Полимерный гидрогель для обнаружения фосфорорганических соединений в растворе Советский патент 1992 года по МПК C08L33/26 B01J20/26 C12N11/08 C08L33/26 C08L39/06 

Изобретение относится к химии полимеров и прикладной энзимологии, в частности к композициям, используемым для обнаружения в растворах фосфорорганических соединений, и может быть применено в различных аналитических приборах и устройствах.

Цель изобретения - повышение чувствительности гидрогеля по отношению к фос- форорганическим соединениям.

Пример. 15 мг бутирилхолинэстера- эы сыворотки крови лошади растворяют в 15 мл 0.2 М бикарбонатного буфера (рН 8,2), добавляют при перемешивании 2 мг хлоран- гидрида акриловой кислоты и проводят реакцию при 0°С в течение 1 ч. Число введенных в молекулу холинэстеразы ненасыщенных углерод-углеродных связей, рассчитанных по уменьшению числа титруемых тринитробензолсульфокислотой аминогрупп белка, равно 7. К полученному раствору добавляют при 0°С смесь мономеров, состоящую из 1.21 г акриламида, 0.14 г N.N- метиленбисакриламида и 1,5 мл воды, а также 0,01 г М.М.г.Ы-тетраметилэтилендиамина и продувают аргоном 15 мин. После этого добавляют 0,01 г персульфата аммония и смесь полимеризуют 1 ч при 0°С. Образовавшийся гель измельчают на нейлоновых ситах с диаметром 0,5 мм, промывают водой до полного экстрагирования несвязанной холинэстеразы и оставляют в бидистилляте для равновесного набухания. Содержание холинэстеразы в полимеряой

VJ

О СП ОС

00

композиции (гель), найденное по разности количество введенного в реакцию и экстрагированного из геля белка, составляет 0,1 мас.%. Содержание сшитого сополимера, определенное гравиметрически после высу- шивания образца до постоянной массы и учета содержания холинэстеразы, составляет 9 мас.%.

Для определения предела обнаружения фосфорорганическото соединения навеску гранулы геля (0,25 г) инкубируют с растворами различной концентрации (10 -10 г/л) 0,0-диметил-0-2,2-дихлорвин ил фосфата (ДДВФ,) 2,5 мин, после чего определяют ферментативную активность геля (в % от исходной). Активность датчика по а-нафти- лацетату измеряют спектрофотометрически при 480 нм по реакции с п-нитрофенилдиа- зонитборфторидом (прочным красным ГГ). Предел обнаружения ДДВФ, регистрируе- мый по снижению активности датчика на 10%. составляет г/л.

Данные по примерам 1-9 приведены в таблице.

Пример 10 (известный). 20 мг эритро- цитарной ацетилхолинэстеразы крови лошади растворяют в 20 мл 0,1 М фосфатного

буфера (рН 7,8), добавляют при перемешивании 7 мг акролеина и проводят реакцию при 4°С в течение 5 ч. Число введенных в молекулу фермента ненасыщенных связей равно 2. В остальном процесс аналогичен примеру 1.

Данные по примерам 1-10 приведены в таблице.

Формула изобретения

Полимерный гидрогель для обнаружения фосфорорганических соединений в растворе, включающий содержащий холи- нэстеразу полимер и воду, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности гидрогеля по отношению к фос- форорганическим соединениям, в качестве содержащего холинэстеразу полимера, он включает сшитый гидрофильный сополимер, содержащий 0,5-19 мас.% холинэстеразы, связанной с ним с помощью-C-WH(| О

групп, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Содержащий

холинэстеразу

полимер3,1-20,4

ВодаОстальное доЮО.

Изобретение относится к химии полимеров и прикладной энзимологии и может быть использовано в различных аналитических приборах и устройствах. Изобретение позволяет создать датчик, обладающий пониженным (в 3,3-3.7 раза) пределом обнаружения фосфорорганических соединений в растворе, Это достигается получением полимерного гидрогеля, включающего сшитый гидрофильный сополимер, содержащий ко- валентно связанную с ним с помощью -С(0)- NH-rpynn холинэстеразу, и воду при следующем соотношении компонентов, мае. %: сшитый сополимер 3,1 -20,4: вода до 100. 1 табл. Ј