Способ диагностики хронической инфекции Советский патент 1991 года по МПК A61B10/00 G01N33/53 

Изобретение относится к медицине и биологии, а именно к способам иммунодиагностики хронических инфекционных заболеваний, и может быть использовано для диагностики заболеваний бактериальной этиологии.

Цель изобретения - упрощение способа диагностики хронических инфекций за счет ыделения антигена из иммунных комплексов, циркулирующих в сыворотке крови.

Способ диагностики хронической инфекции, основанный на антигенной характеристике циркулирующих иммунных комплексов, иллюстрируется следующими примерами.

( П р и м е р 1 Больная П. поступила с диагнозом эритематозно-геморрагическая рожа левой голени, рецидивирующая, Сыворотку крови обследуемой в объеме 200 мкл смешали с боратным буфером рН 8,4 в соотношении 1:25, добавили полиэтиленгликоль

мол. м. 6000 до конечной концентрации 3,5%, инкубировали в течение 18 ч при 4°С, центрифугировали в течение 20 мин при 20000 д. Полученный преципитат отмыли 3,5%-ным полиэтиленгликоль-боратным буфером при тех же условиях, поместили на предметное стекло и высушили при комнатной температуре на воздухе, фиксировали 96% этанолом и исследовали в реакции им- мунофлуоресценции. При исследовании установили наличие антигена L-форм стрептококка группы А, который не выявлялся в РПГА и РАГА, и диагностировали хроническое инфицирование L-формами стрептококка.

Пример 2. Больная 3. поступила с диагнозом эритематозно-булезная рожа правой голени, рецидивирующая. В первый день болезни жалобы на слабость, головную боль, ломоту в теле, тошноту, красноту и отек на коже правой голени. Болезнь протео

О

о о о

кала остро: озноб, температура до 39,5°С, слабость, тошнота, боли распирающего характера в области правой голени, через 2-3 ч появились краснота, отек, боли в правой голени, на 2-й день на конце голени появились пузырьки с серозным содержанием,

Исследования антигенов проведены так же, как в примере 1 на 2,10.15 дни-болезни, через 1,3 месяца после выписки из стационара. Во всех случаях выявлены антигены L-форм стрептококка. Диагностировано хроническое инфицирование L-формами стрептококка. Через 6 мес. после выписки у больной развился рецидив заболевания.

Пример 3. Больная Л., 39 лет (история болезни 1739), страдающая часто рецидиви- рующей рожей правой нижней конечности в течение 7 лет, поступила в отделение с ди-. агнозом: эритематозная рожа правой нижней конечности, часто рецидивирующая. Получала бензилпенициллин по 500 000 ЕД- 6 раз в сутки в/мышечно в течение 8 дней. Общее состояние стало удовлетворительным на 3-й день болезни, лихорадка длилась 3 дня, эритема исчезала на 4-й день болезни, отек на 8-й день болезни. Региональный / имфоаденит сохранялся до 6-го дня болезни. На третий день болезни титры антигенов в РАГА составили: антиген бактериальной формы стрептококка 1:16, антиген L-форм (свободный) 1:16, антиген в составе ЦИК- 1:96. На 29-й день болезни титры составили 1:0, 1:0 и 1:64 соответственно. -Исследование преципитатов , полученых ПЭГ, на присутствие антигена L-форм стрептококка в составе ЦИК в указанные сроки показало положительный результат (на +2). Ранний рецидив эритематозной рожи правой нижней конечности развился на 10-й день болезни.

Пример 4. Больной В., 39 лет (история болезни № 3858), страдающий часто рецидивирующей рожей левой голени в течение 3 лет, поступил в стационар с диагнозом: эритематозная рожа левой голени, часто рецидивирующая. Получал бензилпенициллин в дозе 500 000 ЕД 6 раз в сутки в течение 9 дней в/мышечно. Исследования сыворотки крови проводили на 2,9 и 15-й дни болезни. В первые два срока был обнаружен свободный антиген L-форм стрептококка, на 15-й лень - в составе ЦИК (методом преципитации ПЭГ). Результаты диссоциации ЦИК подтвердили положительный результат, свидетельствующий о наличии специфических ЦИК, антиген L-форм в составе ЦИК обнаружен в титрах в РАГА 1:60. Присутствие специфических ЦИК при отсутствии сво- бодного антигена указывало на возможность развития рецидива. После лечения линкомицином, действующим на L- формы стрептококка, в дозе 0,5 г каждые 6 ч в течение 7 дней антигенов L-форм как в свободном состоянии, так и.в составе ЦИК

обнаружено не было. На протяжении 2,5 лет наблюдения у больного не было зарегистрировано рецидива рожи.

