Способ определения антигена Советский патент 1991 года по МПК G01N33/533 

Изобре гение относится к области иммунохимии и может быть использовано для обнаружения специфических антигенов (антител) в биологических жидкостях

Цель изобретения - определение антигенов (антител) методом иммунофлуоресценции, не образующих комплексы антигек-флуоресцирующее антитело, видимые в люминесцентный микроскоп

Способ осуществляется следующим образом.

В известном способе определения антигена (антител) в реакции иммунофлуоресценции, включающем инкубацию антигена со специфическими флуоресцирующими антителами, получение преципитата и учет результатов реакции, определение антигенов

(антител) проводят в жидкой фазе без использования твердофазных носителей Для этого образовавшиеся люминесцирующие комплексы выделяют из жидкой фазы иммунологической реакции центрифугированием при 3-4 тыс а , отмывают от непрореагировавших исходных компонентов, ресуспендируют в исходном объеме за- буференного физиологического растзора и флуоримегрируют в жидкой фазе

Пример. Подбор оптимального разведения флуоресцирующей иммунной сыворотки.

В центрифужные пробирки вносят по 3 мл забуференного физраствора, состоящего из 7 ч. 0,85%-ного раствора, NaCI и 3 ч. 0,15 М , фосфатного буфера рН 7,5-7,6. Добавляют

ON 00 Ю

со ел

00

по 0,1 мл известного антигена и по 0,05 мл разведений соответствующей иммунной флуоресцирующей сыворотки В контропь- ные пробирки вносят те же разведения флуоресцирующей сыворотки без антигене Пробирки инкубируют 12-16 ч при 37°С, после чего осаждают прореагировавшие комплексы путем центрифугирования в цен трифуге с горизонтальным ро-ором при 3- 4 тыс $ о течение 20 мин. Иадосадочную жидкость сливаюI,а осадок отмывают путем ресуспендирования es о в 3 нл эабуференно- го физраствора, центрифугирования при 3-4 тыс cj в течение 10 мин и удаления надосадочной жидкости Отмытый осадок ресуспендируют в 3 мл забуферепмого физ раствора и флуириметрируют. Urn шкальным разведением флуоресцирующей иммунной сыворотки i читают разведение, обеспечивающее наибольшую разницу в флуоресценции между гомологичной и контрольной системой, не содержащей специфического антигена. При использовании антиглобулиновых флуоресцирующих сывороток последние не тигру ют, а используют в четырехкратной концентрации по отношению к их красящему титру, определенному изготовителем

В таблице приведен пример тип роваиия флуоресцирующей ИММУННОЙ сыворотки против вируса ящура TI/ го А

В приведенном примере оптимальным разведением флуоресцирующей сыворотки являете;1 1 10, те-; как после вычитаний ве0

5

0

5

O

5

лцчины фонового свечения {без антигена) такое разведение обеспечивает самый высокий уровень флуоресценции (в данном примере 14 единиц)

Положительным эффект способа состоит в возможности определения антигенов (антител), не образующих флуоресцирующих агрегатов, видимых в люминесцентном микроскопе, в частности вируса ящура пи- корна- и калицивирусов, других растворимых антигенов Способ не требует связывания образующегося люминесциру- ющего ломплекса с нер,дифаз1.ым носителем.

Формула и г о б р е т е н и л Способ определения антшена о реакции иммунофлуоресцеици п, включающий инкубацию антигена со специфическими флуоресцирующими антителами, выделение люминесцирующих комплексов путем цен рифу; ирования и у--ет результатов реакции отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа за счет выявления антигенов, не образующих комплексов, видимых в люминесцентный микроскоп, люминесцирующис комплексы сыделяют из жидкой фазы иммунологической реакции центрифугированием при 3-4 тыс., отмывают от непрореагировавших исходных компонентов, ресуспендируют в исходном объеме забуференного Физиологического раствора и учитывают методом флуорммегрим в жидкой фазе

Изобретение относится к иммунохимии и может быть использовано для обнаружения специфических антигенов (антител) в биологических жидкостях Целью изобретения является повышение точности определения антигенов (антител) методом иммунофлуоресценции, не образующих комплексы антиген - флуоресцирующее антитело, видимые а люминесцентный микроскоп Для реализации способа в реакции иммунофлуоресценции включающей инкубацию антигена со специфическими флуо ресцирующими антителами учет результатов реакции проводят в жидкой фа зе без использования твердофазных носителей Для этого образовавшиеся люминесцирующие комплексы выделяют и жидкой фазы иммунологической реакции центрифугирователем при 3-4 тыс с , отли вают от непрореагировавших исходных компонентов, ресуспендиоуют в исходном объеме забуфеоенного физиологическою раствора и флуориметрируют в жидкой фа зе Положительный эффект способа состоит в возможности определения антигенов (антител), не образующих флуоресцирующих агрегатов, видимых в люминесцентном микроскопе, в частности вируса лизурз пикор- на- и калицивирусов 1 табл (Л С

Антиген

А

О

Нормальная ткань

Без антигена

Флуоресцирующая сыворртка типа A s разведениях I

17

6

4