующийся маслянистый слой отделяют, нейтрализуют 10%-ным раствором гидроокиси натрия и экстрагируют этилацетатом. Воднь1Й слой подкисляют разбавленной серной кислотой. Образующееся при этом масло экстрагируют этилацетатом, промывают водой и высушивают. Удаление этилацетата отгонкой при пониженном давлении приводит к получению 100 г 2-оксо-4фенилмасляной кислоты в виде маслянистого продукта. Пример 6. 2-Оксо-4-фенилмасляную кислоту (130 г) прибавляют к смеси 650 мл этанола и 13 мл кон-центрированной серной кислоты, после чего всю эту смесь кипятят с обратным холодильником в течение 5 ч. . Далее реакционную смесь концентрируют до примерно половины первоначального объема и остаток разбавляют 500 МП воды. Образующееся при этом масло отделяют, а водный слой экстрагируют этилацетатом. Этилацетатный экстракт и масло объединяют и сушат, после чего растворитель отгоняют при пониженном давлении. Остаток подвергают фракционной перегонке в вакууме, в результате чего получают ИЗ г этилового эфира 2-оксо-4 фенил-масляной кислоты в виде бесцветного масла, имекяцего температуру кипения 135-l4l C/3 мм рт.-ст. Пример 7,К раствору 1,0 г L-aлaнил-N-(индaн-2-ил)глицина и 6,0 г этил-2-оксо-4-фенил-бутирата в 200 мл этанола прибавляют 8 г молекулярных сит (цеолита) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем к этой смеси прибавляют 1,0 г цианоборгидрида натрия. После вьщерживания в течение ночи реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении. остаток подщелачивают 10%-ным водным раствором гидроокиси натрия до рН 9,0 и нерастворимые вещества удаляют экстракцией диэтиловым эфиром. Водный раствор подкисляют до рН 4 10%ной соляной кислотой и экстрагируют двумя 200-миллилитровыми порциями этилацетата. Экстракт промывают водой, сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают в вакууме с целью удаления растворителя. Остаток растворяют в 2 мл 20%-ного раствора хлористого водорода в этаноле, к раствору добавляют 00 мл диэтилового эфира и смесь остаивают при комнатной температуре. Образующийся осадок отфильтровывают, промывают диэтиловым эфиром, сушат и в итоге получают 0,4 г гидрохлорида Ы-(1-этоксикар бонил-3-фенилпропил)-Ь-аланил-Ы-(индан-2-ил)глицина, имеющего т, пл. 168-1 70°С.. Пример 8. Оксалат .трет-бути лового эфира Ь-аланил-М- (нндан-2-ил глицина (21 г) растворяют в 200 миллилитрах этанола, К этому раствору прибавляют последовательно 4/1 г ацетата натрия, 0 мл уксусной кислоты, 25 г этил 2-оксо-4-фенилбутирата и 25 г молекулярных сит марки ЗА, После этого добавляют 30 г никеля Ренея, суспендированного в 100 мл этанола, и проводят каталитическое восстановление в атмосфере водорода при комнатной температуре и нормальном давлении. Когда поглощение водорода прекратится, супернатант (надосадочную жидкость) отделяют декантацией и осадок промьшают два или три раза этанолом, Суцернатант и промьгвные этанольные вытяжки объединяют и концентрируют при пониженном давлении. Остаток растворяют в 500 мл этилацетата, раствор промывают а де лительной воронке водным раствором бикарбоната натрия и фильтруют че-рез слой (30 г) диатомитовой землей, Этилацетатный слой отделяют от филь рата, промывают водой и сушат над беэводным сульфатом магния. После отгонки растворителя в вакууме в ос татке получают 24 г К-(1-этоксикарбонил-3-фенилпропил)-Ь-аланил-Ы-(йндан-2-Ш1)глицин трет-бутилового эфкра в виде слегка желтоватого вяз кого масла, ИК-спектр неразбавленно продукта: 1730 см (полоса поглощен сложноэфирного карбонила) , 1640 см (полоса Амид 1), ПМР-спектр (в дейтерохлороформе) S: 1,27 мд. (ЗН, триплет, СН..,) 1,40 м.д, (9Н, синглет, ), 1,82,2 м,д, (ЗН, мультиплет, СН ), 2,64,5 м.д, (ЮН, мультиплет), 3,9 м.д, (2Н, мультиплет, СН 4,2 м.д. (2Н, квадруплет, СН), 4,9 м. д, (1Н, триплет, СН), 7,17,4 м.д. (9Н, мультиплет, протоны фенильной группы). Пример 9, Трет-бутиловый эфир N-(1-этоксикарбонил-З-фенилпропил)-Ь-апанил-Н-(индан-2-ил)глицина, полученный в примере 2, подвергают очистке методом колоночной хроматографии с использованием 700 г силикагеля. При использовании в качестве элюента системы растворителей бензол - ацетон (с градиентом от 10:1 до 4:1) и системы метанол - бензол (1:9) получают две фракции продукта. Каждую фракцию подвергают затем колоночной хроматографии с использованием 400 г силикагеля и указанных элюентов. Очистка в этих условиях первой фракции дает 2 г трет-бутилового эфира (R)-этoкcикapбoнил-3-фeнилпpoпил}-L-aJ7.aнил-N-(индaн-2-ил) глицина в виде бесцветного вязкого масла. Удельное оптическое вращение , -16,4° (, метанол). Аналогичная обработка второй фракции приводит к получению 16,5 г трет-бутилового эфира (S)-этoкcикapбoнил-3-фeнилпpoпил -L-aлaнил-N-(индан-2-ил) глицина