Способ определения активных красителей в крови Советский патент 1991 года по МПК G01N33/48 

С1

(ГО

N r v4Ir N N

N ci

OHN-Ч JN

crcox %н.

5Ма

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям и может быть использовано для количественного определения активных красителей. Целью способа является повышение чувствительности и специфичности способа. Способ позволяет определять количество каждого из красителей ярко-красного 6С и черного К в крови при одновременном их присутствии в организме за счет полного их извлечения из биосубстрата и повышения специфичности разделения красителей. Количественное определение красителей в крови проводится предварительной обработкой проб диметилформамидом с последующим кипячением в течение 1 мин, упариванием до объема 0,5 мл и проведением тонкослойной хроматографии на пластинках с широкопористым силикагеле i (силуфол). Хроматография проводится путем нанесения проб крови после предварительной обработки на пластинку с последующим элюированием в хроматогра- фической системе изобутиловый спирт - ди- метилформамид - вода в объемном соотношении 11:3:11, а количество активных красителей определяют по калибровочному графику путем сравнения площади разделенных пятен с эталоном. Чувствительность способа 0,01 мг в пробе, точность 96,0 ±3,0%. 5 табл. лвижв с

Анализируемые пробы наносят на пластинки с широкопористым смликагелем (си- луфол) и для элюирования пластинку помещают в стакан с хроматографической системой изобутиловый спирт - диметил- формамид - вода в объемном соотношении 11:3:11. Процесс элюирования занимает 1 ч. Затем пластинки вынимают и подсушивают. С помощью планиметра измеряют площади окрашенных пятен на пластинке. Количественное определение красителей осуществляют по калибровочному графику путем сравнения площади полученных разделенных пятен с эталоном. Для этого строится калибровочный график - эталон.

Калибровочный график строится следующим образом. Пробы крови контрольных животных объемом 1 мл экстрагируют 2 мл диметилформамида, содержащего различные концентрации активных красителей ярко-красного 6С и черного К с последующим кипячением в течение 1 мин. Белок удаляют центрифугированием при 8000 об/мин, а пробы упаривают до объема 0,5 мл. На пластинку с широкопористым силикагелем наносят предварительно обработанные-пробы крови, содержащие красители активный ярко-красный 6С и черный К в различных концентрациях. Пластинку помещают 9 хроматографическую систему изобутиловый спирт - диметилформамид - вода в объ- емном соотношении 11:3:11. Процесс элюирования занимает 1 ч. Затем строят график зависимости площади полученных пятен на пластинке от концентрации красителя.

В предлагаемой хроматографической системе изобутиловый спирт-диметилформамид- вода анализируемые красители обладают различной подвижностью (Rf), в результате чего повышается специфичность разделения двух соединений и чувствительность, что позволяет количественно опреде,N02 Of-Со 5,6:4-1

лять эти красители при одновременном их присутствии в кр{}ви.

В табл.1 приведены значения подвижности анализируемых красителей в хроматографической системе изобутиловый спирт - диметилформамид - вода в объемном соотношении 11:3:11 и в этой же системе при других объемных соотношениях, а также в известной системе.

Предварительная экстракция проб крови диметилформамидом с последующим кипячением в течение 1 мин позволяет более полно выделить красители из крови, что повышает чувствительность способа.

В табл.2 представлен выбор оптимального растворителя для экстракции активных красителей ярко-красного 6С и черного К из крови.

В табл.3 представлен выбор оптимального времени кипячения проб крови для денатурации белков крови.

В табл.4 представлены нормы точности измерений предлагаемого способа.

В табл.5 представлены данные по сравч

нению чувствительности предлагаемого и известного способов.

Технико-экономическая эффективность предлагаемого способа по сравнению с известным состоит в том, что он позволяет

раздельно определять активные красители ярко-красный 6С и черный К при одновременном их присутствии в крови затравленных животных с заданной степенью чувствительности и точности определения,

что позволяет использовать его для проведения са нитарно-токси кол огичес кого контроля и исследования

Формула изобретения Способ определения активных красителей в крови путем экстракции органическим растворителем и последующего разделения методом тонкослойной хроматографии, о т л-.

ичающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и специфичноеш способа, экстракцию проводят диметилформами- дом с последующим кипячением в течение

1 мин, осаждают белки, центрифугируют и упаривают супернатант, а разделение проводят в системе изобутиловый спирт - диме- тилформамид - вода в соотношении 11:3:11.

Таблица 1

Таблица 2

ТаблицаЗ

Таблица 4

Таблицаб