Способ определения иммуногенности вакцин против хламидиозов сельскохозяйственных животных Советский патент 1992 года по МПК A61K39/118 C12Q1/00 

жигкм пых и ргкС Пгиплссцзптоп ,з очагов энзоотии зг. богсьльиг, и срзамзмпи показателей с прот:; ;:;:; / ем инфекционного процесса ч 1л-. рс бат: .о Л г;с: .эсти обнаружено отсутствие згщчтной функции этих антител npoini ;сламидиознсго аборта о соц.

Известен способ контроля иммупоген- иости хлзмидиозмых язкцин по проявлению клинических призмами заболевания в БИДЭ с ортон у Еакц /.ш .ропапних и ингэктных живот: ых пссг:; контрольного заражения эпизоотическим ..и/иму.п;.; возбудителя. Для биологического контроля нммуногеннооти хламидиозных сс -. цим чаще есего мопользу- ют беременных моро;сих спинок.

Однако оценке иммунсгенности вакцин на привитых и ннтактных беременных морских спинках по проявлению клинических прнзнгкоо после контрольного заражения эпизоотическим и;таммом мало достоверна вследствие разного проявления заболевания и, соответственно, характера проявле- ння клинических признаков хламидиозного аборта у овец и морских свинок,

Кроме того, метод биологического конт- роля вакцин на лабораторных животных но стандартен, поскольку на результаты влияют возраст, пол, питание, содержание животных.

Целью изобретения я лпется повыше- ние достоверности за счет стандартизации способа.

П р и м е р 1. Две группы морских соинок вакцинируют пертрзльно препаратом атте- нуировпнкого штамма хламидий (живая вак- цина) аборта оьс-ц. Перзую группу морских свинок, а также нитактных случают с f..i и через 21 день после вакцинации их заражают эпизоотическим штаммом. Иммуногспность закцин в г.той группе оценивают традиционным способом по физиологическому состоянию пакцинкрозонных и интак- тных животных после контрольного заражения. Результаты определения имму- нсгенности жнсгй глтенупрсг.пннсй вякци- ны традициом;1ым методом (исход беременности у акцинированных и интак- тных г:ооских CTVUIOK после контрольного заражения зпиг-оотическим ) при- Еедены в табл.1.

Во второй гпуппе в кциннроалнных

NIOpCKHX CDL1HO SlMf.lVHOrSHHOCTb ОЦСМИПЗют по прадлап.;ог-.7 способу.

В табл.2 прпоедоны результаты опреде- лснил иммуногс;:нсст П жппой аттснуиро- г::нн.тл аакщ-.bVi по пр длогс1омо у cnocoiy (сс ..гслг.ция хлг - .-а ий ил срганс-в с-пкцяяи- pj i; Muix и МН: .-.тнь;х мс;:г,. .1 . г;п::кок пссле контрольного заражения эпизоотическим штаммом).

В первом опыте (габл.1) среди вакцинированных морских спинок абортов нет, однако однозначно судить об иммуногенности препарата невозможно, так как в контроле у интзктиых спинок эпизоотический штамм ,е не вызывает аборты, Предложенный способ определения иммучогенности вак- Ц ..н (табл.2) позволяет получить достоверное заключение. Контроль срабатывает всегда, так как на размножение хламидий эпизоотического штамма в органах интакт- ных морских свинок не оказывают влияния посторонние причины (оозраст, пол. питание, содержание животных, различия о проявлении патогенеза инфекции и т.д.) и нет сомнений, что в органах вакцинированных животных хламидий не выявляются лишь по той причине, что их организм приобрел выраженную устойчивость к инфицирова- нию эпизоотическим штаммом возбудителя, поэтому можно сделать вывод об иммуногенности профилактического препарата.

П р и м е р 2. Эффективность предлагаемого способа определения иммуногенности проверена на двух инактивированных вакцинах - корпускулярной, приготовленной по методике Стэмпа из частично очищенных и концентрированных дифференциальным центрифугированием хламидий убитых 0,5%-ным формалином, и вакцине из растворимого антигена. Обе вакцины изготовлены из штамма 2Т хламидий аборта овец. Инфекционный титр исходной биомассы хламидий 10 ЭЛДоО/0,3 мл. В качестве адыссанта использовано вазелиновое масло с 4% ланолина.