в виде бесцветного вязкого масла, имеющего, / удельное оптическое вращение -12,6 (, метанол). Пример 10, 5 г трет-бутилового эфира N- 1-(5)-этоксикарбо шл-З-фенилпропил L-аланил- N-(индaн-2-ил) глицина, полученного в примере BS растворяют в 5 мл уксусной кислоты и к этому раствору прибавляют 20 мл 25%-ного раствора бромистого водорода в ледяной уксусной кислоте, после чего смесь взбалтывают в течение 10 мин. Кристаллический осадок, которьш выпадает при добавлении к этой смеси 300 мл диэтилового эфира, выделяют фильтрованием и в итоге получают 5 г гидробромида N- 1-(8)этоксикарбонил-3-фенилпропил -Ь-аланил-К-(индан-2-ил) глнцина в виде бесцветного кристаллического продукта с т, пл. 180-183°С. Удельное оптическое вращение /о(/1° +15,6 ,(,4; метанол). Пример 11, Используя N (К)-этоксикарбонил-З-фенилпрогшл -Ь-аланил-Ы-(индан-2-ил)глицин третбутиловый эфир, полученный в лримере 3, и обрабатывая его аналогично примеру 4, можно получить гидробромид-N- -(К)-этоксикарбонил-З-фенилпропил -Ь-аланил-Ы-(индан-2-ил)глици на в виде бесцветного кристаллического вещества, имеющего температуру плавления 150-155 С. М//° -20,2 (, метанол). Пример 12. К смеси 500 мл этилацетата, 33 г бикарбон-ата нагрия и 500 мл воды прибавляют 16,2 г гидробромида N- l-(З)-этоксикарбонил-8-фенилпропил1 Ь -аланил-М-(индан-2-ил)глицина, полученного в соответствии с методикой примера 4. После перемешивания до полного растворения раствор подкисляют до рН 4 1 н. соляной кислотой. Этилацетатный слой отделяют, промывают водой, высушивают и после добавления 20 мп 7 н. этанольного раствора хлористого водорода, концентрируют при пониженном давлении. К остатку прибавляют 250 мл диэтилового эфира и 250 мл петролейного эфира. Образующийся при этом осадок отфильтровывают и в ито ге получают II г гидрохлорида (5)-этоксикарбонил-3-фенилпропил -L-аланил-(индан-2-ил)глицина в виде бесцветного кристаллического продукта. Перекристаллизация этого продукта из смеси ацетона и 1 н. соляной кислоты приводит к получению бесцветных пластинчатых кристаллов, пл вящихся при 166-170°С (с разложением). Удельное оптическое вращение +18,5° (, метанол), ИКспектр полученного продукта (для суспензии в вазелиновом масле): 1740 см (валентные колебания карбонильной группы в сложноэфирной группировке - СООС Н), 1705 см (валент ные колебания карбонила карбоксильной группы - СООН), 1640 см(валент ные колебания карбонила амидной группы (CO-N) полоса Амид 1), Приведены биологические испытания предлагаемых соединений, Эксперимент 1, Ингибирование ангиотензин-1-превращающего фермента (АПФ) прадлахаемыми соединениями. Эксперимент проводят в соответст вии с модифицированным вариантом ме тода. Используя гиппурил-Ь-гистидил-L-лейцин (ГГЛ) в качестве субстрата, ингибиторную активность в отношении ангиотензин-Превращающего фермента (АПФ ингибиторну о активность) определяют по количеству гиппуровой кислоты, продуцируемой ангиотензин превышающим ферментом при добавлении тестируемого соединения и выражают величиной степени ингибирования (в процентах). Раствор соединения, растворенного в 0,02-2%-ном диметилсульфоксид-100 п М фосфата калия буферном растворе (рН 8,3, содержащем 300 m М хлорида натрия, прибавляют к 100 ангиотензин-превращающего фермента (концентрация белка 20 мг/кг) и 100 1,25 m М раствора гиппурил-Ь-гистидил-Ы-лейцина (ГГЛ), В качестве контроля используют буферный раствор фосфата калия, содержащий диметилсульфоксид в той же концентрации, что и испытуемый раствор. После инкубирования раствора при 37°С в течение f ч к нему для прекращения реакции добавляют .150 мкл I н, соляной кислоты. Затем туда же добавляют мл этилацетата. раствор центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин, из этилацетатного слоя отбирают аликвоту объемом 0,5 мл и высушивают ее при температуре ниже 50°С в токе газоообразного азота. Остаток смешивают с 5 мл 1М водного раствора хлорида натрия и смесь колориметрируют при длине, волны 228 нм. Результаты проведенных испытаний, полученных при тестировании .соединений, представлены в табл. 1. Эксперимент 2. Действие предлагаемого соединения изобретения против гипертензивной активности Ангиотензина I, В качестве экспериментальных животных в данном случае используют крыс-самцов (линии Sprague-.-Dawley), весом от 250 до 350 г, которых содержат в условиях свободного доступа к питьевой воде и корму. Подопытных крыс анестезируют внутрибрюшинным введением пентобарбитала натрия (в озе 50 мг/кг) в день, предшествуюий дню проведения испытания, и в еморальную (бедренную) артерию кажой крысы вводят полиэтиленовую трубочку для измерения кровяного даве шя, а в феморальную (бедренную) ену аналогичную трубочку вводят для

