Способ выделения дезоксирибонуклеиновой кислоты из органов животных Советский патент 1992 года по МПК C07H21/00 

Изобретение относится к получению биохимических препаратов, конкретно к получению ДНК из органов животных, и может быть использовано для крупномасштабного выделения ДНК.

Целью изобретения является повышение выхода ДНК и сокращение времени выделения.

Измельченный до состояния фарша орган замораживают путем продавливания фарша через решетку с размерами отверстий 5-8 мм в сосуд, содержащий жидкий азот или смесь эфир-сухой лед.

Пример 1. 1 кг селезенки пропускают через мясорубку. Фарш помещают в цилиндр пресса, на выходе которого имеется решетка с отверстиями диаметром 5 мм, и продавливают в жидкий азот. После замора- живзния в течение 3 мин фарш извлекают из сосуда при помощи сита, а затем помещают в морозильник (t -20°С), где он хранится до выделения. Перед выделением фаршу дают возможность оттаять (20 мин), затем размельчают при помощи гомогенизатора и ресуспендируют в 5 л стандартного солевого раствора, фильтруют через пластмассовую сетку с ячейками размером 2 мм и центрифугируют при 2500 об/мин (2000д) в течение 10 мин при 0°С. Осадок повторно гомогенизируют в 5 л стандартного солевого раствора и центрифугирование повторяют (5 мин). Осадок ресуспендируют в 5 л стандартного солевого раствора, добавляют 1,2 л 17%-ного раствора додецилсульфата натрия и нагревают до 65°С. Раствор охлаждают до 10°С и добавляют 5 л раствора 5 М NaCI, имеющего температуру 0°С. Раствор центрифугируют в течение 30 мин (2500 об/мин). ДНК осаждают из надосадочной жидкости одним обьемом этанола. Осадок последовательно промывают в 60. 70, 80, 100%-ном изопропаноле. Содержание белка в образце определяют методом Лоури, содержание РНК- путем хроматографии на оксиапатите. Характеристика ДНК: выход 760 мг на 100 г фарша (что составляет 94% исходной ДНК, белка 0.8%, РНК 2.0%, мол.м. 2,6-107Д).

Пример 2. 1кг селезенки коровы пропускают через мясорубку. Фарш помеё

vj О (Я OJ О О

щзют в цилиндр пресса, на выходе которого имеется решетка с отверстиями диаметром 8 мм и продавливают в смесь диэтиловый эфир сухой лед. Все остальные операции проводят, как в примере 1.

Пример 3. 1 кг селезенки коровы пропускают через мясорубку. Фарш помещают в цилиндр пресса, на выходе которого имеется решетка с диаметром отверстий 7 мм и продавливают в жидкий азот. Все осталь- ные операции проводят как в примере 1.

Пример 4, 1 кг почек коровы пропускают через мясорубку. Фарш помещают в цилиндр пресса, на выходе которого имеется решетка с диаметром отверстий 5 мм, продавливают в жидкий аэот. Все остальные операции проводят как в примере 1.

Аналогичным образом осуществляют выделение ДНК из легких, сердца и печени. Результаты выделения отражены в таблице.

Таким образом, изобретение позволяет повысить выход ДНК и сократить время выделения ДНК с мол.м. не менее 10 Д, содержащей не более 2.0% белка, осадок которой имеет белый цвет (цвет ДНК иногда включают в технические условия, например. ТУ- 10П-555-71. ДНК высокополимерная из селезенки крупного рогатого скота).

Формула изобретения Способ выделения дезоксирибонуклеи- новой кислоты из органов животных, вклю- чающий замораживание органа, измельчение, гомогенизацию, отмывку ядерного материала гомогената. депротеи- низацию и спиртовое осаждение ДНК, о т - личающийся тем, что. с целью повышения выхода и сокращения времени выделения, орган измельчают до состояния фарша, а замораживание осуществляют путем продавливания фарша через решетку с диаметром отверстий 5-8 мм в жидкий азот или смесь диэтиловый эфир - сухой лед.

Изобретение относится к получению биохимических препаратов. Цель изобретения состоит в увеличении выхода ДНК и сокращении времени выделения. Орган, измельченный до состояния фарша, продавливают через пресс, на выходе которого имеется решетка с диаметром отверстий 5-8 мм, е жидкий азот или смесь диэтиловый эфир - сухой лед. Выход ДНК селезенки коровы 770-830 мг на 100 г сырья. Время выделения 3.5 ч. 1 табл.