Пример 5. Больная 3., 3 лет (история болезни 154) поступила в больницу на 10-й

0 день болезни с диагнозом: двусторонняя пневмония. Был назначен пенициллин в течение 7 дней, затем ампициллин в течение 6 дней, состояние - медленная динамика. На 26-й день было проведено исследование на

5 микоплазменную инфекцию. Был выявлен антиген М. pneumoniae в составе ЦИК методом преципитации иммунных комплексов 3,5% ПЭГ (крупные комплексы, +3) и проведено лечение эритромицином в течение 6

0 дней. Через 7 дней повторное обследование показало наличие специфических ЦИК в сыворотке крови больного (на 2+. более мелкие). Повторное лечение эритромицином дало положительные результаты: состояние.

5 больного нормализовалось, антиген М. pneumoniae отсутствовал как в составе ЦИК, так и в свободном состоянии.

Пример 6. Больной Ш., 11 месяцев (история болезни 337), поступил с диагно0 зом: бронхит на 8-й день болезни. Получал оксициллин, полимиксин, эффекта не наблюдалось. На 12-й день болезни было проведено обследование с целью выявления микоплазменной инфекции. В РАГА были

5 выявлены следовые количества антигена М.

pneumoniae, что не давало возможности чет- ко поставить диагноз: респираторный микоплазмоз. Исследование на присутствие

специфических ЦИК методом осаждения их

0 ПЭГ и исследованием преципитата в РИФ показало наличие большого числа комплексов (2+), содержащих антиген М. pneumoniae. Была проведена специфическая последовательная терапия: рифампи5 цин и эритромицин в дозах 10 и 30 мг/кг соответственно в течение 6 и 7 дней, На 14 день отмечено значительное улучшение, специфических ЦИК не обнаружено. На 28-й день ребенок выписан в удовлетворитель0 ном состоянии, в течение последующих 6 месяцев обострения не наблюдалось.

Пример 7. Больная Анита Ш., поступила в отделение с диагнозом: ревматоидный артрит (хроническая форма). Было

5 проведено противовоспалительное и гормональное лечение с использованием бруфена и гидрокортизона по общепринятой схеме в течение 1,5 месяцев. Улучшение состояния на фоне проведенной терапии не наблюдалось.Перед изменением курса лечения было проведено обследование на микоплаз- менную инфекцию. В РАГА антигены микоп- лазмь. не обнаружены, микробиологический результат отрицательный. Выделение ЦИК- 3,5% ПЭГ и исследование преципитата в РИФ показало наличие в иммунных комплексах антигена М. fermentaus. Параллельно было проведено диссоциирование ЦИК, в диссоциированных образцах в РАГА обнаружен антиген М. fermentaus в титре 1:104. Рекомендовано лечение препаратами тетрациклина в течение 2 нед. Через 15 дн отмечено улучшение состояния больной и снижение клиниколабораторных показателей патологического процесса. С целью предупреждения рецидивов больной рекомендовано периодическое обследование на присутствие специфических ЦИК и поддерживающая терапия.

Способ обеспечивает большую информативность за счет выявления общих иммунных комплексов и специфических антигенов, прост и доступен, позволяет своевременно диагностировать наличие хронической инфекции, назначать соответствую- щее лечение и снизить число случаев рецидивов заболевания. Формула изобретения

Способ диагностики хронической инфекции, включающий смешивание сыворотки крови с буфером, выделение антигена с

последующей его идентификацией в имму- нохимической реакции и вынесение суждения, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве буфера используют боратный буфер рН 8,4 в соотношении 1:25, а для выделения антигена добавляют раствор полиэтиленгликоля с мол. м. 6000 до конечной концентрации 3,5%, инкубируют на холоду, центрифугируют, преципитат отмывают 3,5%-ным полиэтиленгликоль-боратным буфером, помещают на стекло, высушивают при комнатной, температуре на воздухе и фиксируют этанолом.

Изобретение относится к медицине и биологии, а именно к способам иммунодиагностики хронических инфекционных заболеваний. Целью изобретения является упрощение способа за счет выделения антигена из иммунных комплексов, циркулирующих в крови. Для этого к сыворотке крови обследуемого последовательно добавляют боратный буфер рН 8,4 в соотношении 1:25, добавляют полиэтиленгликоль с мол. м. 6000 до конечной концентрации 3,5%, инкубируют на холоде, центрифугируют, полученный преципитат отмывают 3,5 % -ным полиэтиленгликоль-бо.оатным буфером, наносят на стекло, высушивают на воздухе, фиксируют этаном и исследуют в иммунохи- мической реакции.