Способ регенерации растений земляники Советский патент 1991 года по МПК A01H4/00 

о

ю

Изобретение относится к. биотехнологии и может быть использовано в селекционных работах для размножения ценных генотипов, а также для генетического и фи- зиолого-биохимического излучения процессов морфогенеза земляники Целью изобретения является повышение выхода побегов и их укореняемости а также повышение жизнеспособности растений-регене- рантов Поставленная цель достигается тем, что на этапе культивирования эксплантатов для получения каллусной ткани в питательную среду Мурасиге - Скуга вводят дополнительно 0,5-2,0 мг/л кинетина 2 0-4,0 мг/л 2 4Д 1 0-3 0 мг/л шбберсллорои кислоты О 5-2 0 мг/л б-бензиламинопуриьа 1 0-3 0 мг/л индолилмаслянои кислоты 3 0-5,0 мг/л индо- лилуксусной кислоты и 2 0-4 0 мг/л к -нафти- луксусной кислоты При культивировании каллусной ткани до получения побегов в пи- тательную среду Мурасиге - Скуга вводят 03-1 0 мг/л кинетина, 0 5-2 0 мг/n гиббе- релловой кислоты 6 0-12,0 мг/л 6-бензила- минопурина 0 3-1 0 мг/л имцолилугсусной кислоты и 0 3-1 0 мг/л а -пафтилуксусиой кислоты Затем побеги пересаживают для укоренения на питательную средуМурасиге- Скуга с добавлением 03-1 0 мг л гиббе- релловой кислоты 1030 мг/л индо- лил масля ной кислоты и 03-1 0 а -нафтилуксусной кислоты После этого рас- тения-регенеранты культивируют дополнительно в течение 3 4 недель на питательной среде Мурасиге Счуга с введением в нее 10-3 0 мг/л гиббереллоооп кислоты и О 3- 1 0 милиндогилмасляной киспоты Способ позволяет повысить выход побегов более чем на 40%, укореняемость в 2 раза и повысить жизнеспособность рзстений-регене- в 4-6 раз обеспечивает возможность ускорения селекционного процесса в 2-3 раза 4 та5л чткявз «юд ю

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в селекционных работах для размножения ценных генотипов, а также для генетического и физиолого-биохимического излучения процессов морфогенеза земляники

Целью изобретения является повышение выхода побегов и их укореняемости, а также повышение жизнеспособности растений- регенерантов

Припер Способ регенерации растений земляники состоит из четырех этапов

На первом этапе получают каллусную ткани из эксплантатов вегетативных органов земляники В качестве эксплантатов берут или верхушечные меристемы или листья, или почки усов Эксплантаты помещают в культуральные сосуды содержащие питательную среду, в которую допопнитель- но вводят экзогенные регуляторы ростс) и

культивируют в течение 2 мес. при температуре 25°С и освещенности 1,5 тыс. лк.

В опыте три повторности и по 100 куль- туральных сосудов в каждой.

В качестве питательной среды используют питательную среду Мурасиге - Скуга следующего состава.

Макросоли; г/л: МЩМОз 1,65; KN03 1,90; 2НаО 0,44; MgSO-r 7H20 0,37; КН2РСЦО,17.

Микросоли, мг/л: Ыа2ЭДТАС7,8; РеЗСм 7Н20 27,8; NaMoC-4 2H20 0,25 ;CuSO 4 5Н20 0,025; НзВОз 6,2; MnS04 4H20 22,3; ZnSCM- 4H20 8,6;K.IO,83;CaC 2- 6H20 0,025.

Витамины, мг/л: В-|(тиамин) 0,4; мезои- нозит 100,0; сахароза 30,0 г/л; агар-агар 10,0 г/л.

Вводят экзогенные регуляторы роста.

В минимальной концепции, мг/л: кине- тинО,5;2,4Д2,0;ГК1,0; 6 БАП 0,5; ИМК 1,0; ИУКЗ,0; НУК2.0.

В средней концепции, мг/л: кинетин 1,0; 2,4Д 3,0; ГК 2,0; б БАП 1,0; ИМК2,0; ИУК 4,0; НУК 3,0.

В максимальной концепции, мг/л: кинетин 2,0; 2.4Д 4,0; ГК 3,0; 6 БАП 2,0; ИМК 3,0; ИУК 5,0; НУК4.0.

В результате на первом этапе осуществления способа из эксплантатов вегетатив- ных органов земляники получают в среднем: при минимальных добавках регуляторов роста - 62,60 и 66 культуральных сосудов с каллусными тканями; при средних - 81,76 и 84; при максимальных - 83,88 и 82 (табл. 1).

На втором этапе получают из каллусных тканей побеги с листьями. Для этого полученную на первом этапе каллусную ткань переносят в новые культуральные сосуды со свежей питательной средой Мурасиге - Скуга, в которую для образования из этой кал- лусной ткани дифференцированных зон и побегов с листьями добавляют экзогенные регуляторы роста.

Повторность трехкратная, в каждой - по 10 культуральных колб.

Контролем служат культуральные сосуды с меристематическими верхушками согласно известному способу. Температура и освещенность такие же, как и на первом этапе осуществления способа.

Добавки экзогенных регуляторов роста.

Минимальная концентрация, мг/л: кинетин 0,3; ГК 0,5; БАП 6,0; ИУК 0,3; НУК 0,3.

