Способ определения @ -аминоизовалериановой кислоты Советский патент 1992 года по МПК G01N21/78 

Изобретение Относится к аналитической химии, а именно к способам определения а -аминоизовалериановой кислоты (валина), и может быть применено в практике заводских контрольно-аналитических лабораторий, центральных з.аводских лабораторий химических предприятий, при биохимических исследованиях. Способ относится к числу массовых.

Известен способ определения аминокислот путем обработки нингидрином в среде органического растворителя с последующим фотометрированием образующегося окращенного раствора,

Способ характеризуется малой селективностью, и трудоемкостью процесса определения.

Наиболее близким по техническому решению и достигаемым результатам к предлагаемому является способ определения аминокислот, в том числе и «-аминоизовалериановой кислоты, заключающийся в обработке анализируемой пробы водным раствором 2,4,6-тринитробензолсульфокислоты в присутствии боратного буфера (рН 9,3). последующем термостатировании при 30°С В течение 30 мин, обработке раствором формалина и определении оптической плотности образующегося окрашенного раствора.

Способ неселективен в отношении а аминоизовалериановой кислоты, так как подобным образом могут быть определены и другие аминокислоты, характеризуется трудоемкостью и значительными затратами времени на его выполнение.

Цель изобретения - повышение селективности определения и упро11;ение способа.

Поставленная цель достигается с помощью предлагаемого способа, который заключается в том, что анализируемую пробу растворяют в этаноле и обрабатывают этанольным раствором 2-метил-4,6-динитрофенола с последующим фотометрированием образующегося окрашенного раствора.

Способ осуществляется следующим образом.

Анализируемую пробу растворяют в этаноле обрабатывают этанольным раствором 2-метил-4,6-динитрофенола и фотометрируют образующийся окрашенный раствор.

Пример 1. Качественное определение а-аминоизовалериановой кислоты.

Около 2 мг ог-аминоизовалериановой кислоты вносят в пробирку и прибавляют 3 мл этанола. Содержимое пробирки встряхивают 5 мин обрабатывают 0,5 мл 0,02%-го раствора 2-метил-4,6-динитрофенола в этаноле. Появляется желтое окрашивание. Чувствительность реакции 2 мкг/мл.

При м е р 2. Количественное определение а-аминоизовалериановой кислоты. Построение калибровочного графика.

В пять пробирок вносят 0,5; 1,0; 1.5; 2,0 и 2.5 мл 0,004%-го раствора о:-аминоизовалериановой кислоты в этаноле и соответственно 3,0. 2.5. 2,0, 1,5, 1,0 мл этанола. В каждую пробирку прибавляют по 0,5 мл 0,02%-;ного /раствора 2-метил-4,6-динитрофенола в этаноле и через 15 мин измеряют оптическую плотность образующихся окрашенных растворов на спектрофотометре СФ-26 при длине волны 412 нм в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор, полученный в контрольном опыте. По результатам измерений строят калибровочный график..Светопоглощение окрашенных растворов подчиняется закону БугераЛамберта-Бера в интервале концентраций 5-25 мкг/мл. Методом наименьших квадратов рассчитывают уравнение калибровочного графика, которое в данном случае имеет вид

D 0,00898 С + 0,00430, где D - оптическая плотность;

С - концентрация анализируемого вещества в фотометрируемом растворе, мкг/мл.

Методика определения. Около 0,02 г (точная навеска) а. -аминоизовалериановой кислоты растврряют в смеси 1,0 мл воды и 10-15 мл этанола в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят общий объем до метки этанолом (раствора А). 5 мл раствора А

вносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят содержимое колбы до метки этанолом (раствор Б). 2 мл раствора Б помещают в пробирку, прибавляют 1,5 мл

этанола, 0,5 мл 0,02 %-го раствора 2-метил4,6-динитрофенола в этаноле и дальнейшие операции осуществляют по схеме, указанной для построения калибровочного графика. Количественное содержание

а-аминоизовалериановой кислоты определяют по уравнению калибровочного графика и пересчитывают на навеску. Результаты определения и метрологические характеристики представлены в таблице 1.

Предлагаемый способ по сравнению с прототипом характеризуется более высокой селективностью. Так, в отличие от прототипа он позволяет определять а-аминоизоваяериановую кислоту в присутствии

других о:-аминокислот: о;.-амино-/3-(п-оксифенил)-пропионовой кислоты, а-амино

- -метилвалериановой кислоты, а-аминор-оксипропионовой кислоты, а-аминоглутаровой кислоты, угамида глутаминовой кислоты, а-аминопропионовой кислоты, а -амино- -фенилпропионовой кислоты, а, е-диаминокапроновой кислоты, а-амино-у-метилмеркаптомасляной кислоты, пирролидин-а-карбоновой кислоты.

По сравнению с прототипом предлагаемый способ в два раза сокращает продолжительность определения (с 40 до 18-20 мин), не содержит трудоемких операций и уменьшает общее число аналитических операций

с 8 до 4,

Сравнительная характеристика предлагаемого и известного способов приведена в табл. 2.

Формула изобретения

Способ определения а-аминоизовалериановой кислоты путем растворения анализируемой пробы в растворителе и

обработки цветореагентом с последующим фотометрированием образующегося окрашенного раствора, отличающийся тем, что, с целью повышения селективности и упрощения способа, в качестве растворителя применяют этанол, а в качестве цветореагента - этанольный раствор 2-метил-4,б-динитрофенола. Результаты 5, 17128416 Таблиц, a1 количественного определения а-аминоизовалериановой кислоты

Изобретение относится к аналитической химии, в частности к определению а- аминоизовалериановой кислоты. Цель изобретения - повышение селективности и упрощение способа. Определение ведут путем растворения анализируемой пробы в этаноле и обработки этанольным раствором 2-метил-4,6-динитрофенола с последующим фотометрированием образующегося окрашенного раствора.2 табл.

Сравнительная характеристика преллагаемого и известного способов

Сравнительные паПредлагаемый способ раметры

лективность

Позволяет селективно определять о( -аминоизовалериановую кислоту в присутствии других с -аминокислот; /-амино- 3-(п-оксифенил)-пропионовой кислоты, с -амино- -метилвалериановой кислоты, о(-амино-/ -оксипропионовой кислоты, о( -аминоглутаровой кислоты, -амида глутаминовой кислоты,d -аминопропионовой кислоты, о(.-амино-Л-фенилпропионовой кислоты, «( - -диаминокапроновой кислоты, с -амино- -метилмеркаптомасляной кислоты,пирролидин-о(-кар6оновой кислоты

(взятие навески,раствореисло аналитичесих операций ние, обработка цветореагентом, фотометрирование)

Наличие трудоемких опера ций

Продолжительность одного определения

Таблица2

Известный способ

Не позволяет селективно определять о(.-аминоизовалериановую кислоту в присутствии других о -аминокислот: с -амино-Л- (п-оксифениллропионовой кислоты, о(. -амино-/3-метилвалериановой кислоты, 0 -амино-/3-оксипропионовой кислоты, о(-аминоглутаровой кислоты, (Г-амида глутминовой кислоты, (.-аминопропионовой кислоты, oi-амино-УЗ-фенилпропионовой кислоты, о(,-диаминокапроновой кислоты, о{-амино-/-метилмеркаптомасляной кислоты, пирролидин-оС-карбоновой кислоты

8 (взятие навески, растворение, обработка цветореагентои, термостатирование, охлаждение реакционного раствора, обработка раствором формали на, фотомет риро ва ние

Термостатирование с реактивом 30 мин при

и О мин