Способ определения функционального состояния кроветворения у экспериментальных животных Советский патент 1991 года по МПК A61B10/00 

Изобретение относится к цитогенетике и может быть использовано в медико-биологических исследованиях

Цель изобретения - выявление на более ранней стадии функционального состояния костномозгового кроветворения, на более ранних стадиях развития кроветворных клеток. Способ позволяет осуществлять контроль за направлением перестройки в организме на основе интенсивности дифференцирования мегакариоцитарного, лейкоцитарного и эритроидного рядов кроветворных клеток.

Способ осуществляют следующим образом.

На стандартно приготовленных микропрепаратах хромосом из популяции клеток костного мозга проводят анализ метафаз- ных пластинок без выборки по степени спирализации, но с полным числом, минимальным наложением и четко различимой морфологией хромосом, выявляют их морфологические типы. Путем подсчета в каждой метафазной пластинке числа субте- лоцентрических, акроцентрических и мета- центрических хромосом определяют типы

О Ч

XI

VJ

4

х|

хромосомных наборов в статически достоверных количествах и считают их соотношение. Затем определяют митотическую активность клеток костного мозга путем подсчета клеток в митозе на 1000 просмотренных. Данные митотической активности при различных экстремальных воздействиях сравнивают с результатами обследования контроля и выявляют отклонения.

Пример 1. Крысе (самец массой 180 г) вводили подкожно скипидар из расчета 1 мл на 100 г массы. На третьи сут, после введения скипидара животное умертвляли, готовили препараты хромосом из костного мозга по общепринятой методике.

Отбор метафазных пластинок хромосом проводили без выборки по степени спира- лизации, но с полным числом, минимальным наложением и четко различимой морфологией хромосом. В каждой такой ме- тафазной пластинке считали общее число и количество субтвлоцентрических, акроцен- трических и метацентрических хромосом.

Из 42 хромосом набора насчитывали в типе f (мегакариоцитарного ряда) 26 акро- центрических и 14 метацентрических, в типе Н (лейкоцитарного ряда) - 24 акроцентрических и 16 метацентрических, в типе Ш (эритроидного ряда)- 22 акроцентрических и 18 метацентрических и, кроме того, в каждом из них - по одной паре крупных субтелоцентрических аутосом. Затем вычисляли процентное соотношение типов хромосомных наборов. Так, у обследованного животного на третьи сутки в состоянии асептического воспаления обнаружили 22,7% хромосомных наборов I типа, 68,2% II типа и 9,1% - II типа.

Далее определяли митотическую активность путем подсчета клеток в митозе на 6000 просмотренных и делали пересчет на 1000 клеток костного мозга - 25,0 на 1000.

Содержание лейкоцитов в периферической крови 9,8 х 109/л.

Пример 2. Крысе (самец массой 180 г) контроль и анализ проводили по описанному способу. У нее насчитывали 18,7% хромосомных наборов I типа, 43,8% - II типа, 37,5% - III типа, митотическая активность 14,2 на 1000 клеток, Количество лейкоцитов в периферической крови 7,56 109/л.

На большом фактическом материале - пяти экспериментальных моделях (гипоксия, спленэктомия, асептическое воспаление, кровопотеря, рентгеновское облучение), прослеженных в динамике, дсг- казано, что по предлагаемому способу возможно точнее осуществлять диагностику состояния костномозгового кроветворения

при изучении экстремальных воздействий физической, химической и биологической природы на организм млекопитающих в медико-биологических исследованиях.

Формула изобретения

Способ определения функционального состояния кроветворения у экспериментальных животных при экстремальном воздействии, заключающийся в отборе для анализа метафазных хромосомных наборов из популяции клеток костного мозга экспериментальных животных, отличающий- с я тем, что, с целью раннего выявления

изменений, осуществляют отбор метафазных хромосомных наборов без выбора по степени спирализации, подсчитывают в них количество различных морфологических типов хромосом, устанавливают типы хромосомных наборов, определяющих дифференцировку основных рядов кроветворных клеток, и высчитывают их соотношение, при этом определяют митотическую активность клеток костного мозга, а затем

сравнивают интенсивность образования различных структурно-функциональных типов хромосомных наборов в контроле и при действии экстремальных факторов по ее изменению определяют функциональное состояние кроветворения.

Изобретение относится к цитогенетике и разработано на основе выявленной четкой соподчиненности между типами функционально-структурной организации метафазных хромосомных наборов и образованием определенных типов кроветворных клеток в костном мозге С целью осуществления контроля за направлением гемопоэза и выявле- ния патологии осуществляют отбор хромосомных наборов без выбора по степени спирализации, выявляют типы хромосомных наборов и подсчитывают их соотношение. Затем определяют митотиче- скую активность костного мозга. Результаты по интенсивности образования различных типов хромосомных наборов и митотической активности, полученные при действии экстремальных факторов, сравнивают с контролем и выявляют патологию и адаптивные изменения в организме на до- клеточном-хромосомном уровне по направлениям дифференцировки профилирующих родоначальных кроветворных клеток. Ё