инъектирования ангиотензина 1 и 11, после чего трубочки фиксируют (закрепляют) ,

В день испытания измеряют среднее кровяное давление в контрольной фазе, которое регистрируют с помощью электрического гемодинамометра (модели МР-4Т, производимой фирмой Ниппон Коден, Япония), после чего феморальную вену каждой подопытной крысы вводят сначала ангиотензин I, а затем ангиотензин II в дозе 300 нг/кг и 100 нг/кг соответственно для измерения гипертензивной активности. После этого подопытным крысам вводят перорапьно тестируемое соединение в дозе 13,8 мкмоль/кг веса тела в виде водного раствора или в виде суспензии в водном растворе гуммиарабика (аравийской камеди) и, спустя 20, 60 и 120 минут после введения, крысам повторно инъектируют ангиотензин I и анг иотензин II

для того, чтобы проследить за проявлением и развитием гипертензивных реакций. При вычислении степени ингибирования (% ингибирования) гипертензивной активности ангиотензина I величину степени ингибирования корректируют с учетом временной вариации в развитии гипертензивной реакции под действием ангиотензина II.

Результаты испытания соединений на противогипертоническую активность представлены в табл. 2, приведенной ниже.

Токсичность предлагаемого соединения в свободном виде 8000-9000 мг/кг в виде соли - 7400-8330 мг/кг. Проведенные испытания показали, что соединения, полученные предлагаемым способом, при низкой токсичности

обладают более высокой антигипертонической активностью, чем известные соединения по структуре и действию.

Таблица 1

Способ получения бициклического соединения формулы О СНз СНгСНг 3 -H-C-CH-NH-CH-COOCjHs снгсоон или его фармацевтически приемлемых солей, отличающийся тем, что соединения общей формулы где R водород или трет-бутил, подвергают взаимодействию со сложным кетоэфиром формулы ГЛ-СНпСНо-С- С-ОС2Н5 / II II о о в восстановительных условиях и в СО случае необходимости полученный сложный эфир общей формулы О СН, ОТгСИг-О h-N- :-cH-NH-CH-cooCjH5 CH2COOR to где R трет-бутил, подвергают гидролизу и. целевой продукт выделяют в свободном виде или со в виде соли. ю см

i Ингибирование против

Таблица 2 гипертонической реакции, вызванной ангиотензином 1, %

19

10

Формулы испытываемого соединения

О CHj

-N-C-CH- JHCHCOOCjHs CHjCOOH о CHi CHjCHi-f I I I /

L LyY - - .HCi

Примечание, Испытуемые соединения вводят в

1271372

12 Продолжение табл.2

Ингибирование против гипертонической реакции, вызванной ангиотензином I, Z

после

после 60 мин 120 мин

93

88

77

93

88

77

дозе 13,8 мкм/кг.