Две группы беременных морских свинок вакцинируют подкожно каждым из вариантов вакцины и через 30 сут после иммунизации их заражают перорально эпизоотическим штаммом. Через 15 сут после контрольного заражения животных усыпляют эфиром, в асептических условиях извлекают регионспные лимфатические узлы и паренхиматозные органы. 10%-ной суспензией органов заражают7-суточные развивающиеся куриные эмбрионы по 0,3 мл в полость желточного мешка.

Сразнительные данные по иммуногенности инактивированных вакцин против хламидиозного аборта овец приведены в табл.3.

Таким образом, вариант вакцины из корпускулярного антигена индуцирует в организме привитых животных напряженный иммунитет; ни у одного из вакцинированних /xiuicmiMX хлэмидии эпизоотического штамма --. иыявляютс ; о органах. Оторой вариант РИЦИНЫ и pacTnoL Mf. -oro антигена несмотря LI: способность стимулировать выработку сысского ти-1рЈ КОМПЛСМРИЧСЙЯ- знп&ющ -- Х антител осызсротке крсвм м мму- низиросгпнмх :::ипогкых на 2-3 порядка выше, чем пакп.ина из корпускулярного антигена, обладает низке: ; г.;;отектипностью, защищая от заражения эпизоотическим штаммом лишь пслоонну вакцинированных животных.

Использование предложенного способа определения иммуногс ности инактиои- ровзнных и хлгми/;иозных РЭКЦИН по сравнению с существующими способами повышает стандартность и достоверность определения протективной активности хлп- мидиознь;х азкцин; псзссляет использовать для биологического контроля оакцин экспе- риментальсих животных любого пола; при

достаточном количестве используемых о- опыте животных (не менее 10) можно оцени- пать иммуногонность профилактических средств в процентах, т.е. ввести количественную оценку напряженности иммунитета.

Формула изобретения Способ определения иммуногенности вакцин против хломидиозов сельскохозяйственных животных, включающий зоеденио исследуемой сакцикы беременным морским СБИИКГ.М с последующим заражением вирулентным штаммом возбудителя и оценкой иммуногенности вакцины, отличающийся тем, что, с целью повышения достоверности за счет стандартизации способа, после заражения из морских осинок извлекают лимфоидные и паренхиматозные органы, полученную суспензию вводят в куриные эмбрионы и иммуногенность вакцины оценивают по их жизнеспособности.

Таблица 1

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для определения протекчианой активности инактивирован- ных и живых вакцин прзтиз хяамидиозз овец. Цель изобретения - повышение достоверности за счет стандартизации способа. Способ заключается в том, что иммуногенность вакцин против хламидиозя оценивают про результатам реизоляции хлэмидий из реги- онарных лимфатических узлов (подчелюстИзобрзтение относится к ветеринарии и может быть использовано для контроля иммуногенной активности инактипировзн- ных и живых вакцин из аттенуированных штаммов против хламидиозов сельскохозяйственных животных. Известен способ оценки иммуногенно- сти (протехтивной способности) хламидиоз- ных вакцин по серологическим показателям сыворотки кооэн ммунизировонных лэбоные, заглоточные) и паренхиматозных органов (печень, селезенка) от вакцинированных морских свиних после контрольного заражения их эпизоотическим штаммом возбудителя. 8 качестве индикаторной системы используют 7-суточные развивающиеся куриные эмбрионы, зараженные в полость желточного мешка суспензией из вышеназванных органов. Если вакцина индуцирует напряженный иммунитет, то хла- мидии эпизоотического штамма элиминируются из организма подопытного животного и, соответственно, развивающиеся куриные эмбрионы, зараженные суспензией из органов этих морских свинок, остаются живыми весь срок наблюдения. В случае выработки недостаточной резистен- тности возбудитель находит условия для размножения в обозначенных органах, поэтому выявляется в индикаторной системе - развивающихся куриных эмбрионах, вызывая их гибель. Выявление хламидий осуществляют микроскопией окрашенных по Стэмпу мазков-отпечатков из стенок желточных мешков погибших эмбрионов. Хламидий легко обнаруживают в виде красных точек на зеленом фоне препарата. 3 табл. раторных животных, преимущественно в реакции связывания комплемента (РСК). Серологические исследования сыворотки кроаи иммунизированных хлэмидисзны- ми вакцинами животных не отражают прямых коррелятивных связей между уровнем комплементсвязывающих антител в кроаи и напряженностью иммунитета. При изучении динамики накопления компл - мент связывающих антител а крови больных (Л с о о о со N3

П р и м о ч а н и е. Числитель -- количество исследованных органов, знаменатель - выделено хлзмидий.

Таблица 2