Средняя концентрация, мг/л: кинетин 0,5; ГК 1,0; 6 БАП 8,0; ИУК 0,5; НУК 0,5.

Максимальная концентрация, мг/л: кинетин 1,0; ГК2.0: 6 БАП 12,0; ИУК 1,0; НУК 1,0.

В результате через 2 мес, из каллусной ткани образуются побеги с листьями: при минимальных добавках регуляторов роста - в среднем 22, 25 и 22 побегов каждой повторности; при средних - 23, 26 и 23; при максимальных - 25,24 и 21 (табл. 2).

Третий этап осуществления способа - инициация роста корневой системы у побегов с листьями. Для этого полученные листовые побеги пересаживают в новые культуральные сосуды со свежей питательной средой Мурасиге - Скуга и с добавками экзогенных регуляторов роста, вызывающих рост корневой системы.

Срок культивирования 2 мес. Температура и освещенность такие же, что и на первых этапах осуществления способа.

Повторность трехкратная, в каждой - по 10 культуральных колб.

Контролем служат листовые побеги, полученные из меристематических верхушек согласно известному способу.

Добавки экзогенных регуляторов роста. Минимальная концентрация, мг/л ГК

0,3; ИМК 1,0; НУК0,3.

Средняя концентрация, мг/л: ГК 0,5; ИМК 2,0; НУК 0,5.

Максимальная кс щентрация, мг/л: ГК 1,0; ИМК 3,0; НУК 1,0

В результате чере-з 2 мес на пересаженных листовых побегах образуются корни: при минимальных добавках регуляторов роста в среднем у 19,22 и 17 побегов в каждой повторности; присредних-у21,25и21; при

максимальных - у 22, 20 и 18 (табл. 3).

Четвертый этап осуществления способа - устранение аномалий в росте корней и стеблей у растений-регенерантов. Для этого получаемые растения-регенеранты пересаживают в новые культуральные сосуды с питательной средой Мурасиге - Скуга с добавлением экзогенных регуляторов роста, способствующих получению жизнеспособных растений-регенерантов.

Повторность трехкратная, в каждой - по 10 культуральных колб,

Температура и освещенность такие же, как и на первых этапах культивирования. Срок культивирования пересаженных растений-регенерантов 3 недели.

Завершение последнего четвертого этапа получения растений-регенерантов земляники определяют по следующим показателям: центральная ось стебля имеет максимальную длину, завершается формирование листовой пластинки, корневая система мочковатая, хорошо разветвленная. Добавки экзогенных регуляторов роста.

Минимальная концентрация, мг/л: ГК 1,0; ИМКО.З

Средняя концентрация, мг/л: ГК 2,0; ИМК0.5.

Максимальная концентрация, мг/л: ГК 3,0; ИМК 1,0.

В результате через 3 недели растения- регенерангы завершают свой цикл развития: при минимальных добавках регуляторов роста в среднем получают 19, 20 и 17 растений жизнеспособных регене- рантов; при средних - 21, 22 и 19; при максимальных - 18, 19 и 17 соответственно (табл, 4).

Предлагаемый способ позволяет создавать новые формы растений для селекции земляники, получать ценные генотипы при повышенной жизнеспособности и укореняемое™ растений-регенерантов,

Формула изобретения Способ регенерации растений земляники, включающий вычленение эксплантатов, высадку их на питательную среду Мураси- те-Скуга для получения каллусной ткани, последующее культивирование при освещении (1-1,5) лк и температуре 25-27°С до получения побегов, пересадку побегов на среду для укоренения и получения растений-регенерантов, отличающийся тем,

В каждой повторности по 100 культуральных сосудов с каллусными тканями

что, с целью повышения выхода побегов и их укореняемое™, а также повышения жизнеспособности растений-регенерантов, высадку эксплантатов осуществляют на

питательную среду Мурасиге - Скуга, в которую вводят дополнительно 0.5-2,0 мг/л кинетина, 2,0-4,0 мг/л 2,4Д, 1,0-3,0 мг/л гибберелловой кислоты, 0,5-2,0 мг/л 6- бензиламинопурина, 1,0-3,0 мг/л индолилмасляной кислоты, 3,0-5,0 мг/л индолилуксусной кислоты и 2,0-4,0 мг/л а -нафтилуксусной кислоты, культивирование каллусной ткани до образования побегов осуществляют на питательной среде

Мурасиге - Скуга с введением в нее 0,3-1,0 мг/л кинетина, 0,5-2,0 мг/л гибберелловой кислоты, б,0-12,0 мг/л 6-бензиламинопури- на, 0,3-1,0 мг/л индолилуксусной кислоты, 0,3-1,0 мг/л а -нафтилуксусной кислоты,

пересадку побегов осуществляют на питательную среду Мурасиге - Скуга с добавлением 0,3-1,0 мг/л гибберелловой кислоты, 1,0-3,0 мг/л индолилмасляной кислоты, 0,3-1,0 мг/л а-нафтилуксусной кислоты,

полученные растения-регенеранты культивируют дополнительно в течение 3-4 недель на питательной среде Мурасиге - Скуга с введением в нее 1,0-3,0 мг/л гибберелловой кислоты и 0,3-1,0 мг/л индолилмасляной кислоты.

Таблица 1

Т а б л иц а 2

Таблица 3

Таблица 4